環酯草醚的液相色譜分析方法研究

吳 晗，王 坤，唐慧敏，徐成辰，楊淑嫻

(江蘇省農產品質量檢驗測試中心，江蘇南京 210000)

環酯草醚(pyriftalid)是瑞士先正達作物保護有限公司研發的高效、低毒、環保型嘧啶類氧(硫)苯甲酸酯類除草劑[1,2]。我國海正化工南通股份有限公司于2016年獲批登記國內首個環酯草醚原藥產品[3]，主要用于移栽及直播水稻田防除一年生禾本科、莎草科及部分闊葉雜草，對稗草和鱧腸有較好的防效[4]，具有高效、低毒，在土壤中存留時間短及對非靶標生物和人類安全等優點[5,6]。

目前有關環酯草醚的分析方法標準研究相對較少，即使已報道的液相色譜分析方法還缺乏系統性研究[7]，不符合國家及行業標準的規范要求，導致環酯草醚在農藥監督執法中處于監管盲區。基于此，本研究采用液相色譜技術開展了環酯草醚原藥及24.3%懸浮劑的分析研究以期為該藥劑產品質量控制及標準制定提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品

98.5%環酯草醚原藥和24.3%環酯草醚懸浮劑，由順毅南通化工有限公司提供。

1.2 試劑和溶液

乙腈，色譜純；水，新蒸二次蒸餾水或超純水；磷酸，分析純；環酯草醚標樣，已知質量分數≥98.0%，沈陽農藥質量檢驗中心提供。

1.3 儀器設備

1290高效液相色譜儀配可變波長紫外檢測器、自動進樣裝置和色譜數據處理工作站(美國安捷倫公司)；過濾器：濾膜孔徑約0.45 μm。XP-205梅特勒十萬分之一自動分析天平[梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司]。

1.4 高效液相色譜分析條件

ZORBAX SB-C18不銹鋼柱色譜柱[150 mm×4.6 mm (i.d)，5 μm]；流動相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液＝55∶45(體積比)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫(溫度變化應不大于2 ℃)；檢測波長：240 nm；進樣體積：2 μL。在此色譜條件下，環酯草醚的保留時間約5.8 min (圖1)。

圖1 環酯草醚(原藥和24.3%懸浮劑)的高效液相色譜圖

1.5 測定步驟

1.5.1 標樣溶液的制備

稱取50.00 mg(精確至0.1 mg)環酯草醚標樣于100 mL容量瓶中，加入20 mL流動相，超聲波振蕩 5 min，冷卻至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，備用。

1.5.2 試樣溶液的制備

稱取含50.00 mg(精確至0.1 mg)環酯草醚的試樣于100 mL容量瓶中，加入20 mL流動相，超聲波振蕩5 min，冷卻至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，備用。

1.5.3 測定

在上述操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2針環酯草醚峰面積相對變化小于1.2%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.5.4 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中環酯草醚峰面積分別進行平均。試樣中環酯草醚質量分數按公式(1)計算：

式中：ω1為試樣中環酯草醚質量分數，以%表示；A2為試樣溶液中環酯草醚峰面積的平均值；m1為環酯草醚標樣的質量，單位為克(g)；ω為標樣中環酯草醚質量分數，以%表示；A1為標樣溶液中環酯草醚峰面積的平均值；m2為試樣的質量，單位為克(g)。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的選擇

環酯草醚的紫外掃描光譜圖如圖2所示，從圖2可以看到環酯草醚的最大吸收波長約240 nm，在該波長處靈敏度較高，干擾較少，能夠滿足分析的要求，故將檢測波長確定為240 nm。

色譜柱選擇常用的ZORBAX SB-C18反相柱。根據環酯草醚物化性質和溶劑的紫外吸收波長，選擇0.1%磷酸水溶液作為溶劑溶解樣品，并以乙腈和水作為流動相，為了達到更好的分離效果和峰形，在1 000 mL水里加入1 mL磷酸。將流動相按不同比例在色譜柱上進行試驗，當乙腈與磷酸水溶液比例達到55∶45時，雜質峰與環酯草醚完全分離，且峰純度完全達到試驗要求，因此最終選擇乙腈+磷酸(55∶45)作為流動相，流速1.0 mL/min。該條件下，環酯草醚色譜峰峰形較好，具有良好的精密度和準確度。

圖2 環酯草醚的紫外光譜圖

2.2 特異性試驗

本試驗采用HPLC-DAD峰純度分析法來鑒別環酯草醚。環酯草醚標樣、環酯草醚原藥、24.3%環酯草醚懸浮劑中的環酯草醚HPLC-DAD峰純度均大于990，有效成分處無其他物質干擾，符合定量分析要求。峰純度色譜圖見圖3~圖5。

圖3 環酯草醚標樣HPLC-DAD峰純度色譜圖

圖4 環酯草醚原藥HPLC-DAD峰純度色譜圖

圖5 24.3%環酯草醚懸浮劑HPLC-DAD峰純度色譜圖

2.3 線性關系試驗

按1.5.1分別配置5個不同質量濃度的環酯草醚標樣溶液，在相應色譜操作條件下進行分析，以環酯草醚質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。當環酯草醚質量濃度在229.83~839.48 mg/L，得到線性方程為y=5.31x-3.44，線性相關系數R=1.00。

2.4 方法精密度試驗

按1.5.2試樣溶液的制備方法分別配制5個環酯草醚原藥和5個24.3%環酯草醚懸浮劑溶液。以線性關系試驗中520.20 mg/L環酯草醚溶液為標樣溶液，在上述操作條件下，待儀器基線穩定后進行測定，結果見表1、2。可以看出環酯草醚原藥和24.3%環酯草醚懸浮劑中環酯草醚質量分數測定結果的RSD分別為0.19%和0.42%，分別小于修改的Horwitz公式2(1-0.51ogC)×0.67=1.34和1.65，說明有效成分分析方法精密度的結果符合質量控制的基本要求。

圖6 環酯草醚峰面積與質量濃度之間的線性關系圖

表1 環酯草醚原藥中環酯草醚精密度試驗結果

2.5 方法準確度試驗

稱取5份含25.00 mg (精確至0.1 mg)環酯草醚的24.3%環酯草醚懸浮劑于100 mL容量瓶中，分別加入環酯草醚標樣25.00 mg，按1.5.2的方法配制5個有效成分準確度溶液。以線性關系試驗中520.20 mg/L環酯草醚溶液為標樣溶液，計算環酯草醚的回收率，結果見表3。24.3%環酯草醚懸浮劑中環酯草醚平均回收率為100.76%，此方法具有良好的準確度。

表2 24.3%環酯草醚懸浮劑中環酯草醚精密度試驗結果

表3 24.3%環酯草醚懸浮劑回收率試驗結果

3 結 論

通過試驗表明，采用本方法測定環酯草醚原藥、24.3%環酯草醚懸浮劑的有效成分，線性關系良好，精密度、準確度高，分離效果好，并且操作簡便、快速，是產品日常檢驗較為理想的分析方法。