瓠瓜栽培品種細(xì)菌性果斑病的抗性鑒定

羅群，仇智靈，孫超，高其康，樓兵干*

(1.浙江大學(xué) 生物技術(shù)研究所，浙江 杭州 310058； 2.杭州市臨安區(qū)植物檢疫站，浙江 杭州 311300;3.浙江大學(xué) 農(nóng)生環(huán)測(cè)試中心，浙江 杭州 310058)

瓜類細(xì)菌性果斑病是由西瓜噬酸菌(Acidovoraxcitrulli)[1]引起的一種毀滅性種傳病害，危害西瓜、甜瓜、哈密瓜、南瓜等葫蘆科作物，在新疆、內(nèi)蒙古、臺(tái)灣、吉林等地均有發(fā)生，給瓜類產(chǎn)業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。前人對(duì)西瓜、甜瓜和哈密瓜栽培品種和種質(zhì)資源開展了細(xì)菌性果斑病抗病性研究，研究結(jié)果表明，不同瓜類品種間存在抗性差異[2-3]。截至目前，未見不同瓠瓜(Lagenariasiceraria(Molina)Standl.)品種對(duì)細(xì)菌性果斑病的抗病性研究。瓠瓜原產(chǎn)于印度和熱帶非洲，又名長(zhǎng)瓜、蒲瓜、葫蘆瓜、夜開花等，是我國(guó)南方主要蔬菜之一[4]。

西瓜噬酸菌引起的瓜類果斑病是國(guó)內(nèi)外檢疫性病害，對(duì)無病區(qū)的防治主要是加強(qiáng)種子種苗的檢驗(yàn)檢疫，對(duì)病區(qū)經(jīng)濟(jì)有效的防控措施是選育抗病品種。瓠瓜是江南夏季主要的瓜類蔬菜，對(duì)現(xiàn)有瓠瓜栽培品種抗性的研究對(duì)保障瓜類產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展具有重要意義。本文著重對(duì)浙江省各地栽培推廣的不同瓠瓜品種細(xì)菌性果斑病的抗病性進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

50份瓠瓜栽培品種購(gòu)買于浙江省各地蔬菜種子公司。

西瓜噬酸菌(Acidovoraxcitrulli)XS0901，由本試驗(yàn)室分離并經(jīng)過致病性測(cè)定與系統(tǒng)鑒定。

1.2 方法

1.2.1 幼苗栽培

將經(jīng)檢測(cè)果斑病菌陰性的供試瓠瓜種子用3%次氯酸鈉表面消毒15 min，無菌水沖洗后晾干。育苗基質(zhì)采用進(jìn)口泥炭混合蛭石和珍珠巖，以4∶2∶1的比例拌土，混勻后放入消毒的5×10規(guī)格的育苗穴盤中，每穴播種2粒種子，每個(gè)品種播5穴，3次重復(fù)，并設(shè)置對(duì)照。育苗穴盤置于28 ℃植物生長(zhǎng)室中，相對(duì)濕度70%以上，播之前澆足水，播后定期澆水，待植株長(zhǎng)出4～6片真葉時(shí)接種。

1.2.2 溫室苗期接種

將菌株XS0901在LB固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)36 h，待單菌落長(zhǎng)出，滅菌牙簽挑取單菌落于LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，制備濃度為1×108mL-1的菌懸液。待植株長(zhǎng)出4～6片真葉時(shí)，將菌懸液于傍晚噴霧接種于不同品種瓠瓜葉片，無菌水噴霧作對(duì)照。在28 ℃植物生長(zhǎng)室中，套袋保濕培養(yǎng)24 h，每3 d調(diào)查1次病情，記錄葉片發(fā)病情況，18 d后結(jié)束試驗(yàn)。

1.2.3 抗性調(diào)查及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

參考Hopkins等[5]的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，稍加改進(jìn)，共分為6個(gè)病級(jí)：0級(jí)，葉片無病斑；1級(jí)，病斑較少，通常在葉緣有1～2個(gè)病斑，病斑面積占整葉面積的10%以下；2級(jí)，病斑較多，面積占整葉面積的10%～30%；3級(jí)，病斑開始融合，病斑面積占整葉面積的30%～50%；4級(jí)，葉片病斑大面積融合，病斑面積占整葉面積的50%以上，葉片未焦枯死亡；5級(jí)，病斑很多或融合成大斑，病斑面積占整個(gè)面積的50%以上，葉片焦枯死亡。根據(jù)所記錄的葉片發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)(DI)。

DI=Σ(各級(jí)病葉數(shù)×各級(jí)代表值)×100/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高級(jí)代表值)。相對(duì)病情指數(shù)=鑒定品種平均病情指數(shù)/對(duì)照品種平均病情指數(shù)(病情指數(shù)最高者為對(duì)照品種)。

相對(duì)抗病指數(shù)=1-相對(duì)病情指數(shù)。

參照賈宋楠等人[6]采用的相對(duì)抗病指數(shù)來評(píng)價(jià)其抗病程度：免疫I(1.00)、高抗HR(0.80～0.99)、中抗MR(0.40～0.79)、中感MS(0.20～0.39)、感病S(小于0.20)。

