敵敵畏合并乙醇中毒死亡毒物分析鑒定1例

李標，韓雷鳴

摘要：目的：通過敵敵畏合并乙醇中毒死亡案例分析，為司法鑒定人在其他案件檢材鑒定過程中提供幫助。方法：通過頂空氣相色譜儀檢測血液中乙醇含量，利用液相色譜質譜聯用儀檢測出血液和胃內容物中敵敵畏，提供了相應的檢測方法，此方法準確、快捷，以供法醫毒物鑒定人員交流使用。結果：本文在送檢檢材中檢出乙醇和敵敵畏成分。結論：死者的死亡原因符合飲酒后口服敵敵畏殺蟲劑合并乙醇中毒死亡。

關鍵詞：敵敵畏;乙醇;液相色譜質譜聯用儀;頂空氣相色譜儀

1案例資料

1.1 簡要案情

李某，男。2021年1月18日被發現死于其出租屋內，現場有一空白藥瓶，瓶內有刺激性農藥氣味。經法醫現場分別提取死者胃內容物及心血送檢我中心進行毒物分析。

1.2 材料與方法

1.2.1 儀器與試劑

AB SCIEX TRIPLE QUAD 4500質譜儀，美國AB SCIEX公司;Agilent 7697A-7890B頂空氣相色譜儀，美國Agilent Technologies公司;單道可調移液器，德國BRANG;TG1850-WS高速離心機，上海盧湘儀離心機儀器有限公司。

SKF525A（25mg）、地西泮-d5（1.0mg/mL）采購于北京世紀奧科生物技術有限公司;敵敵畏（100μg/mL）采購于壇墨質檢科技股份有限公司。

1.2.2 儀器條件

質譜條件：離子源為電噴霧電壓（ESI+）;離子源溫度：600℃;電噴霧電壓：5.5kV;碰撞氣（CAD）9psi;氣簾氣（CUR）30psi;霧化氣（GS1）55psi;輔助加熱氣（GS2）60psi;以上氣體均為高純氮氣。碰撞能量（CE）、去簇電壓（DP）及檢測特征離子對見表一。

液相條件：色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18（100×2.1mm，1.7μm），進樣體積5μL;流速0.3mL/min。流動相及洗脫條件見表二。

頂空氣相色譜儀條件：色譜柱為安捷倫123-9234（30m×1.2μm×0.32mm;30m×1.8μm×0.32mm）;進樣體積：1mL，分流比：12：1，進樣口溫度：200℃，檢測器溫度：280℃;載氣流速：4.0mL/min;尾吹：20mL/min;H2流量：30mL/min;空氣流量：300mL/min;柱箱溫度：45℃;頂空進樣器加熱箱溫度：65℃，定量環溫度：90℃，傳輸管線溫度：110℃，樣品瓶加熱平衡時間：10min。

1.2.3 檢材處理與檢驗

檢材中毒藥物提取分析：分別取1mL胃內容物和心血于玻璃離心管中，各離心管中加入SKF525A、地西泮-d5內標工作液，加入3mLpH=9.2的硼砂緩沖溶液，另加入4mL乙醚后依次渦旋、8000r/min離心5min。靜置3分鐘后取上層有機溶劑于潔凈離心管中，50℃水浴揮干。用初始流動相復溶，過0.22μm濾膜。通過LC—MS/MS進樣分析。分別取1mL空白血液和水同上述實驗處理過程作為空白對照。

檢材中乙醇提取分析：取500μL的4mg/100mL叔丁醇內標工作溶液及100μL待測心血加入頂空瓶中，并用橡膠墊鋁帽密封、搖勻后置于安捷倫7697A頂空進樣器中加熱10 min，取1.0mL液上氣體進樣。取取蒸餾水100μL、80mg/100mL乙醇陽性對照樣品100μL分別加入取500μL的4mg/100mL叔丁醇內標工作溶液同上述過程操作，作為空白樣品和陽性對照品。

