α-倒捻子素對免疫抑制小鼠免疫功能的影響

秦艷萍,李曉龍,李慧茹,陸春果,楊 粵,張鈞雄

(廣西醫科大學,南寧 530021)

免疫功能作為人體自身的防御機制,對維持免疫系統正常發揮保護作用具有重要意義,一旦某種原因使其不能正常工作,機體極易感染細菌、真菌、病毒等,最直接的表現就是容易生病。 因此,通過提高機體免疫功能進而改善生命質量,是一個值得探討研究的問題,尤其在疫情突發的非常時期,探索對抵御有害刺激具有較好預防作用,提高人體免疫功能的藥物更具意義。 目前已有的研究報道顯示,自然界豐富的天然藥物寶庫以及我國豐富的中藥寶典中,有不少的天然藥物,具有對人體適應性及免疫雙向調節的功能,即通過服用此藥物使機體處于非特異性防御能力提高狀態,促進抗體形成,以提高解毒能力;同時誘生干擾素以對抗病毒;此外,對于亞健康人群,此類藥物在恢復健康方面亦有很好的調整作用[1]。 本文研究的是α- 倒捻子素(α-mangostin),一種氧雜蒽酮化合物,存在于藤黃科藤黃屬植物山竹(garcinia mangostanal)果殼中(約80%)[2-4]。 已有的研究表明,α-倒捻子素具有多種顯著的生物學效應及藥理活性,如抗氧化、抗炎、抗過敏、抗菌及抗病毒、抗腫瘤、鎮痛等,在一些東南亞地區被用作治療腹痛、腹瀉、痢疾等疾病的傳統藥物,但在我國這種 藥物的使用并不普及[5-7]。 此外,α-倒捻子素能夠通過影響細胞增殖、阻滯細胞周期、誘導細胞凋亡等作用途徑,抑制腫瘤的生長和轉移,對結腸癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌等均表現出抗腫瘤活性[8-10]。 然而,基于目前研究發現,有關α-倒捻子素對機體免疫功能的影響未見詳細報道,鑒于山竹果殼在其他方面具有多種藥用價值,但其對機體免疫功能是否具有影響尚未可知,因此值得探討研究。 本研究以免疫抑制小鼠為研究對象,旨在探討α-倒捻子素對免疫抑制小鼠免疫功能的調節作用,為α-倒捻子素后續的研究及開發增強免疫功能新藥提供重要實驗依據。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物

50 只 6～8 周齡雌性 SPF 級 KM 小鼠購自廣西醫科大學動物實驗中心[SCXK(桂)2020-0003],體重(20±2)g。 飼養于廣西醫科大學實驗動物中心[SYXK(桂)2020-0004],經由廣西醫科大學實驗動物福利與倫理委員會審批通過(201907018),實驗研究過程中遵循3R 原則,置于清潔的動物房內飼養,給予充足的顆粒飼料和水,循環燈光(明/暗12 h)代替自然光照,室溫控制在22℃左右,濕度60%～80% 。 2 d 觀察適應后進行分組 。

1.1.2 實驗細胞

人肝癌細胞SK-HEP-1(中國科學院上海生命科學研究所)。

1.2 主要試劑與儀器

α-倒捻子素(購自成都普瑞法科技開發有限公司,Cas 號:6147-11-1);注射用環磷酰胺(CTX)(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司,H32020857);補體(正常豚鼠血清) (上海源葉科技有限公司,S27068);含10%胎牛血清的1640 培養液(上海善然生物科技有限公司,11011-8611);刀豆蛋白A(ConA)(北京索萊寶科技有限公司,C8110);MTT試劑(北京索萊寶科技有限公司,C8110);二甲基亞砜(DMSO)(北京索萊寶科技有限公司,D8371)等。

電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司);酶標儀(美國Thermo 公司);超凈工作臺(上海博迅視野有限公司醫療設備廠);CO2細胞培養箱(美國Thermo 公司);離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司)等。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物分組和給藥方式

將全部小鼠隨機分為空白對照組、免疫抑制組、低劑量組、中劑量組和高劑量組,每組10 只。 動物分組后,實驗分2 步進行:

