慢性丙型肝炎患者血清GP73水平與肝功能及HCV-RNA的相關分析*

林桂花，楊曉冬，鐘 文，葉仁清△

(福建醫科大學附屬寧德市醫院：1.輸血科；2.檢驗科，福建寧德 352100)

當機體受到丙型肝炎病毒(HCV)感染后，如未得到及時有效的治療，勢必會從最初的急慢性肝臟炎癥發展成為肝臟纖維化、肝硬化甚至原發性肝細胞癌(HCC)[1]。有60%～80%的HCV感染者會發展成為慢性感染，嚴重影響了我國居民的身體健康[2]。高爾基體蛋白73(GP73)作為一種新型的血清標志物，對于診斷肝臟疾病及HCC具有一定的靈敏度[3]。HCV病毒載量則可反映患者的病程進展及HCV復制的活躍度，常被用于丙型肝炎的診斷及衡量治療有效率的指標[4-5]。本研究通過回顧性收集分析84例慢性丙型肝炎(CHC)患者的血清GP73水平、肝功能相關指標水平及HCV-RNA載量的相關性，以為CHC的診斷及療效評估等提供依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2012年8月至2018年9月收治的84例CHC患者為研究對象。患者丙氨酸氨基轉移酶(ALT)多呈輕度和中度升高，抗-HCV和HCV-RNA陽性。HCV-RNA常在ALT恢復正常前轉陰，但也有ALT恢復正常而HCV-RNA持續陽性者。診斷符合中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會聯合修訂的《丙型肝炎防治指南(2015更新版)》中的CHC診斷標準。按照HCV-RNA水平分為HCV-RNA陰性組(HCV-RNA<5.0×102IU/mL，n=23)和HCV-RNA陽性組(HCV-RNA≥5.0×102IU/mL，n=61)。HCV-RNA陰性組：男13例，女10例；年齡19～75歲，平均(45.59±2.37)歲。HCV-RNA陽性組：男32例，女29例；年齡19～75歲，平均(45.59±2.37)歲。選擇同期84例健康體檢者為對照組，其中男42例，女42例；年齡21～73歲，平均(44.62±3.08)歲。3組對象性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：(1)所有CHC患者均符合我國2015版《丙型肝炎防治指南》診斷標準[2]，溝通能力良好，愿意配合完成本研究；(2)對照組為健康體檢者無潛在疾病。排除標準：(1)其他類型肝炎病毒感染及肝膽疾病；(2)惡性腫瘤；(3)重要臟器功能障礙和衰竭。

1.2 方法

1.2.1標本采集及檢測方法

CHC患者及對照組健康體檢者均禁食、水12 h，采集其空腹肘靜脈血液于促凝管中，用于檢測患者血清GP73、ALT、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)及HCV-RNA水平；待血液凝固后，以4 000 r/min的離心5 min，將上部血清取出，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清GP73水平，試劑盒購自北京熱景生物技術股份公司，操作步驟嚴格按照試劑盒方法，每組實驗重復3次，確保結果的可靠性；肝功能指標水平檢測采用羅氏診斷產品有限公司生產的全自動生化分析儀Cobas8000進行檢測，ALT、AST 及TBIL試劑盒購自羅氏診斷產品有限公司；HCV-RNA檢測，采用BIO RAD公司生產的Light Cycler實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測儀，開展熒光定量HCV-RNA檢測，采用RT-qPCR法檢測HCV-RNA載量，Step.one實時熒光 PCR儀購自艾康生物有限公司，試劑盒購自艾康生物有限公司，檢測靈敏度：5.0×102IU/mL。另外,所有患者還需要接受國產英特龍300萬U，肌內注射，每2天1次，利巴韋林每天900 mg，分3次口服，療程為1年。治療第1周，復查ALT和AST 1次，ALT和AST正常之后，隨著其他項目一起復查，外周血細胞及血小板計數為每兩周復查1次，對于下降不明顯的每個月復查1次。治療前3個月，每月復查患者的HCV-RNA和HCV等1次，之后和完成治療后每6個月隨訪復查1次。

1.2.2觀察指標

(1)觀察HCV-RNA陰性組、HCV-RNA陽性組及對照組血清GP73及肝功能指標水平；(2)依據GP73水平，將61例HCV-RNA陽性CHC患者分為高GP73組(>82.50 ng/mL)、中GP73組(57.98～82.50 ng/mL)及低GP73組(<57.98 ng/mL)，分析各組患者肝功能相關指標及HCV-RNA水平與血清GP73水平的相關性。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 3組對象血清GP73及肝功能相關指標水平比較

與對照組比較，HCV-RNA陽性組和陰性組患者血清GP73(t=87.355、123.472，P<0.001)、ALT(t=35.823、90.348，P<0.001)、AST(t=114.895、177.349，P<0.001)、TBIL(t=23.560、45.399，P<0.001)均明顯升高；HCV-RNA陽性組GP73、ALT、AST、TBIL水平均高于HCV-RNA陰性組(t=18.385、22.741、23.795、15.242，P<0.001)，見表1。

