常見藥用植物純露抑菌性及保濕性能研究

趙 丹

（衡水學院生命科學學院 河北 衡水053000）

純露是指芳香植物在進行水中蒸餾萃取的過程中，提取精油時分離出來的一種飽和的蒸餾原液，是精油的一種副產品，成分無雜，純凈，香味清新雅淡[1]。純露中含礦物養分單寧酸及類黃酮，這些是精油中缺乏的，由于其濃度很低，皮膚很容易吸收，并且沒有任何香精和酒精的成分，溫和無刺激性，受到許多女性的青睞，尤其是一些肌膚敏感的女性。純露具有良好的抑菌性[2]，不同植物純露抑菌性效果存在差異，篩選優良純露需要對其進行抑菌性試驗。國內純露市場缺少抑菌性方向的研究，純露應用功能性較為單一。通過研究常見藥用植物的抑菌性，兼顧純露其他特性，以期開發篩選出新型抑菌性強、多功能的優質純露，拓寬藥用植物在化妝品、醫藥等方面的運用渠道。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

1.1.1 藥用植物。蒲公英、生姜、薄荷。

1.1.2 菌種。大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphyloccus aureus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，由衡水學院微生物實驗室提供。

1.1.3 試驗藥品。牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂(均為國產分析純)，蒸餾水、超純水。

1.2 試驗儀器與設備。SW-CJ-2F超凈工作臺、BSD-250全溫振蕩培養箱、SPX-150B-Z生化培養箱、BGZ-140電熱鼓風干燥箱、YXQ-LS-50SII立式壓力蒸汽滅菌鍋、移液槍、蒸餾裝置、游標卡尺、pH計、皮膚水分測試儀。

1.3 試驗方法

1.3.1 純露的提取。選取常見的藥用植物蒲公英、生姜、薄荷，蒸餾水清洗干凈，在超凈工作臺中將材料和超純水按1∶2的比例加入蒸餾瓶中，整理裝置使其處于密閉狀態，用水蒸氣蒸餾法[3，4]蒸餾萃取出3種植物純露。將提取的3種純露分別裝入滅菌的棕色試劑瓶中，于4℃冰箱中避光保存。

1.3.2 菌種活化。在超凈工作臺中，用接種環分別將枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌菌斑在牛肉膏蛋白胨固體培養基上劃線，37℃培養3 d。挑取單菌落接種于牛肉膏蛋白胨液體培養基中，37℃震蕩培養20～24 h，使菌液濃度達到1×105～106CFU/mL。

1.4 純露抑菌性測定

1.4.1 紙片抑菌圈法[5]。用打孔器將濾紙裁成6 mm的圓片，干熱滅菌備用。在凈化工作臺中進行無菌操作，將活化濃度為1×105～106CFU/mL的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌，用移液器分別吸取100μL接種到牛肉膏蛋白胨培養基上，并用滅菌的涂布棒涂布均勻，在每個含菌培養基上放置4個濾紙片，將濾紙片均勻分布在培養基上，其中3個濾紙片分別滴加5μL蒲公英、生姜、薄荷純露，另1個濾紙片滴加5μL滅菌的超純水作為對照。3種純露、3種菌種做3組平行試驗。放在37℃培養箱中培養24 h后觀察菌落生長情況，用十字交叉法測量抑菌圈的大小，記錄并整理好試驗數據。由抑菌圈的直徑大小比較純露的抑菌性，以滅菌的超純水作為對照。抑菌性評價標準見表1[6]。

表1 抑菌圈法抑菌性評價標準

1.4.2 自然沉降法。本試驗將3種藥用植物純露，在無菌條件下用移液器分別吸取150μl的純露在牛肉膏蛋白胨固體培養基上，用涂布棒涂布均勻。以滅菌的超純水為空白對照。在衡水學院實驗樓進行自然沉降試驗30 min。沉降結束后放入培養箱培養16～24 h，計數并統計結果。經過培養計數后，觀測培養皿中菌落的生長狀況，以此來判斷純露的抑菌效果[7]。

1.5 純露酸堿度的測定。用pH計分別測定3種純露的酸堿度。

1.6 純露保濕性能比較。選用人體法[8，9]進行3種純露保濕性能的比較，以5%甘油作為陽性對照。招募30名皮膚健康的志愿者，在室溫22℃±2℃、相對濕度40%～50%的環境中，用皮膚水分測試儀進行測試。首先將志愿者的手臂清洗干凈自然晾干，在手臂內側畫出3 cm×3 cm的5個區域進行測試，用移液槍吸取不同純露，以(2.0×0.2)mg/cm2的濃度分別涂抹在手臂的測試區域，用戴乳膠手套的手指按摩至吸收，用皮膚水分測試儀分別測量各個位置的含水量[10]，共設置7個時間梯度，分別是：0 min、15 min、30 min、45 min、60 min、90 min、120 min，同時間段同一位置重復3次測定皮膚水分含量，記錄并統計，最后求平均值，計算在測試時間內皮膚水分變化率。皮膚水分變化率為皮膚水分含量的變化值與涂抹純露前的測定值之比。