實驗總共21 d,每天定時對小鼠進行灌胃,灌胃的劑量通過總結已有的研究,對不同劑量的效果進行對比來設置。 前7 d,空白對照組小鼠每天灌胃0.3 mL 生理鹽水,其他四個組小鼠建模,每天均灌胃0.3 mL 環磷酰胺溶液(CTX)[劑量30 mg/(kg·d)]。 后14 d,空白對照組小鼠繼續灌胃同等劑量的生理鹽水,免疫抑制組小鼠灌胃0.3 mL/d 玉米油,低劑量組小鼠灌胃0.3 mL α-倒捻子素溶液[劑量10 mg/(kg·d)],中劑量組小鼠灌胃 0.3 mL α-倒捻子素溶液[劑量 30 mg/(kg·d)],高劑量組小鼠改灌胃0.3 mL α-倒捻子素溶液[劑量100 mg/(kg·d)]。 實驗期間定期更換墊料,所有小鼠進行自由采食和飲水,每天仔細檢查小鼠活動狀況,包括采食、飲水、反應等),進行體重稱量并記錄。 末次給藥24 h 后,分別進行遲發型變態反應(DTH)檢測:足趾增厚法,巨噬細胞吞噬功能的測定:碳廓清實驗,免疫器官(脾、胸腺)指數測定,血清溶血素測定,自然殺傷細胞(NK 細胞)活性測定,外周血白細胞計數的測定和脾淋巴細胞增殖實驗。

1.3.2 遲發型變態反應(DTH)檢測:足趾增厚法

實驗進行至第17 天時,采用腹腔注射5%(v/v)雞血紅細胞(每個小鼠0.2 mL)進行致敏。 4 d后,選取同一左后足趾部位,連續測量其厚度3 次,取平均值,作為攻擊前足趾厚度;第21 天時,在測量部位皮下注射20%(v/v)雞血紅細胞(每個小鼠20 μL),于注射后24 h 測量左后足趾部厚度3 次,取平均值,作為攻擊后足趾厚度。 DTH 程度用足趾腫脹程度即攻擊前后足趾厚度差值來表示。

1.3.3 巨噬細胞吞噬功能的測定:碳廓清實驗

小鼠置于固定器中,尾靜脈注射50%的印度墨汁(0.1 mL/10 g),注射后立即計時,并于第3 min(A3)、11 min(A11),分別用毛細玻璃管從內眥靜脈叢取血20 μL,加入2 mL 0.1% Na2CO3溶液中,混勻。 以0.1% Na2CO3溶液作為空白對照,3 復孔,每孔100 μL,運用酶標儀在600 nm 波長處測定A3和A11的密度值OD。 按下列公式計算碳廓清指數K 和吞噬指數a。

K=(logA3-logA11)/(t11-t3)

a=體重/(肝質量+脾質量)×3K

1.3.4 免疫器官指數測定

采血完成后,處死小鼠,用無菌處理過的剪刀和鑷子取出肝、胸腺和脾,除去多余的結締組織和脂肪,稱重計算胸腺(A)指數和(B)指數:

A=小鼠胸腺質量/小鼠體重;B=小鼠脾質量/小鼠體重

1.3.5 血清溶血素測定(HC50)

實驗進行至第17 天,連續5 d 采用腹腔注射法注射0.2 mL 的5%雞血紅細胞,進行預免疫,末次給藥24 h 后取血,血液離心(3000 r/min,10 min),取上層血清,加入生理鹽水稀釋100 倍,取稀釋后的血清與5%雞血紅細胞懸液、10%的補體、生理鹽水各0.5 mL,混勻,放入37℃水浴鍋中靜置30 min后,立刻轉入冰水浴中終止反應,再次離心(2500 r/min,10 min)后取上清液,每孔100 μL,3 復孔,運用酶標儀于540 nm 波長處測定光密度值(A)。 用半數溶血值(HC50)來表示血清溶血素含量:

