中年穩壓膠囊對SHR大鼠血壓干預實驗觀察

陳春花 許 滔

1. 黔南州中醫醫院重癥醫學科，貴州 都勻 558003；2.貴州中醫藥大學第二附屬醫院心內科，貴州 貴陽 550000

高血壓是臨床的常見病、多發病，2002年統計中國高血壓患者為1.6億。隨著人民生活質量的不斷提高，高血壓患者年齡呈現越來越低齡化的趨勢，2005年有關我國高血壓流行病學研究結果顯示中年(45～59歲)高血壓患者的患病率達到29.7%[1]，較1991年全國高血壓普查結果[2]升高了9.00%。在我國40歲以上人群的死亡原因中，心血管病和腦血管病分別列為第1位和第3位，而總死亡的第一危險因素是高血壓[3]。這個年齡區間中患高血壓的大多數人還在工作的第一線，由于對西藥副作用的畏懼，特別是降壓藥物對男性性功能的影響，服藥依從性差，血壓控制達標率低。流行病學調查顯示，高血壓致殘、致死的并發癥嚴重危害了人類健康，對千萬個家庭造成損害，耗費國家大量的衛生資源，因此對高血壓的有效防治仍然是亟待解決的醫學問題和社會問題。其中，中年人群高血壓的防治是維持社會和諧尤為重要的一個方面。中醫藥治療高血壓很有優勢，降壓藥中雖然西藥的種類較多，但臨床副作用較大，很多人不能耐受，轉而尋求副作用少，療效穩定的中醫治療。中醫無高血壓病名，根據臨床癥狀多從“眩暈、頭痛”等病論治。中醫藥在治療高血壓上具有標本兼治、藥物毒副作用較小、療效持久等特點, 在改善癥狀、提高生活質量、穩定療效、逆轉靶器官損害、減少并發癥等方面具有獨特的優勢[4]。通過查閱文獻資料，在高血壓中醫診療方案中，辨證多為肝陽上亢、肝火亢盛、痰濕雍盛、肝腎陰虛、陰陽兩虛等，80%以上是圍繞 肝來調治的。因此總結了中醫平肝、清肝、疏肝、養肝治肝諸法，以這種治肝降壓理論為指導組方的中年穩壓膠囊臨床上治療中年原發性高血壓臨床療效較好[5]。因此，本研究將中年穩壓膠囊運用于自發性高血壓大鼠(SHR)，通過藥物對大鼠的血壓調控，求證該藥的降壓作用，探討中年高血壓治肝降壓法的作用機制。

1 實驗材料

1.1 動物選擇 56只10周齡SPF級SHR(自發性高血壓)大鼠(購自北京維通利華實驗動物技術有限公司)，均為雄性，體重(250～300 g)；7只10周齡健康SD大鼠(采購公司同上)，雄性，體重(300～350 g)。均用標準顆粒混合飼料喂養(由貴陽醫學院實驗動物中心提供)。

1.2 主要實驗儀器 超純水儀(臺灣艾科)，大鼠無創尾動脈血壓儀(成都生物科技有限公司)，Medl-U4C501生物信號采集系統(南京美易科技有限公司)，恒溫干燥箱(杭州藍天化驗儀器廠)，全自動高壓滅菌鍋(日本三洋有限公司)，電子天平(Shangping FA2004 上海儀器廠)，HH-S恒溫水浴鍋(江蘇金壇市正通電子有限公司)。

2 實驗方法及結果

2.1 動物分組、飼養、給藥

2.1.1 分組 大組分組：隨機將SHR大鼠分為空白對照組Ⅰ和實驗組Ⅱ(灌服中年穩壓膠囊)兩大組，每組28只。另設健康SD大鼠組(不給藥)。亞組分組：SHR大鼠每組均分為A、B、C、D四個小組(每小組7只)。SD大鼠為E組。

