飼喂復合營養性添加劑對蛋雞禽流感疫苗免疫效果的影響

田江波，馬杰，何俊，程光勝，彭曉，孟懷旺

（1.重慶優寶生物技術股份有限公司，重慶 北碚 400711；2.重慶正大蛋業有限公司，重慶 江北 400021）

高致病性禽流感具有發病率高和致死率高的特點，目前在我國依然存在著點狀暴發。預防和控制禽流感最常用和有效的方法是接種禽流感疫苗。然而有研究表明，在免疫過程中家禽受到強應激，會降低免疫抗體水平，達不到最佳免疫效果［1］。高致病性禽流感疫苗由于其本身對蛋雞有較大的免疫應激，導致更難達到很好的免疫效果，因此在生產過程中尤其在進行疫苗免疫時應盡量降低對動物的應激影響。有研究表明一些營養素能夠起到緩解應激、增強動物免疫功能的作用，例如維生素E 和硒有較強的抗氧化性，能夠提高動物體內抗氧化酶的活性，減輕機體的氧化損傷，而一些氨基酸本身是合成免疫因子的原料［2-3］。另外，一些免疫多糖例如黃芪多糖和糖萜素可以促進動物免疫器官的發育，增強免疫功能［4］。

本試驗所用復合營養性添加劑富含多種維生素、氨基酸、電解質、有機微量元素、糖萜素及黃芪多糖等，能夠在動物受到應激時補充抗應激營養需要，提高動物抵抗力，從而緩解應激對動物的不利影響。本文主要探究復合營養性添加劑對蛋雞禽流感疫苗免疫效果的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗時間及地點 試驗于2019 年6～11 月在重慶正大青年雞場進行。

1.2 試驗材料 本試驗所用復合營養性添加劑包含多種維生素、氨基酸、有機微量元素、電解質、黃芪多糖、糖萜素，來自重慶優寶生物股份有限公司，批號：19032505，19060302。

重組禽流感病毒（H5＋H7亞型）三價滅活疫苗（H5N1 Re-11＋Re-12株，H7N9 H7-Re2株），批號：190 954900；雞新城疫、禽流感（H9亞型）二聯滅活疫苗（La Sota 株＋F 株），批號：191174900。疫苗均來自青島易邦生物工程有限公司。

1.3 試驗設計 分為兩個試驗進行。

1.3.1 試驗一（表1）選擇540 只56 日齡準備接種疫苗（禽流感）的健康羅曼蛋雞，隨機均分為3 個處理。對照組：飼喂基礎日糧；處理1：從免疫前3 d 到免疫后4 d 于基礎日糧中添加1 g/kg復合營養性添加劑；處理2：從免疫當天到免疫后7 d 于基礎日糧中添加1 g/kg 復合營養性添加劑。

表1 試驗一

1.3.2 試驗二（表2）選擇2 棟50 日齡健康青年蛋雞作為試驗雞群（梯形籠養，相同日齡，每棟48 000 只）。隨機選擇一棟作為對照組，另外一棟作為試驗組。試驗組在免疫前3 d至免疫后4 d，于飲水中添加復合營養性添加劑，稀釋后飲用。試驗期間，蛋雞籠養，自由采食和飲水。

表2 試驗二

1.4 檢測指標

1.4.1 試驗一 抗體水平檢測：每個處理隨機選擇8只雞，分別于接種疫苗前3 d和接種疫苗后2、4 周（68 d 和88 d）翅靜脈采血測定HI 抗體效價。HI 抗體檢測方法參照《高致病性禽流感診斷技術》（GB/T 18936-2003）標準進行。

1.4.2 試驗二 抗體水平檢測：在免疫前4 d，免疫后第7 d、14 d、35 d，每組隨機抽取60 只進行翅靜脈采血，分離血清，測定禽流感HI 抗體滴度和均勻度。

1.5 數據統計分析 所有數據用Excel作初步整理，試驗一使用SPSS 23.0作雙因素方差分析，主效應分別是時間點和不同處理；試驗二使用SPSS 23.0作單因素方差分析，用Ducan法進行多重比較。

2 試驗結果

2.1 試驗一

2.1.1 各處理組蛋雞免疫后的抗體滴度比較 由表3可知，隨著時間的增加，蛋雞H5（Re-11）、H5（Re-12）、H9 抗體滴度均顯著增加（P＜0.01）。添加復合營養性添加劑有提高H7（Re-2）抗體滴度的趨勢（P＜0.01），并且在免疫前3 d～免疫后4 d使用復合營養性添加劑的效果更好。雖然各處理抗體水平差異未達到顯著（P＞0.05），但是從數值上看使用添加劑組的抗體水平整體高于對照組。