表1 各組對象血清GP73及肝功能相關指標水平比較

2.2 HCV-RNA陽性3個亞組肝功能及HCV-RNA水平比較

與中GP73組及低GP73組比較，高GP73組ALT(t=5.578、7.324,P<0.001) 、AST(t=5.889、7.925,P<0.001)、TBIL(t=6.834、8.327,P<0.001)、HCV-RNA(t=3.245、2.899,P<0.001)水平明顯升高；中GP73組ALT、AST、TBIL、HCV-RNA水平均高于低GP73組(t=3.012、3.289、4.089、2.887,P<0.001)， 見表2。

表2 HCV組不同濃度GP73的3組肝功能及HCV-RNA水平對比

2.3 血清GP73水平與肝功能相關指標的相關性

相關性分析發現，血清GP73水平與ALT、AST、TBIL及HCV-RNA均呈明顯的正相關(r=0.621、0.652、0.604、0.618，P<0.05)。

3 討 論

CHC是感染HCV所致。HCV是一種小RNA病毒，分類為黃病毒科肝病毒屬。由于肝臟的巨大代償能力，大部分人感染HCV后沒有任何癥狀，常常偶然在體檢時發現，或者很多年后出現不適癥狀時才發現。大約85%的人在感染HCV后發展成CHC。因此，防控丙型肝炎最有效的手段是盡早對患者進行準確診斷和干預[6-9]。HCV-RNA載量對患者體內病毒水平及病毒復制活躍程度可以有較好的反映，我國新近的丙型肝炎防治指南中也有提到HCV-RNA定量檢測可以用于HCV感染的確認及抗病毒治療過程的應答評估[10-11]。GP73是近年發現的一種高爾基體Ⅱ型跨膜糖蛋白，正常情況下 GP73位于高爾基體膜囊，僅在膽囊上皮細胞中有所表達，當肝細胞組織受到感染，發生損傷時可出現GP73高表達，臨床常將其作為比甲胎蛋白及白細胞介素-6更為敏感的肝癌診斷標志物，有研究報道，慢性肝病患者的血清GP73隨著疾病進展逐漸升高，可作為慢性肝病的血清標志物[12-15]。但早期診斷HCV需要綜合考慮多個因素，聯合檢測并探討各個指標間的相關性可使診斷結果更加客觀有效。

本研究通過對HCV-RNA陽性、HCV-RNA陰性CHC患者及健康對照人群血清GP73分析發現，兩組CHC患者血清GP73、肝功能相關指標水平均高于對照組，說明HCV感染患者血清GP73表達水平增高，同時其肝功能受損，分析其原因可能與CHC患者由于感染HCV后其肝功能受到損傷，引起GP73表達增高。HCV-RNA陽性CHC患者血清GP73、肝功能相關指標水平高于HCV-RNA陰性CHC患者，提示HCV-RNA陽性患者肝功能低于HCV-RNA陰性CHC患者，其血清GP73水平也高于HCV-RNA陰性CHC患者，分析其原因可能是因為HCV-RNA陽性CHC患者體內HCV-RNA的復制，導致患者體內病毒水平增加，引起肝臟產生炎癥，逐步發展為肝纖維化，進而導致患者的肝功能損傷程度明顯高于HCV-RNA陰性患者，引起患者血清AST、 ALT、 TBIL等肝功能相關指標的升高，進而引起患者血清GP73升高。將61例HCV-RNA陽性CHC患者依據血清GP73水平分組，結果顯示高GP73組肝功能指標及HCV-RNA水平高于中、低GP73組(P<0.001)，中GP73組肝功能指標及HCV-RNA水平高于低GP73組(P<0.001)。提示高GP73 HCV-RNA陽性CHC患者其體內HCV-RNA水平升高，同時其肝功能指標數值均較高，血清GP73水平與ALT、AST、TBIL及HCV-RNA水平的變化具有一定的關系，血清GP73水平的高低與肝臟的受損程度密切相關，血清GP73水平越高，則肝損傷程度越重。分析其原因可能是因為正常情況下 GP73位于高爾基體膜囊，僅在膽囊上皮細胞中有所表達，當肝細胞組織受到感染，發生損傷時可出現GP73高表達，HCV-RNA的復制導致了患者肝組織受到感染GP73增高，同時患者肝功能降低。進一步分析發現，血清GP73水平與ALT、AST、TBIL及HCV-RNA水平呈正相關，充分顯示了血清GP73與CHC患者HCV-RNA及肝功能損傷程度具有密切關系，有可能作為輔助CHC診斷的一個標志物，同時在HCV-RNA陽性CHC患者的病情評估、治療效果評估方面也具有重要作用。

本研究通過分析HCV-RNA陽性CHC患者血清GP73水平，為HCV-RNA陽性患者的早期診斷、療效評估及預后等方面提供了一定的依據，同時也促進了CHC研究的發展，另外，本研究將GP73應用于CHC患者的診斷和病情評估中，因當前在國內關于這方面的研究鮮有報道，而開展本研究具有一定的創新性，可彌補已有研究當中在這方面的不足之處，從而豐富相關理論體系。

綜上所述，CHC患者血清GP73水平與患者肝功能及HCV-RNA具有一定相關性，可以為CHC患者的確定和改善預后提供重要的價值，具有明顯的診斷和鑒別價值。