A.(AⅠ、AⅡ)在實驗組給藥后第1周處死(即第13周齡時)；

B.(BⅠ、BⅡ)在實驗組給藥后第3周處死(即第15周齡時)；

C.(CⅠ、CⅡ)在實驗組給藥后第5周處死(即第17周齡時)；

D.(DⅠ、DⅡ)在實驗組給藥后第8周處死(即第20周齡時)；

E.實驗組給藥開始后第8周處死(即第20周齡時)。

2.1.2 飼養 大鼠放置在光線適度，空氣流通的動物房中飼養，動物自由攝食、飲水，一般每日更換新鮮飼料，飲水1～2 d換一次。動物房溫度：22～24 ℃，相對濕度：45%～55%，人工控制光照(晝12 h、夜12 h)。平均每天供應飼料5～7 g/100 g體重，平均日飲水量8～13 mL/100g體重。

2.1.3 藥物制備及給藥

2.1.3.1 藥物制備 中藥膠囊制備：中年穩壓膠囊(鉤藤、天麻、黃芪、天冬、麥冬、生地、熟地、珍珠母、黃芩、白術、丹參等)由貴陽中醫學院第二附屬醫院藥劑科加工完成。每粒膠囊含生藥0.25 g。

2.1.3.2 給藥方法 在大鼠適應1周后實驗組開始灌服藥物，實驗組灌服中年穩壓膠囊，1粒/次，2次/d。操作時將膠囊內藥物取出，每粒膠囊用3～5 mL純水稀釋，再用灌胃針抽取后灌服。對照組不給藥。

2.2 血壓檢測

2.2.1 測壓前準備 大鼠到達實驗室后，熟悉環境3～4 d。4 d后每天用大鼠測壓器固定尾部及37～40 ℃溫水燙尾1次，習慣測壓步驟。測壓前移到測壓室熟悉環境，并逐只用配套的固定器固定，尾部用37～40℃溫水預熱。每次測壓前均需用水銀血壓計對換能器進行定標，每批次均需采用相同定標標準。

2.2.2 測壓 打開配套Medlab生物信號采集系統，采取雙通道記錄血壓及脈搏波，水銀血壓計定標，保存配置。將各組大鼠按編號順序進行測壓，將大鼠放入配備的大鼠固定器內，鼠尾置于固定器外。用35～40 ℃的恒溫水浸泡鼠尾約10～25 min使鼠尾變軟，此時鼠尾動脈充分擴張。用軟布將鼠尾擦干后穿過加壓尾套，并使無創尾動脈血壓測定系統的脈搏傳感器與尾根部背面緊密接觸，觀測示波器，出現規律的鋸齒樣波形即為大鼠脈搏波形，脈搏波穩定后即可開始測血壓。待動物安靜后，加壓氣球手動給尾套勻速充氣加壓，隨尾套內壓力增高脈搏波逐漸減小至消失，數秒后緩慢放氣，鼠套壓力降低，開始出現脈搏波并逐漸增高，出現脈搏波的起始點對應的血壓值即為鼠尾收縮壓。如圖1所示。重復測量3次，取平均值。

2.2.3 血壓檢測記錄 ①使用軟件自帶的自動實驗選項記錄實驗結果，選擇每隔30 s測定血壓一次，共測3次，記錄實驗數據，記算平均值，其間安撫大鼠，使其保持安靜狀態。②將記錄圖片按軟件自帶操作儲存。

3 結果

各組大鼠血壓比較：正常SD大鼠不同時期SBP無統計學差異(P>0.05)，同期SD大鼠與各SHR大鼠組血壓SBP存在顯著差異(P<0.05)。SHR空白組及實驗組初始血壓SBP無統計學意義(P>0.05)。給藥后同期各SHR大鼠血壓結果對比：第1周空白組及實驗組SBP無統計學意義(P>0.05)；各組與初始血壓相比較，無顯著差異；給藥后第3周開始空白組各組SBP與初始血壓相比較，有顯著差異(P<0.05)；空白組及實驗組SBP有顯著差異(P<0.05)；給藥后第5周血壓對比分析：空白組及實驗組SBP有顯著差異(P<0.05)；期間最高血壓SBP達到202 mmHg，測壓過程中兩只空白組SHR大鼠死亡，可見口吐粉紅色泡沫，解剖可見肺淤血。給藥后第8周空白組及實驗組SBP有顯著差異(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠不同期血壓均值