表3 各處理組蛋雞免疫后的HI平均抗體滴度（log2）

2.1.2 抗體變異系數 如表4 所示，使用復合營養性添加劑后抗體變異系數降低，抗體均勻度有很好的提高。根據不同的抗體來看，在免疫前3 d～免疫后4 d 使用復合營養性添加劑，抗體均勻度更好。

表4 各處理組蛋雞免疫后的HI抗體變異系數

2.2 試驗二

2.2.1 復合營養性添加劑對H5（Re-11）抗體水平的影響 由表5可知，復合營養性添加劑對H5（Re-11）抗體水平的影響無顯著差異（P＞0.05）。在起始階段，對照組的抗體效價高于試驗組，但是經過處理后第2 周，處理組的抗體效價已經高于對照組。關于變異系數，處理組在開始前遠遠高于對照組，但是經過兩周，對照組的變異系數已經高于處理組（4.7%VS0.0%）。

表5 青年雞H5（Re-11）抗體檢測結果（log2）

2.2.2 復合營養性添加劑對H5（Re-12）抗體水平的影響 由表6可知，復合營養性添加劑對H5（Re-12）抗體水平的影響無顯著差異（P＞0.05）。開始階段，對照組的抗體效價高于處理組，但在第1周，處理組抗體效價反超對照組，可見復合營養性添加劑增加了抗體產生的速度。關于變異系數，飼喂復合營養性添加劑后，抗體的變異系數降低。

表6 青年雞H5（Re-12）抗體檢測結果（log2）

2.2.3 復合營養性添加劑對H7（Re-2）抗體水平的影響 由表7 可知，復合營養性添加劑對H7（Re-2）抗體水平的影響無顯著差異（P＞0.05）。開始階段，對照組的H7（Re-2）抗體變異系數遠遠低于處理組（15.2%VS23.0%），但是經過2周后對照組的變異系數已高于處理組（4.8%VS1.7%）。

表7 青年雞H7（Re-2）抗體檢測結果（log2）

2.2.4 復合營養性添加劑對H9 抗體水平的影響 由表8可知，復合營養性添加劑對H9抗體水平的影響無顯著差異（P＞0.05）。剛開始兩個組的變異系數一樣，但是兩周后，對照組高于處理組（4.1%VS0.0%），同時處理組的抗體效價也更高。

表8 青年雞H9抗體檢測結果（log2）

3 討論

3.1 試驗一結果表明在飼料中添加復合營養性添加劑對蛋雞注射禽流感疫苗后的抗體滴度沒有顯著影響，但降低了變異系數，提高了抗體均勻度，有利于縮小蛋雞群體免疫空白期。馬渝等［5］研究發現，在飼料中添加0.05%復合營養性添加劑，可以顯著提高42 日齡花邊鴨的禽流感H5 和H9 抗體滴度。本試驗結果與其不一致，其原因可能是復合營養性添加劑的添加方式以及試驗動物不同所致。本試驗結果也表明，不同添加方式對免疫效果的影響也存在差異，從免疫前3 d到免疫后4 d使用比從免疫當天開始使用的效果更好。鐘佳佑等［6］在豬上的研究結果表明，復合營養性添加劑在疫苗注射前后均使用的效果更佳。

3.2 復合營養性添加劑可以在飼料和飲水中添加，而通過飲水的方式應用，不但可以使其更容易被吸收，還能避免產品攝入受到采食量的制約。試驗二結果表明，在飲水中添加復合營養性添加劑對抗體滴度沒有顯著影響，但能夠提高抗體均勻度，加快抗體產生的速度，使抗體水平更快達到高峰。李偉等［7］研究發現，在肉雞免疫前后5 d 通過飲水使用復合營養性添加劑，能夠延長抗體水平的高峰期，使抗體水平下降較慢。本試驗結果與其一致。在豬上的研究結果也表明，使用復合營養性添加劑后，斷奶仔豬的免疫應激反應很小，且能夠提高采食量［8］。

3.3 復合營養性添加劑對動物的免疫功能有改善作用是因為其中包含了豐富的復合維生素、復合氨基酸、有機微量元素、電解質和免疫多糖。維生素對免疫功能的影響主要依靠維生素的抗氧化作用，穩定和清除體內自由基；維生素也是動物體內生化反應中許多酶的輔酶或輔基，間接參與免疫細胞增殖、分化及其DNA 和RNA 的合成［9］。黃芪多糖和糖萜素等免疫多糖能夠促進免疫器官的發育，激活免疫細胞，提高免疫細胞的增殖能力，通過激發抗氧化酶的活性來改善動物的抗氧化能力，從而增強動物免疫力［10-11］。

4 結論

復合營養性添加劑由于復配了豐富的復合維生素、復合氨基酸、有機微量元素、電解質和免疫多糖等，對增強蛋雞免疫功能，降低免疫應激，提升抗體均勻度具有明顯的效果。