HC50=樣品光密度值A×稀釋倍數(100 倍)/雞血紅細胞半數溶血時的A 值

測定雞血紅細胞半數溶血時的A 值,取稀釋后的血清與10%補體各0.5 mL,再加入5%雞血紅細胞懸液0.25 mL 和生理鹽水0.75 mL。

1.3.6 外周血白細胞計數的測定

小鼠眼球取血后,取 20 μL 全血,加入 380 μL 2%的乙酸,混勻,取12 μL 混合液用細胞計數板測定外周血白細胞。

1.3.7 脾淋巴細胞增殖實驗:MTT 法

無菌條件下取脾,剪碎研磨,過200 目細胞篩,用無菌PBS 洗滌細胞,放入離心機(1500 r/min,5 min)離心,細胞沉淀加入2 mL 滅菌雙蒸水,吹打混勻,立即加入等體積1.8%的無菌鹽水充分混勻,再用無菌的PBS 洗滌細胞,最后用含10%胎牛血清的RPMI1640 培養液懸浮細胞,調整細胞個數為5×105/mL,加入96 孔板中,設空白對照組(只加細胞懸液)和 ConA 組(加終質量濃度為5μg/mL ConA和細胞懸液),每組設3 個復孔,每孔80 μL,置5%CO2、37℃恒溫培養箱中培養48 h 后加入5 mg/mL MTT 15 μL,再培養4 h 后,每孔加入二甲基亞砜(DMSO)200 μL,混勻,待結晶完全溶解后于570 nm波長處測定OD 值。 細胞增殖率=(OD 實驗組-OD對照組)/OD 實驗組×100%。

1.3.8 自然殺傷細胞(NK 細胞)活性測定:MTT 法

將靶細胞(人肝癌細胞SK-HEP-1)稀釋至2×105/mL,制備好的脾細胞懸液和靶細胞懸液按50 ∶1的比例加入 96 孔板,3 復孔,每孔 100 μL。 設不加靶細胞的效應細胞對照孔和靶細胞對照孔,各孔用RMPI1640 培養液調零,置于5%CO2、37℃的恒溫培養箱培養6 h,每孔加入5 mg/mL MTT 15 μL,繼續培養4 h 后,每孔加入二甲基亞砜(DMSO)200 μL,混勻,待結晶完全溶解后于570 nm 波長處測定OD值。 NK 細胞的殺傷活性=[1-(OD 效靶細胞-OD效應細胞)/OD 靶細胞]×100%。

表1 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠遲發型變態反應(DTH)的影響(,n=10)Table 1 Effect of α-mangostin in the delayed allergic reaction of immunosuppressed mice

表1 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠遲發型變態反應(DTH)的影響(,n=10)Table 1 Effect of α-mangostin in the delayed allergic reaction of immunosuppressed mice

注:與空白對照組比較,*P ＜0.05,**P ≤0.01;與免疫抑制組比較,△P＜0.05,△△P≤0.01。 下同。Note. Compared with normal control group,* P ＜ 0.05, **P ≤ 0.01.Compared with immunosuppression,△P＜0.05, △△P≤0.01. The same below.

ps α-倒捻子素劑量(mg/(kg·d))Dose of α-mangostin足趾腫脹度DTH(mm)Paw thickness index照組trol group 0 0.39±0.16制組ssion group 0 0.35±0.09組Low dose group 10 0.45±0.11中劑量組Middle dose group 30 0.40±0.10高劑量組High dose group 100 0.50±0.07*△

圖1 攻擊前、后足趾厚度(mm)Figure 1 The paw thickness index before and after the attack

1.4 統計學方法

采用SPSS 24.0 對實驗數據進行方差分析處理,數據用平均數±標準差()表示,P＜0.05 為差異顯著,有統計學意義。

2 結果

2.1 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠遲發型變態反應(DTH)的影響

測定結果顯示(表1、圖1),免疫抑制組小鼠足趾腫脹度平均數在數值上低于空白對照組,但差異不顯著(P＞0.05)。 實驗組中的低劑量組、中劑量組與空白對照組及免疫抑制組比較均無顯著差異(P＞0.05)。 高劑量組小鼠足趾腫脹度平均數,其數值顯著高于空白對照和免疫抑制組,與空白對照組及免疫抑制組比較,差異顯著(P＜0.05)。