4 結論及討論

4.1 原發性高血壓病因病理認識 高血壓作為當今社會嚴重危害人類健康的常見病、多發病，在100多年前由Riva-Rocci發明袖帶血壓計后才對其生理、病理有所認識。到20世紀50～60年代進行了大量的流行病學及臨床研究，其作為心血管病的主要危險因素得以證實。原發性高血壓的發生趨向于年輕化，但該病發生的病因不明, 目前認為是在一定的遺傳背景下由多種后天環境及其他因素 (包括飲食、精神應激及體重、避孕藥、阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征等) 相互作用使血壓的正常機制失代償所致。本實驗所選用的 SHR大鼠為一近交品系，是國際高血壓協會推薦的遺傳性高血壓大鼠之一，其高血壓發生率為100 %，出生后 6～8周血壓開始上升，成鼠血壓可達26.7 kPa(200mmHg)以上[6]。SHR大鼠高血壓發生率高，無明顯原發性腎臟或腎上腺損傷，做為目前原發性高血壓最佳動物模型。其雄性SHR大鼠的發病率高而且穩定，是中年高血壓最好的實驗對象。從實驗結果可見SHR大鼠在第10周時血壓已經升高。且隨著周齡增加，空白對照組血壓持續升高(至14周齡開始比較初期血壓有顯著差異(P<0.05)。由此可見原發性高血壓發生發展與遺傳因素密切相關。16周齡空白組SHR大鼠最高血壓SBP達到202 mmHg，測壓過程中兩只空白組SHR大鼠死亡，可見口吐粉紅色泡沫，解剖可見肺淤血，推測該周齡高血壓大鼠發生心臟靶器官損害較重，死于心衰。

現代醫學認為原發性高血壓發病機制主要集中在腎素-血管緊張素-醛固酮系統 (Renin-angiotensin-aldosterone system, RAAS) 激活、精神神經因素、血管內皮功能異常、胰島素抵抗、腎性水鈉潴留等方面,目前多圍繞RAAS系統激活研究, 其中肝臟產生血管緊張素原 (AGT)，被腎小球入球小動脈的球旁細胞分泌腎素所激活，生成血管緊張素Ⅰ (AI) , 然后經肺循環的轉換酶 (ACE) 作用，生成的血管緊張素Ⅱ(AII)是RAAS的主要物質, 作用于血管緊張素Ⅱ受體 (AT1) , 使小動脈平滑肌收縮, 刺激腎上腺皮質球狀帶分泌醛固酮, 通過交感神經末梢突觸前膜的正反饋使去甲腎上腺素分泌增加,導致血壓升高[7]。現代研究對于血管緊張素Ⅱ各項研究較多，但對作用于AGT降壓的藥物研究報道少見。