2 結(jié)果與分析

通過對(duì)50份供試瓠瓜品種開展苗期細(xì)菌性果斑病的抗性鑒定，發(fā)現(xiàn)不同瓠瓜品種之間存在抗病性差異(圖1)。幼苗接種后，50份瓠瓜植株均出現(xiàn)不同程度的病狀，瓠瓜子葉、真葉及其莖干均可發(fā)病(圖2)。噴霧接種2 d后，感病品種如南秀公主(圖1中A)和勻棒瓠瓜(608)(圖1中B)的真葉和子葉開始出現(xiàn)水漬狀病斑；接種4 d后，病斑大面積融合，且瓠瓜嫩梢處出現(xiàn)褐色條斑，并伴有菌膿(圖2中B)；1周后，下部葉片萎蔫枯死。中感品種如綠川(圖1中C)和青雜1號(hào)瓠瓜(圖1中D)接種4 d后，子葉和真葉的病斑開始擴(kuò)大，病斑處呈現(xiàn)褐色壞死癥狀，黃色暈圈均有加深(圖2中A)；1周后，病斑中間慢慢變薄、干枯。中抗品種如早春3號(hào)圓瓠(圖1中E)和越蒲7號(hào)(圖1中F)在接種4 d后真葉病斑多數(shù)從葉緣開始向葉間發(fā)展，伴有淺黃色暈圈(圖2中C)；少數(shù)真葉病斑沿葉脈逐漸發(fā)展成褐色不規(guī)則的病斑，但病斑受葉脈限制，呈多角形或不規(guī)則形(圖2中D)，發(fā)病葉片數(shù)和病斑面積相對(duì)少于感病品種。每組對(duì)照葉片均無病斑出現(xiàn)。

A、B為感病品種，C、D為中感品種，E、F為中抗品種；每品種的左為處理，右為CK。

A為子葉發(fā)病；B為莖干發(fā)病；C為真葉從葉緣開始發(fā)病；D為真葉在葉脈間開始發(fā)病。

在供試的50份瓠瓜品種中，沒有發(fā)現(xiàn)對(duì)果斑病高抗和免疫的品種。其中表現(xiàn)為中抗(相對(duì)抗病指數(shù)為0.41～0.64)的品種有秀麗蒲瓜、濟(jì)公葫蘆、北園早熟瓠瓜等21份(表1)，占供試品種的42%；表現(xiàn)為中感(相對(duì)抗病指數(shù)為0.22～0.39)的品種有綠川、青春、錢江8號(hào)等24份，占供試品種的48%；表現(xiàn)為感病(相對(duì)抗病指數(shù)為0.00～0.19)的品種有南秀公主、早生短棒瓠瓜、玉秀瓠瓜、勻棒瓠瓜(608)和杭州早秀長(zhǎng)瓜5份，占供試品種的10%。

表1 50份供試瓠瓜品種細(xì)菌性果斑病抗性評(píng)價(jià)

3 小結(jié)與討論

本研究通過噴霧接種法對(duì)50份瓠瓜栽培品種進(jìn)行了細(xì)菌性果斑病抗性評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，21份瓠瓜品種表現(xiàn)為中抗，29份品種表現(xiàn)為感病。據(jù)調(diào)查，感病品種勻棒瓠瓜(608)是市場(chǎng)商品性最優(yōu)的瓠瓜品種，對(duì)大部分瓜類病害具有抗病性和抗逆性，但在本研究中對(duì)于果斑病的抗病性較差。當(dāng)前浙江市場(chǎng)的主栽品種有浙蒲2號(hào)、杭州長(zhǎng)瓜等，在本研究中這類品種發(fā)病較為嚴(yán)重，多屬中感品種；還有一些地方特色品種如臺(tái)州和紹興等地的腰葫蘆、寧波的圓蒲等[7]，在本研究中這類品種如葫蘆蒲(古越)及青皮圓蒲(神鹿)等則發(fā)病較輕，多屬中抗品種，對(duì)果斑病的抗病性較好。這說明瓠瓜對(duì)果斑病的抗性可能與其品種類型有關(guān)。

在本研究中不同的商標(biāo)和生產(chǎn)公司的相同品種，其抗病性也有稍許差異。如商標(biāo)為神鹿的青皮圓蒲為中抗品種，商標(biāo)為嘉·豐的青皮圓蒲為中感品種，相對(duì)抗病指數(shù)分別為0.47和0.34，具有一定的差異性。而葫蘆蒲的2個(gè)不同商標(biāo)(泰昆種苗和古越)相對(duì)抗病指數(shù)分別為0.53和0.50，均為中抗品種，差異不大。有研究發(fā)現(xiàn)，抗病性不僅取決于品種自身的抗性，也與接種量、接種方法和接種環(huán)境等因素有關(guān)[8]。不同研究者所采用的抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)不同，抗性水平評(píng)價(jià)也不盡相同[9]。在本研究中，苗期接種試驗(yàn)的抗性鑒定由于接種量、溫濕度等條件一致，雖然能客觀的反映出不同品種之間的抗性差異，但仍需進(jìn)一步結(jié)合田間抗病性試驗(yàn)。

瓠瓜栽培歷史悠久，規(guī)模較大。果斑病屬于檢疫性種傳病害，一旦成為發(fā)病源就很容易傳播擴(kuò)散。本研究對(duì)50份瓠瓜栽培品種進(jìn)行了細(xì)菌性果斑病的抗病性鑒定，其中浙蒲9號(hào)為浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所育成的瓠瓜新品種[10]，我們的試驗(yàn)結(jié)果顯示其為中抗品種，進(jìn)一步為浙蒲9號(hào)的推廣應(yīng)用及田間選育抗病新品種提供了理論依據(jù)。