2.2 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響

根據測定結果顯示(表2),各劑量組的碳廓清指數K 及吞噬指數a 與空白對照組及免疫抑制組比較均無顯著差異(P＞0.05)。

2.3 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠胸腺及脾臟指數的影響

測定結果顯示(表3),免疫抑制組小鼠胸腺指數、脾指數在數值上均顯著低于空白對照組,且具有顯著差異(P＜0.05)。 可見環磷酰胺對小鼠脾、胸腺的生長發育產生了明顯抑制作用,免疫抑制模型制備成功。 如圖2、圖3 所示,免疫抑制組的胸腺與脾均發生了萎縮,體積減小,而高劑量組與中劑量組的體積均比免疫抑制組的體積大。 與空白對照組比較,α-倒捻子素低劑量組、中劑量組、高劑量組小鼠胸腺指數、脾指數數值上均有所減小,并且減小程度各異。 其中胸腺指數中,中劑量組、高劑量組與空白對照組的差異顯著(P＜0.05),低劑量組無顯著差異(P＞0.05)。脾指數中,各劑量組均與空白對照組有顯著差異(P＜0.05)。 與免疫抑制組比較,三個劑量組小鼠的胸腺指數和脾指數在數值上均有所增大,且增大程度各異。 與免疫抑制組比較,高劑量組小鼠胸腺指數、脾指數平均數增大程度最顯著,分別達到(3.38±0.94)和(4.46±0.39)mg/g,α-倒捻子素可顯著提高高劑量組的胸腺指數和脾指數,差異顯著(P＜0.05);同時,α-倒捻子素還可顯著提高中劑量組的胸腺指數(P＜0.05),但脾指數則無顯著差異(P＞0.05);此外,α-倒捻子素對低劑量的脾指數無顯著的提高作用,無顯著差異(P＞0.05),但對低劑量組的胸腺指數可顯著提高,具有極顯著的差異(P≤0.01)。

2.4 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠血清溶血素的影響

測定結果顯示(表4),免疫抑制組小鼠半數溶血值HC50低于空白對照組,具有顯著差異(P＜O.05),可見免疫抑制模型制備成功。 各劑量組其數值均高于空白對照組和免疫抑制組且高劑量組的數值最高。 與空白對照組比較,α-倒捻子素中劑量組具有顯著差異(P＜0.05),低劑量組和高劑量組具有極顯著的差異(P＜0.01)。 與免疫抑制組比較,中劑量組無顯著差異(P＞0.05),低劑量組具有顯著差異(P＜0.05),而高劑量組具有極顯著的差異(P＜0.01)。

2.5 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠外周血白細胞計數

測定結果顯示(表5),高劑量組的數值最高。與空白對照組比較,除高劑量具有極顯著差異外(P＜0.01),其他組均無顯著差異(P＞0.05)。 與免疫抑制組比較,各劑量組除高劑量具有極顯著差異外(P＜0.01),低劑量組及中劑量組均無顯著差異(P＞0.05)。

圖2 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠胸腺生長情況的影響Note. Normal control group, Saline. Immunosuppression group,0.3 mL/d of corn oil. Middle dose group,30 mg/(kg·d) of αmangostin. High dose group, 100 mg/(kg·d)of α-mangostin.The same as below.Figure 2 Effect of α-mangostin on the thymus index of immunosuppressed mice

圖3 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠脾生長情況的影響Figure 3 Effect of α-mangostin on the spleen index of immunosuppressed mice

表2 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響(, n=10)Table 2 Effect of α-mangostin on the activity of natural killer cells of immunosuppressed mice

表2 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響(, n=10)Table 2 Effect of α-mangostin on the activity of natural killer cells of immunosuppressed mice

組別G空白Normal c免疫Immunosup低roups α-倒捻子素劑量(mg/(kg·d))Dose of α-mangostin碳廓清指數K/10-3 The K value for clearance of carbon particles吞噬指數a The phagocytic index對照組ontrol group 0 3.20±2.06 3.91±1.50抑制組pression group 0 1.77±1.46 2.68±0.95劑量組Low dose group 10 2.47±1.29 3.77±3.04中劑量組Middle dose group 30 3.31±1.28 4.20±1.99高劑量組High dose group 100 2.29±1.97 2.72±0.69

表3 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠胸腺及脾指數的影響(, n=10)Table 3 Effect of α-mangostin on the thymus and spleen index of immunosuppressed mice

表3 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠胸腺及脾指數的影響(, n=10)Table 3 Effect of α-mangostin on the thymus and spleen index of immunosuppressed mice

組別Groups α-倒捻子素劑量(mg/(kg·d))Dose of α-mangostin胸腺指數(mg/g)Thymus index脾指數(mg/g)Spleen index空白對照組Normal control group 0 4.42±0.69 4.61±0.59免疫抑制組Immunosuppression group 0 2.15±0.42* 2.73±1.09*低劑量組Low dose group 10 4.23±0.46△△ 2.45±0.73*中劑量組Middle dose group 30 2.90±0.80*△ 3.17±0.77*高劑量組High dose group 100 3.38±0.94*△ 4.46±0.39*△