4.2 中醫對高血壓病因病機的認識 中醫學并無“高血壓”病名，但在我國的歷代經典醫籍文獻中，對高血壓病常見臨床相類癥狀臨床癥狀、證候表現、病因病機、病程演變規律及防治方法均已有詳盡的論述。高血壓臨床常見癥狀有眩暈、頭痛、心悸、頸部疼痛，伴惡心、嘔吐、耳鳴等。因此對應于高血壓臨床癥狀，較為常見的中醫病名多集中在“眩暈”“頭痛”“肝陽”“肝風”等范疇。其中論述最為廣泛的是“眩暈”“頭痛”。中醫有關于眩暈、頭痛的最早記錄可追溯至殷商時期，甲骨文記載“疾首”病名。另《周禮·天官》有“春時有痟首疾”的記載，清·袁枚《隨園隨筆·今疾病見古書》：“即《説文》之‘酸痟頭痛’也”。對于眩暈、頭痛的病因病機認識，最早且較為系統的則見于《黃帝內經》。《素問·至真要大論》有 “諸風掉眩，皆屬于肝”的記載。以后醫家多宗《內經》之說命名，宋代《全生指迷方》首次將眩暈作為獨立病證專門論述。古之醫家對眩暈、頭痛的認識，多認為人體由于情志內傷、飲食失調、勞逸失衡、稟賦不足體質虛衰等各種起因的綜合作用下，機體出現陰陽消長失調，特別是肝腎陰陽失調，由于肝腎陰虛，肝陽上亢，產生下虛上盛的病理現象，故見頭痛、頭暈、耳鳴等癥。病久不愈，陰損及陽，則往往引發腎陽不足，亦可陰損于前，陽虧于后，最后產生了陰陽兩虛之證。若陽勝化風、化火，肝風入絡則見四肢麻痹，甚至口眼歪斜；肝火上沖，可見面紅目赤，善怒。風火相煽，灼津成痰，若肝陽暴亢，則陽亢風動，血隨氣逆，挾痰挾火，橫竄經絡，擾亂心神，蒙蔽清竅，發生中風昏厥。近現代中醫研究者對高血壓進行了廣泛研究，普遍認為高血壓一病，主要病因為情志失調、飲食不節、久病勞傷、先天稟賦不足等。主要病理環節為風、火、痰、瘀、虛，與肝、脾、腎等臟腑關系密切。病機性質為本虛標實，肝腎陰虛為本，肝陽上亢，痰濁內蘊為標。高血壓辨證分型有以臟腑分型，有以八綱分型，又有綜合分型，或與現代醫學相結合的分型等等。其中最早見于五十年代陳可翼將其分為肝熱上沖型、陰虛肝旺型、怔忡型、胸痹型、肝風型、肝腎兩虛型、中風型、婦女沖任不調型八個證型[8]。以后也有以陰陽為總綱，分為陽亢、陰虛陽亢、陰陽兩虛和陽虛型。80年代中醫《內科學》教材中則將八綱辨證與臟腑辨證結合起來，將本病分為肝火亢盛、陰虛陽亢、陰陽兩虛和痰濕壅盛型[9]。中醫認為，肝為五臟之一，其為陰中之陽，具有升發，喜條達，惡抑郁，體陰而用陽特性。其功能主疏泄、藏血、主筋而華爪、開竅于目，與膽相表里。其主疏泄即為肝氣有疏通、暢達、宣泄的功能。如肝失疏泄，則氣機不暢、淤血阻滯、經脈不利，以致血液不行，導致水腫等癥狀。中年人由于工作壓力大，家庭壓力大，居住要求、物質要求均較高，肝氣不舒自在情理，同時“年過半百，陰液自半”，肝失涵養，肝郁化火，風陽上擾而成眩暈，正如《內經》云“陽氣者，煩勞則張，精絕，辟積于夏，使人煎厥”，因此臨床上中年高血壓患者肝陽上亢、肝火亢盛、肝腎陰虛陽亢證型最為多見。

4.3 高血壓中醫治療思路 中醫治療高血壓與現代醫學以降低血壓為目的的思路不同，是以改善患者的癥狀、體征，進而達到降低血壓的目的。不論各位醫家對高血壓病的病因病機分型有何不同，治則總離不了辨證論治的范疇。其中，常見的基本辯治思路多從肝腎著手，治法上多尊古方，諸如平肝熄風法、補益氣血法、補腎填精法、燥濕祛痰法、活血化瘀法；以及溫補肝陽法、引火歸元法、益氣養陰、益氣活血法等。根據中年人高血壓的常見證型圍繞中醫肝辨證的簇集現象，認為中年原發性高血壓治療上當宗平肝潛陽、補益肝腎、滋陰熄風之法，即圍繞中醫治肝為主，根據患者病情采用平肝、清肝、疏肝、養肝等法，標本兼治。

