CK和P63與原位雜交EBER在診斷復發性鼻咽癌中的價值分析

陸妹英，以 敏（通訊作者）

（柳州市工人醫院病理科 廣西 柳州 545005）

鼻咽癌是我國常見的惡性腫瘤之一，多發于鼻咽黏膜處，據全國鼻咽癌學術會議表明，世界上有80%的鼻咽癌發生在中國，南方地區高于北方地區。患者發病早期比較隱匿，不易被發現，但是較容易出現遠處轉移或淋巴結節轉移情況。臨床研究顯示，鼻咽癌的發病機制不明確，治療效果有限，患者5年的生存率為50%左右[1]。臨床上對鼻咽癌多應用放射治療，但是通過放射治療后依然有20%左右的患者會出現復發情況，而且復發性鼻咽癌的預后性較差，再次放射治療后患者5年生存率僅為30%左右[2]。為了判斷患者是否為復發性鼻咽癌，本文選取我院200例鼻咽癌患者作為研究對象，探討CK、P63與原位雜交EBER在診斷復發性鼻咽癌中的應用價值，具體報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2018年1月—2020年12月200例鼻咽癌患者作為研究對象，其中首發患者123例，復發患者77例。納入標準：所有患者均經病理診斷確診為鼻咽癌且相關病例資料完整；復發患者在鼻咽癌復發之前已經確診為鼻咽癌并經過相關放射治療；首發患者在病理診斷前未經過相關治療。所有患者對本研究知情并簽署同意書。所有鼻咽癌患者中男性152例，女性48例；年齡為12～89歲，平均年齡（65.31±3.25）歲。

1.2 方法

原位雜交EBER檢測：實驗設置外部陰性對照、陽性對照及組織內對照，切片組織粘附在APES處理的載玻片上，將切片于65 ℃烘烤1 h之后，脫蠟及水化，進行原位雜交預處理，雜交，依照泰普生物地高辛染色液試劑說明書操作規范操作，用三步法檢測組織切片中地高辛標記的核酸靶點，用DAB作為底物顯色，在陰、陽性對照成立的基礎上，依據雜交信號有無判斷結果，陽性結果為組織切片中的細胞核見黃色、棕黃色或棕褐色著色，而細胞質和細胞膜無著色，只有當核分裂時可以出現細胞質著色。

CK、P63免疫組化檢測，實驗設置外部陰性對照、陽性對照及組織內對照，將組織切片于65 ℃烘烤1 h之后，使用羅氏全自動免疫組化染色機，應用邁新生物技術有限公司提供的試劑盒，嚴格按照儀器操作規程進行免疫組化染色，結果P63陽性為細胞核呈棕褐色著色，CK陽性為細胞質或上皮細胞胞膜呈棕黃色或黃色著色。

1.3 觀察指標

記錄并分析首發病例與復發病例患者的性別、年齡、組織學類型、病灶部位等臨床資料；應用免疫組化檢測和原位雜交檢測首發病例與復發病例CK、P63與原位雜交EBER水平，并記錄分析。

1.4 統計學方法

本研究數據采取統計學軟件SPSS 23.0進行數據分析，計數資料以例數、百分比（n，%）表示，進行χ2檢驗；計量資料以符合正態分布則用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；采用Logistic回歸分析分析CK、P63與原位雜交EBER在復發性鼻咽癌中的診斷價值；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 首發病例與復發病例臨床病理資料比較

首發病例與復發病例的性別、年齡、組織學類型和病灶部位比較無統計學差異（P＞0.05），見表1。

表1 首發病例與復發病例臨床病理資料對比分析（例）

2.2 首發病例與復發病例CK、P63與原位雜交EBER表達分析

復發病例的CK、P63與原位雜交EBER表達陽性人數高于首發病例，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.3 CK、P63與原位雜交EBER在復發性鼻咽癌中的診斷價值

Logistic回歸分析結果顯示：CK、P63與原位雜交EBER并非復發性鼻咽癌的獨立診斷指標（P＞0.05），聯合診斷對復發性鼻咽癌具有診斷價值（P＜0.05），見表3。

表3 CK、P63與原位雜交EBER在復發性鼻咽癌中的診斷價值

3.討論

鼻咽癌病理診斷中常應用原位雜交與免疫組化，其中主要包含CK、P63與原位雜交EBER檢測，其中CK屬于上皮細胞的標記物，能夠勾畫出細胞的輪廓，顯微鏡下可看到呈篩孔狀或網狀排列，而且大多患者會呈陽性表達情況。而P63為基底細胞標志物，P36主要表達臨床上皮源性惡性腫瘤，在腺癌中幾乎不表達。而且臨床研究顯示，在鼻咽癌患者中P63高表達可能是鼻咽癌發生的早期事件[3]。EB病毒（EBV）是γ皰疹病毒科的一員，它的編碼小分子RNA-EBER在EB病毒感染細胞核中會出現高拷貝現象。所以，應用原位雜交法能夠特異性的進行EBV檢測，其主要原理是應用EBER特有的序列設計特異性探針和EBER的靶序列互相結合、互補，達到檢測目的。原位雜交EBER檢測可以準確定位細胞，明確組織細胞中EB病毒的位置及感染程度，有利于病理診斷及分級。大量研究表明，EB病毒在鼻咽癌患者體內參與了疾病的發生與惡變的過程，幾乎所有鼻咽癌患者的癌組織之中都能夠檢測出EB病毒特異性抗體與DNA[4-5]。由此可見，應用CK、P63與原位雜交EBER對復發性鼻咽癌診斷是具有科學依據的。

本研究結果表明，首發病例與復發病例的性別、年齡、組織學類型和病灶部位對比無明顯差異（P＞0.05），由此證明，無論是首發病例還是復發病例患者的性別、年齡、組織學類型和病灶部位都沒有明顯差異。相關研究顯示，首發鼻咽癌患者超過5年之后可能是因為新的腫瘤而導致復發[6]，因此，可能與患者的病理情況無明顯關系；首發病例與復發病例的CK、P63與原位雜交EBER表達對比差異顯著，復發病例的CK、P63與原位雜交EBER表達陽性人數明顯高于首發病例（P＜0.05），由此證明，CK、P63與原位雜交EBER表達與鼻咽癌的復發性可能存在一定關系。相關報道顯示，有10.8%的復發性鼻咽癌患者EBER檢測為陰性[7]。本研究結果中的陰性患者人數較低，這可能是因為與組織學處理欠佳有關。而且腫瘤成分比較少的時候鏡下容易出現漏診現象，因此在檢測過程中要特別注意。相關研究表明，CK作為細胞的靶結構，會參與輻射，從而導致細胞的變化與活動，但是并不能作為鼻咽癌患者復發性的獨立判斷指標[8]，與本研究結果具有相似性。Logistic回歸分析結果顯示：CK、P63與原位雜交EBER并非復發性鼻咽癌的獨立診斷指標（P＞0.05），聯合診斷對復發性鼻咽癌具有診斷價值（P＜0.05）。由此證明，應用CK、P63與原位雜交EBER聯合診斷能夠判斷患者是否為復發性鼻咽癌，從而為患者的臨床診斷與治療提供參考。

綜上所述，CK、P63與原位雜交EBER水平與復發性鼻咽癌的發展密切相關，可以結合形態學，免疫組化CK、P63與原位雜交EBER聯合判定患者是否為復發性鼻咽癌，但是3種診斷并非為復發性鼻咽癌的獨立預測指標。