2.6 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠脾淋巴細胞增殖的影響

測定結果顯示(表5),與空白對照組比較,免疫抑制組小鼠脾淋巴細胞增殖率顯著低于空白對照組,但無顯著差異(P＞0.05)。 各劑量組對應的脾淋巴細胞增殖率數值上均高于空白對照組和免疫抑制組,高劑量組的數值最高。 與空白對照組比較,低劑量組和中劑量組差異顯著(P＜0.05),而高劑量組的差異極顯著(P≤0.01)。 與免疫抑制組比較,中劑量組可提高脾淋巴細胞增殖率(P＜0.05)而低劑量組和高劑量組更明顯,差異極顯著(P≤0.01)。

2.7 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠自然殺傷細胞(NK 細胞)活性的影響

測定結果顯示(表5),與空白對照組比較,免疫抑制組小鼠NK 細胞活性低于空白對照組,無顯著差異(P＞0.05)。 各劑量組相對應的NK 細胞活性數值均高于空白對照組和免疫抑制組。 與空白對照組比較,各劑量組均有顯著差異(P＜0.05)。 與免疫抑制組比較,α-倒捻子素三個劑量組都能提高NK細胞活性(P＜0.05),而高劑量組可明顯提高NK 細胞活性,差異極顯著(P＜0.01)。

3 討論

動物機體的免疫功能主要是由細胞免疫、體液免疫及非特異性免疫組成,免疫系統的穩定是保證內環境穩定的關鍵,同時免疫功能的正常水平與各器官功能正常發揮具有密切聯系[11-12]。 在已有的研究中,不少學者是通過免疫器官指數測定、血清溶血素的測定以及碳廓清實驗等來分別檢測機體的細胞免疫狀態、體液免疫狀態及非特異性免疫狀態[13]。 免疫抑制是機體非特異性免疫功能異常的一種現象,是指免疫應答的抑制作用,表現為機體免疫系統對抗原信息的刺激應答反應遲緩、滯后,甚至不產生應答,從免疫器官的發育到體內各種免疫功能的指標均大大低于正常動物[14]。 研究發現,目前建立免疫抑制模型比較常用藥物有環磷酰胺、氫化可的松和地塞米松等[15]。 本實驗采用灌胃免疫抑制劑環磷酰胺(CTX)來制備小鼠免疫抑制模型,通過免疫抑制組與空白對照組比較,證明了小鼠免疫器官的發育受阻以及免疫功能降低,免疫抑制模型制備成功。 在機體的免疫功能下降時,胸腺、脾會相應發生萎縮和體積減小,很多研究通過測定胸腺指數和脾指數來間接反映機體的免疫水平[16-18]。 本研究通過對環磷酰胺所致免疫抑制小鼠的胸腺、脾指數進行檢測,發現三種劑量的α-倒捻子素對小鼠的胸腺指數具有不同程度的提高作用(P＜0.05),但并不隨著劑量的增加而進一步升高,同時與免疫抑制組比較,只有高劑量組的脾指數和胸腺指數均具有顯著差異(P＜0.05),表明α-倒捻子素對免疫抑制小鼠的免疫功能具有改善作用且存在其最適宜劑量。

表4 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠血清溶血素的影響(, n=10)Table 4 Effect of α-mangostin on the hemolysin in serum(HC50) of immunosuppressed mice

表4 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠血清溶血素的影響(, n=10)Table 4 Effect of α-mangostin on the hemolysin in serum(HC50) of immunosuppressed mice

組別Groups α-倒捻子素劑量(mg/(kg·d))Dose of α-mangostin半數溶血值HC50 The HC50 of serum空白對照組Normal control group 0 113.10±5.60免疫抑制組Immunosuppression group 0 112.52±8.78*低劑量組Low dose group 10 113.69±8.23**△中劑量組Middle dose group 30 123.63±12.76*高劑量組High dose group 100 135.03±6.43**△△

表5 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠外周血白細胞計數(, n=10)Table 5 Effect of α-mangostin on the peripheral blood leukocyte count, splenocytes proliferation and the activity of natural killer cells (NK cells) of immunosuppressed mice