1.3 結果分析

死者胃內容物及心血均檢出敵敵畏特征離子對，通過陽性添加敵敵畏進行比對，證實檢材中檢出毒物為敵敵畏。同時死者心血中檢出乙醇，其質量濃度為7.8mg/100mL。死者的死亡原因符合飲酒后口服敵敵畏殺蟲劑合并乙醇中毒死亡。

2討論

有機磷農藥給我們的農業生產帶來了諸多便利，也會帶來食物和環境的污染，此外有機磷農藥中毒事件頻發，也是困擾世界各國的社會性問題。世界各國每年有數百萬件有機磷農藥中毒案例[1]，這些中毒案件中包含家畜中毒、他人投毒或自殺。發展中國家發生中毒案件的比例明顯高于發達國家，并且在全球范圍內30%的自殺者是通過服用農藥中毒死亡。因我國的農藥生產及使用量較大，且多數為高毒性有機磷農藥，又因其價格便宜容易獲得，最終導致在近些年的農藥中毒案件中有機磷農藥中毒或投毒案件占比較高[2]。

敵敵畏是一種常用的有機磷殺蟲劑。其中毒機理為磷酸根通過與體內的乙酰膽堿酯酶組合，形成磷酸化的膽堿酯酶，達到抑制乙酰膽堿酯酶的活性作用。失活的乙酰膽堿酯酶使生物體喪失分解乙酰膽堿的能力，乙酰膽堿在體內大量聚集，導致神經功能紊亂，生物體中毒癥狀顯現[3]。另據文獻報道敵敵畏中毒致死量為成人口服10—14g[4]。

乙醇在尸體中可以從一個器官向附近組織擴散。人若在大量飲酒后突發死亡，胃內仍有乙醇未被消化吸收，因心臟與胃距離較近，乙醇能通過向周圍組織擴散的方式進入心臟，進而導致心血中乙醇的檢測值較高。為了保證檢測數據的準確性，尸體中血液乙醇含量檢測所用檢材應首選尸體中靜脈血部位，鎖骨下靜脈血和股靜脈血是尸體中血液乙醇含量檢測常選擇的取材部位，在兩者都可以取材的情況下股靜脈是乙醇含量檢測的最佳選擇部位。在實際案件中如果尸體的盆骨或者肩部受損比較嚴重，無法抽取鎖骨下靜脈血和股靜脈血，這時就需要選擇死者心血作為檢材。抽取心血時有一點需要注意，鑒定人員需要讓心臟內的血液進行充分混合，避免檢材中紅細胞比容過多影響鑒定結論。

尸體中的血液若發生腐敗也會有乙醇產生。尸體中存在有大量微生物，在適宜的溫度條件下尸體內血液及其他機體組織會發生腐敗，導致尸體內產生正丁醇、乙醇、正丙醇等有機物。如果在較低冷凍溫度條件下保存尸體，在一天內不會生成乙醇。但微生物在尸體內的含量是會隨著死亡時間的延長而增加。在大量微生物的作用下會有乙醇等物質的產生，若沒有進行進一步的驗證容易誤判為生前飲酒。所以在處理尸體中血液乙醇檢測時，若尸體死亡時間超過一天，鑒定人員需對乙醇是否為腐敗產生進行分析。結合案件檢材，尸體中血液乙醇含量會出現丟失、下降或升高的現象。微生物降解、酶降解以及隨著水分蒸發都會使尸體中血液乙醇含量會出現丟失或下降。即使在低溫下保存檢材也會有上述情況發生。

