突變等位基因腫瘤特異性對甲狀腺乳頭狀癌的診斷價值和預后相關性分析

李雪平 汪明強 呂金利 馬志勇 王湛鈞

甲狀腺乳頭狀癌(PTC)常發生于甲狀腺惡性腫瘤患者中，屬于1種高發型內分泌系統腫瘤，而且發病率呈逐年上升趨勢。相關報道顯示：甲狀腺乳頭狀癌患者治療后，預后情況和遠處轉移的幾率均顯著改善可能與其基因的異質性有著很大關系[1-3]。但是一些高危患者容易出現復發、轉移甚至死亡現象，因此尋找判斷指標對甲狀腺癌患者的預后較差情況進行識別和判斷有著重要臨床價值。當前甲狀腺癌分子的標志物逐漸進入到臨床研究之中，例如STRN/ALK的基因融合、TERT啟動子突變、PPAR/ PAX8基因融合、PTC/RET基因融合、RAS突變以及BRAF突變等，其中以BRAF突變最為常見，所以單個的基因并沒有辦法對患者的預后情況進行準確判斷[4]。因此本文選取我院2017年6月至2020年6月共收治的132例甲狀腺乳頭狀癌患者作為研究對象，分析突變等位基因腫瘤特異性對甲狀腺乳頭狀癌的診斷價值和預后相關性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年6月至2020年6月共收治的132例甲狀腺乳頭狀癌患者作為研究對象，應用突變等位基因腫瘤特異性(mutant-allele tumor heterogeneity，MATH)將患者分為高MATH組和低MATH組，甲狀腺乳頭狀癌患者的MATH在2.57到93.72之間，平均為(29.46±16.21)；因此將MATH≥29.46的患者分為高MATH組，共65例，將MATH<29.46的患者納入低MATH組，共67例。納入標準：患者臨床資料完整；所有患者均知情并簽署知情同意書；患者通過術后病理證實為甲狀腺乳頭狀癌。排除標準：術中沒有進行臨床清掃；多病找惡性病變患者；術前經受過相關放化療治療的患者。兩組患者的一般資料對比無明顯差異(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 一般資料

1.2 方法

①應用石蠟切片核酸提取試劑盒和人類BRAF基因突變檢測試劑盒(購自廈門艾德生物醫藥科技股份有限公司)；ABI7500實時熒光定量PCR儀提取DNA并檢測，具體過程根據試劑盒說明書進行操作。

②應用突變擴增組織系統與熒光PCR技術來對實驗中DNA樣本出現BRAF基因突變情況進行檢測，針對BRAF基因突變的位點設計特異突變檢測引物，并對甲狀腺乳頭狀癌基因擴增除突變模板，同時利用FAM標記的雙環探針熒光探針對擴增產物進行實時檢測。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 2組患者臨床病理特征對比分析

對比2組患者臨床病理特征對比無明顯差異(P>0.05)，見表2。

表2 2組患者臨床病理特征對比分析

2.2 2組基因突變不同類型患者臨床病理特征比較

對比2組基因突變不同類型患者臨床病理特征發現，兩組性別、年齡、腫瘤大小、鈣化情況對比無明顯差異(P>0.05)，淋巴結節轉移例數對比差異顯著(P<0.05)，見表3。

表3 2組基因突變不同類型患者臨床病理特征比較

2.3 突變等位基因腫瘤特異性對甲狀腺乳頭狀癌預后預測價值

對單因素分析具有統計學差異指標進行賦值：MATH值不是甲狀腺乳頭狀癌患者生存情況的顯著預測因素(P=0.459)，不同BRAF基因型甲狀腺乳頭狀癌患者的生存情況無顯著差異(P=0.464)，而在突變型和野生型患者中，高MATH患者的生存率顯著低于低MATH患者(P突變型=0.030、P野生型=0.016)，見表4。

表4 突變等位基因腫瘤特異性對甲狀腺乳頭狀癌的預后的預測價值

3 討論

腫瘤內異質性主要指的是在相同的腫瘤之內以及特定的原發腫瘤和其轉移之間出現的不同行為特征、表型以及遺傳的癌細胞亞群[5-6]。這種差異對于惡性腫瘤患者的診斷和治療具有指導意義。相關報道提出，多病灶類型的甲狀腺乳頭狀癌患者可能會出現特定組織類型的異質性，并且可能在分子水平之上，存在瘤內特異性[7-8]。伴隨著PTC患者腫瘤的進展，癌細胞在分裂之后，子代細胞出現父代細胞及同代細胞均可能出現病理學差異，因此該腫瘤侵襲以及生長指標甚至患者預后均發生變化。MATH為腫瘤全外顯子測序相關結果，可用于ITH程度評估。孫穎等提出，乳腺癌、頭頸部鱗癌的異質性程度可作為當前臨床上一種有用生物標記[9]。MATH是否可用于PTC患者預后評估，該問題目前尚未見報道。

本研究結果表明，對比兩組患者臨床病理特征以及BRAF基因型等對比均無明顯差異(P>0.05)；對比兩組基因突變不同類型患者臨床病理特征發現，兩組淋巴結節轉移人數對比差異顯著(P<0.05)，其余指標無顯著差異(P>0.05)。當前PTC之中常見分子改變為TERT、BRAF突變。當前研究中顯示，在PTC患者之中BRAF的突變率為40%～60%，而且端粒酶反轉錄酶的突變提升了啟動子活性，并通過維持端粒子的長度導致癌細胞增殖，出現PTC。相關研究顯示[10]，分子標記物在PTC患者的預后之中的作用抑制屬于焦點研究內容，聯合多基因突變或者是單基因突變被應用多項PTC預后預測之中，但是結果依然存在較大爭議。本研究結果表明，對單因素分析具有統計學差異指標進行賦值：MATH值不是甲狀腺乳頭狀癌患者生存情況的顯著預測因素(P=0.459)，BRAF基因型對于甲狀腺乳頭狀癌患者的生存情況無顯著影響(P=0.464)，而突變型和野生型患者中，高MATH患者的生存率顯著低于低MATH患者(P均<0.05)。因此證明，突變等位基因腫瘤特異性可以在BRAF野生型和突變型之中預測甲狀腺乳頭狀癌患者的預后情況。相關研究顯示[11]，PTC的復發與遠處轉移與TERT的啟動因子突變有著很大關系，而Moon等[12]研究則認為這種突變和臨床特征沒有明顯相關性，并且不能夠判斷患者的預后情況。本研究中應用的MATH數字算法是腫瘤內異質性的直觀測量方法，與單細胞分析或者腫瘤微切割相比具有明顯優勢[13]。

綜上所述，突變等位基因腫瘤特異性可以在BRAF野生型和突變型之中預測甲狀腺乳頭狀癌患者的預后情況，具有臨床診斷價值，可以用于臨床治療指導。