中年穩壓膠囊根據平肝、清肝、疏肝、養肝治肝降壓機制而成方。以期為中年高血壓人群提供較為有利的治療手段和療效，改善該類人群的生活質量。全方選用天麻、桑葉、鉤藤、菊花、生石決明、牡蠣、珍珠母、決明子、夏枯草、梔子、茵陳、黃芩、水牛角、羅布麻、銀花、豨簽草、南沙參、二地、二冬、石斛、制首烏、龜板、鱉甲、玄參、黃芪、黑螞蟻、枳實、石菖蒲、薏苡仁、茯苓、車前子、川芎、丹參、當歸、紅花、三七、葛根、益母草、三七花、石蓮子、懷牛膝、蜈蚣、全蝎共四十三味藥。方中天麻性味甘、平，歸肝經，有息風止痙，平抑肝陽，祛風通絡功能。現代研究[10]有降低外周血管、腦血管和冠狀血管阻力，并有降壓，減慢心率作用。鉤藤性味甘、涼。歸肝、心包經。有清熱平肝，息風定驚之效。現代藥理研究[11]證實鉤藤、鉤藤堿及鉤藤總堿對各種動物的正常血壓和高血壓都具有降壓作用，此外，還有抑制血小板聚集及抗血栓、降血脂等作用。菊花性味辛、甘、苦，微寒，歸肝、肺經，功效疏散風熱，平抑肝陽，清肝明目，清熱解毒。《神農本草經》記載：“主諸風頭眩、腫痛”。《本草綱目拾遺》記載：“專入陽分。治諸風頭眩”。決明子對動物有降壓[12]、降血脂及抗血小板聚集作用[13]。結合桑葉、生石決明、牡蠣、珍珠母共同平肝抑陽。夏枯草辛、苦，寒。歸肝、膽經，功效清熱瀉火，明目，散結消腫。茵陳[14]、水牛角[15]等清熱藥有降壓、降血脂、抗氧化作用。羅布麻平抑肝陽，清熱，利尿，羅布麻葉煎劑有降壓作用[16]，配合梔子、黃芩、銀花、豨簽草清泄肝熱。天冬中含天冬酰胺，可使外周血管擴張、血壓下降[17]。生地甘、苦，寒。歸心、肝、腎經，補益腎陰，與南沙參、熟地、麥冬、石斛、制首烏、龜板、鱉甲、玄參皆有補益肝陰治本之效。黃芪益氣；枳實、石菖蒲疏肝理氣；車前子有效成分可擴張血管以及興奮副交感神經,阻抑交感神經，可改善胰島素抵抗所致的交感神經興奮性增加，從而降低IR，提高胰島素敏感性[18]，聯合薏苡仁、茯苓淡滲利濕以加強降壓作用。丹參、紅花能活血化瘀。葛根，現代研究表明不僅能直接擴張血管，有明顯降壓作用[19]，葛根素還能抑制血小板凝集、改善微循環及廣泛的β-受體阻滯作用[20]。三七花、石蓮子清心火，二者均有降壓作用。懷牛膝引氣下行。蜈蚣、全蝎歸肝經，善能息風鎮痙，攻毒散結，通絡止痛。諸藥合用，共奏平肝潛陽、清瀉肝熱、疏肝理氣、滋補肝陰、活血養血之效。對于原發性高血壓，尤其是中年高血壓的治療以達標本兼顧之效。

原發性高血壓人群中，中年高血壓病患逐年增加，中青年正處于生活和事業的高峰期, 有效控制血壓, 防治心腦血管疾病危險因素, 減少高血壓靶器官損害的發生率、致殘率、致死率, 對中青年高血壓患者意義尤為重大。本研究通過觀察不同給藥時期藥物對SHR大鼠血壓影響的結果，評估中年穩壓膠囊對SHR大鼠的降壓作用。通過實驗觀察到給藥一周對SHR大鼠的血壓影響不明顯。給藥三周觀察提示中年穩壓膠囊可以推遲高血壓大鼠高血壓上升平臺期。給藥五周結果提示中年穩壓膠囊對大鼠高血壓有顯著明顯降壓效果，根據研究證實中年穩壓膠囊可以有效控制成年SHR大鼠高血壓發展。基于高血壓發病機制中西醫病因病機研究，認為治肝降壓理論與RAAS系統中血管緊張素原的靶向調控可能有密切關系，有待于進一步研究證實。