2 結果與分析

2.1 3 種藥用植物純露體外抑菌試驗。本試驗選用枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌3種菌種對3種純露進行體外抑菌試驗。通過試驗得出3種純露對枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果明顯，但對大腸桿菌無抑菌作用。其中蒲公英、生姜、薄荷純露對枯草芽孢桿菌平均抑菌圈直徑分別為12.48 mm、11.30 mm、10.90 mm，對枯草芽孢桿菌的敏感度達到中度敏感，抑菌強度：蒲公英＞生姜＞薄荷。蒲公英、生姜、薄荷純露對金黃色葡萄球菌平均抑菌圈直徑分別為15.63 mm、13.25 mm、12.07 mm，對金黃色葡萄球菌的敏感度達到中度敏感，抑菌強度：蒲公英＞生姜＞薄荷。蒲公英純露對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均表現出較強的抑菌性，結果如表2。

表2 3種純露對3種供試菌的抑菌作用

2.2 自然沉降法試驗。通過自然沉降試驗，統計各培養皿的菌落數，所選3種藥用植物純露培養皿的菌落數明顯低于對照菌落數，比較結果如圖1，通過本試驗可以證明，這3種藥用植物純露均具有抑菌性，抑菌效果：蒲公英＞生姜＞薄荷。

圖1 自然沉降法藥用植物純露抗菌性試驗計數結果

2.3 純露酸堿度測定結果。用pH計測定3種純露的酸堿性，測定結果顯示3種純露均為弱酸性，蒲公英純露pH值為5.40，生姜純露pH值為5.53，薄荷純露pH值為5.61，人體皮膚的pH范圍是4.2～6.5[11]，pH值5～6的護膚品是最適合人體皮膚的，因此這3種純露均符合標準，適合用來做護膚品，不會對皮膚產生刺激。

表3 3種純露酸堿性測定結果

2.4 純露保濕性能測定結果。將純露和5%的甘油分別涂抹到手臂內側，利用皮膚水分測試儀對2 h內的皮膚水分變化率進行測定。在0～90 min內，蒲公英和薄荷純露的皮膚水分變化率高于5%甘油，具有顯著性差異(P＜0.05)，在達到120 min時無顯著性差異。在0～120 min內，生姜純露的皮膚水分變化率均低于5%甘油。純露保濕性能測定結果表明，蒲公英和薄荷純露保濕能力高于5%甘油，可以作為一種天然保濕劑使用。

圖2 使用純露后的皮膚水分變化率

3 結論與討論

本試驗選用蒲公英、生姜、薄荷3種常見藥用植物進行純露的提取，研究了這3種純露對枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌3種細菌的抑菌性，并對這3種純露的pH值、皮膚水分變化率進行測定。

3.1 在抑菌性試驗中，紙片法試驗得出3種純露均對枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌具有抑菌作用，且對金黃色葡萄球菌的抑菌效果最強，3種純露對大腸桿菌無抑菌性。3種純露的抑菌效果為蒲公英＞生姜＞薄荷，蒲公英純露的抑菌性最強。自然沉降法試驗得出這3種藥用植物純露均具有抑菌性，抑菌效果為蒲公英＞生姜＞薄荷，蒲公英純露的抑菌性最強。

3.2 純露酸堿度測定試驗中，得出3種純露均呈弱酸性，與人體正常皮膚所需pH值相符，適合做皮膚的護理產品，不會因為pH值對皮膚產生刺激。

3.3 通過皮膚水分變化率的測定可以得出，蒲公英和薄荷純露保濕能力高于5%甘油，可以作為天然保濕劑使用，其中蒲公英純露的保濕性能最佳。

綜合以上試驗結果表明，蒲公英純露在供試的3種藥用植物純露中抑菌性最強，保濕性能最佳。對藥用植物的綜合利用和開發有借鑒意義，可以為蒲公英附加值產品的開發提供理論依據。

進行試驗時要注意試驗操作誤差，如在純露提取過程，需要反復摸索藥用植物和超純水的比例，保證純露的提取效率；菌種的放置時間會對菌種的活性產生影響，避免菌種存放時間過久，若菌種活性降低也可以通過多次接種保持菌種的活性，試驗過程中要排除因菌種活性降低對試驗結果的影響。