生物體腐敗后不僅能產生乙醇，還能產生正丙醇等醇類物質。所以在檢測長時間存放后的尸體血液中乙醇含量時，鑒定人員應考慮檢出的乙醇是否由檢材腐敗產生的。具體運用到實驗過程中就是鑒定人員需要對尸體中尿液或者血液中的乙醇和正丙醇成分進行定量檢測。如果檢材中能同時檢測到乙醇和正丙醇，表示尸體中的乙醇含量已經受到外界環境等其他因素的影響，鑒定人員需要扣除檢材腐敗產生乙醇的份額，進而得出死者生前體內乙醇含量。

對于腐敗檢材產生的代謝物進行檢測時一些方面需要注意，就是不同種類的微生物腐敗代謝，其代謝產物和代謝途徑都有一定的變異性，并且不同種類檢材在不同環境條件下其代謝產物的種類以及相應的數量有稍微差別。尸體腐敗可產生正丁醇和正丙醇并伴隨有乙醇生成，若生物檢材中有正丁醇和正丙醇含量異常升高的情況，并且血液中乙醇的含量與正丙醇的含量比值小于20時，就可初步判定此檢材中的乙醇是腐敗產生的。因有些飲料中也會含有少量正丙醇，若飲用此類飲料后生物檢材中有檢出正丙醇的情況，這也會影響生物檢材中乙醇含量的判定。而正丁醇逐漸被認為是尸體腐敗后生成乙醇的標志物，其和乙醇的比值關系有待進一步研究。在腐敗檢材中2-甲基丙酸也被發現伴隨乙醇同時生成，具體以哪種有機物作為腐敗檢材中生成乙醇的標志物還未達成共識，它們之間的構效關系需廣大鑒定人員不斷探索。

敵敵畏合并乙醇中毒機制中，敵敵畏的作用是抑制膽堿酯酶活性，進而引起中樞抑制癥狀。乙醇作為常見有機溶劑，其可以使生物體內血管擴張，造成血液流速加快，進而促進敵敵畏在體內的分布和吸收，使敵敵畏中毒癥狀進一步惡化，出現呼吸困難到多器官衰竭死亡。服用農藥自殺案件近年來在司法鑒定中并不少見，但市場上流通的農藥大多為多種制劑混合而成，伴隨的中毒機制也十分復雜，對司法鑒定和臨床治療都有不小的挑戰，所以在實際鑒定工作中需要多方面考慮，避免出現誤鑒或漏檢的情況發生。

本次采用頂空氣相色譜儀對死者心血中乙醇進行定量檢測，利用AB SCIEX TRIPLE QUAD 4500質譜儀對中毒者的胃內容物及心血進行毒藥物快速定性分析，此方法準確、快捷。因乙醚沸點較低、易揮發，用乙醚提取毒物可減少濃縮時間，提高鑒定效率。死者心血中檢測出乙醇含量為7.8mg/100mL，本例中對死者胃內容物及心血進行毒物提取、濃縮、復溶。因提取物刺激性農藥味較大，對死者胃內容物及心血提取后的復溶液體分別稀釋100萬倍和1萬倍，進樣分析仍可檢測到敵敵畏特征離子對。與陽性添加敵敵畏進行比對定性分析，李某生前服入大量敵敵畏。因李某心血中乙醇含量相對較低，推測為李某生前飲酒一段時間后大量服用敵敵畏。根據李某體內同時檢出乙醇和敵敵畏成分，符合敵敵畏合并乙醇中毒導致死亡的結論。

參考文獻

[1]韓佳坤.重癥有機磷農藥中毒的急診急救措施探討.世界最新醫學信息文摘，2015，15（A2）：260.

[2]陳曙旸，王鴻飛，尹萸.我國農藥中毒的流行特點和農藥中毒報告的現狀[J].中華勞動衛生職業病雜志，2005，23（5）：336.

[3]劉良，張國華，李利華，贠克明.法醫毒理學（第五版）[M].北京：人民衛生出版社，2016.

[4]劉衡，李潔冰，孔振青，羅陽.敵敵畏、氟乙酰胺中毒法醫鑒定及現場勘查淺析[J].法制博覽，2017.08（上）：115.