表5 α-倒捻子素對免疫抑制小鼠外周血白細胞計數(, n=10)Table 5 Effect of α-mangostin on the peripheral blood leukocyte count, splenocytes proliferation and the activity of natural killer cells (NK cells) of immunosuppressed mice

組別Groups α-倒捻子素劑量(mg/(kg·d))Dose of α-mangostin白細胞計數(109)Leukocyte count脾淋巴細胞增殖率(100%)Proliferation rate of spleen lymphocytes NK 細胞活性The activity of NK cells空白對照組 Normal control group 0 2.62± 0.53 19.16±7.79 0.49±0.09免疫抑制組 lmmunosuppression group 0 2.70± 0.53 18.25±5.28 0.47±0.11低劑量組 Low dose group 10 2.68± 0.54 29.51±8.23*△△ 0.59±0.03*△中劑量組 Middle dose group 30 - 31.41±8.71*△ 0.62±0.12*△高劑量組 High dose group 100 5.04± 1.00**△△ 37.55±6.98**△△ 0.72±0.03*△△

已有研究表明脾臟和胸腺作為重要的免疫器官,具有豐富的淋巴細胞,而淋巴細胞是體內免疫活性細胞,其增殖能力的強弱,一定程度上可以反映免疫功能的高低[19-21]。 機體發生炎癥時,白細胞數目將大量增加,從而達到刺激動物免疫功能增加的作用[22]。 溶血素作為體現體液免疫的一種途徑,通過改變血液的粘稠性,使其保持在適當的范圍內,當其生成增多時,紅細胞溶血會出現吸光度值提高的現象,表明機體的體液免疫有所增強[23-24]。巨噬細胞屬免疫細胞,具有吞噬、殺傷及消化病原體的功能,并在特異性免疫應答中參與抗原的加工與呈遞及免疫調節,巨噬細胞的激活可使機體抗感染能力提高,從而增強機體的非特異性免疫功能[16,19]。 本研究結果顯示,與免疫抑制組比較,中劑量組可提高脾淋巴細胞增殖率(P＜0.05)而低劑量組和高劑量組更明顯,差異極顯著(P≤0.01),表明最適宜劑量存在一定范圍內。 而在血清溶血素實驗中,與免疫抑制組相比,中劑量組無顯著差異(P＞0.05),低劑量組可提高半數溶血值(P＜0.05),高劑量組可顯著提高半數溶血值(P＜0.01)。 NK細胞作為免疫調節細胞以及固有免疫的效應細胞,具有重要的免疫調節作用[25-26],研究結果顯示,α-倒捻子素三個劑量組也都能提高NK 細胞活性(P＜0.05),但只有高劑量組可明顯提高NK 細胞活性,差異極顯著(P＜0.01)。 與此同時,在外周血白細胞計數測定及遲發型變態反應中,與免疫抑制組比較僅有高劑量組有顯著差異(P＜0.05)。 綜合上述分析,研究結果顯示高劑量組小鼠免疫功能的改善效果最為明顯,表明α-倒捻子素的最適劑量更偏向于高劑量,在一定范圍內具有劑量依賴性。 本研究中α-倒捻子素對小鼠機體的細胞免疫及體液免疫的提高作用由以上實驗數據分析可得,但在碳廓清實驗中,本研究的各劑量組均無統計學意義,對比黃偉寬、劉哲慧等學者在此類研究中的所設計的實驗方法與所得實驗結果[13-14,19],本實驗中出現的個別實驗結果異常以及各實驗結果之間的差異,可能是由藥品種類差異、劑量差異、實驗方法不完善及實驗的動物數量有限等原因造成,因此仍需要進一步研究驗證。 免疫功能是多方面免疫能力共同作用的結果,α-倒捻子素對小鼠不同方面免疫能力的影響存在差異,但在整體上未影響本研究對免疫力作用結果的判斷。

綜上所述,我們的研究表明α-倒捻子素通過改善和提高免疫抑制小鼠免疫器官的修復能力及免疫細胞的增殖能力,對其免疫功能進行調節和提高,α-倒捻子素對免疫抑制小鼠免疫功能改善的最適宜劑量更偏向于高劑量,在一定范圍內具有劑量依賴性。 而關于α-倒捻子素如何誘導免疫抑制小鼠免疫功能改善和提高的機制還需要深入研究,為α-倒捻子素的臨床應用提供新的依據。