一種國產全自動輸血相容性檢測儀器的性能驗證分析研究

何欣，劉思琪，陳麟鳳

首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院 輸血科，北京 100038

引言

血型檢測和交叉配血是輸血相容性檢測中的重要實驗，結果準確性是臨床用血安全的保障[1-4]。而檢測儀器、試劑國產化，降低檢測耗占比也是醫院發展的趨勢之一[5]。目前微柱凝膠法是全國各三甲醫院進行血型鑒定和交叉配血的主要檢測方法，實際工作中進口全自動分析儀已引入國內十幾年[6-9]。為了滿足本院臨床備血檢測和大量血型初篩及復檢的需要，提高臨床輸血的安全性、高效性、精準性，同時實現儀器國產化的目的，本科室引進力博全自動血型配血儀，開展血型檢測，Rh分型和交叉配血。根據實驗室管理要求設計全自動血型配血儀的性能驗證計劃，根據力博全自動血型分析儀（AISEN120）的功能組成，對本實驗室的ABO正定型、ABO反定型、Rh(D)血型、交叉配血等4個項目與已有的WADiana儀器進行符合性、重復性驗證，以證實該檢測體系是否能夠滿足臨床工作的要求。此外還對其軟件連接，結果的通訊傳輸進行升級，以減少人為差錯。本研究首次將力博全自動血型配血儀器投入使用過程中的問題發現、處理流程進行報告，為引入或使用相關儀器的醫療機構輸血相容性檢測實驗室提供新儀器性能驗證方法，同時也為儀器生產廠家優化設備功能提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

臨床符合輸血適應癥患者，由醫護人員抽取患者新鮮抗凝全血送至輸血科，審核后進行輸血相容性檢測實驗。本研究共進行了300例血型和100例交叉配血的比對實驗。根據《臨床輸血技術規范》要求，每位患者抽取4 mL EDTA抗凝血。標本排除條件：① EDTA抗凝管，采血量低于4 mL，離心后的標本，血漿、紅細胞高度低于1.0 cm；② 存在乳糜血、溶血、凝塊等有可能影響結果的標本；③ 因病人本身疾病因素血型和交叉配血有問題而無特殊抗體的患者；④ 懷疑細菌污染的標本。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器

WaDaina全自動配血儀（Diagnostic Grifols，S.A.，西班牙）和力博醫藥專用機（AISEN120）（煙臺艾德康生物科技有限公司，中國）

1.2.2 試劑

兩臺儀器均使用配套試劑耗材。

WADiana：DaniaDG Gel Sol血型分析用稀釋液，0.8%人ABO血型反定型紅細胞試劑，0.8%紅細胞抗體篩選細胞，抗人球蛋白檢測卡（微住凝膠），ABO-Rh血型檢測卡（微柱凝膠），洗液A和洗液B。

AISEN120：2%～4% ABO血型定型紅細胞試劑，2%～4%不規則抗體篩選紅細胞試劑，血型分析用稀釋液，Rh血型分型檢測卡（柱凝集法），抗人球蛋白（抗IgG+C3d）檢測卡，ABO/Rh血型定型檢測試劑卡（微柱凝膠法）、一次性吸頭，96深孔板。血型鑒定和抗體篩查質控品。

1.3 試驗方法

兩臺儀器每日開機后分別檢測質控品，進行室內質量控制。

1.3.1 WADiana 檢測

血型分析用稀釋液，人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒，紅細胞抗體篩選細胞室溫放置30 min，DG Ge Coombs卡抗人球蛋白檢測卡，DG Gel ABO-Rh血型檢測卡（微柱凝膠法）離心后使用。按照儀器操作要求進行血型，抗體篩查和交叉配血試驗。

1.3.2 AISEN120檢測

ABO血型定型紅細胞試劑，使用前進行稀釋，即1 mL細胞+2 mL生理鹽水配制終濃度為1%的細胞溶液。上機前再次檢查標本量符合要求，無乳糜溶血和凝集，每份標本分別在兩臺儀器進行檢測。

1.3.3 手工試管法

本研究僅限實驗室內結果的兩種儀器比對，血型結果不符情況均以手工試管法復檢作為判斷標準。試管法血型檢測按照《實用血液免疫學血型理論和實驗技術》相關操作進行。

1.4 雙向傳輸設置

艾德康全自動血庫系統的配套軟件與我院檢驗之星和佰利亞軟件相連接，設置兩個軟件的雙向功能。即：計算機與儀器之間的雙向通信，可通過條碼識別和項目核收，既可以提高工作效率，也可以降低人工錯誤率。但是這些儀器和軟件來自不同的廠商，存在著數據傳輸方式和數據格式不同的問題，所以本研究的雙向設置依托兩個軟件共同完成。在使用雙向功能時只可以開一個軟件識別項目，實驗完成傳輸時兩個軟件可以同時使用。

2 結果

2.1 血型比對結果

連續1周檢測患者和獻血員血型，累計檢測300例標本。WADiana和AISEN120結果比對結果，見表1。

表1 Diana和AISEN120血型檢測結果比對

將AISEN120儀器與Diana結果不符標本進行試管法復查并分析原因，結果顯示照相判讀、血型卡和反定標本干擾所占比例最大，分別為57%，24%和12%，其他原因如表2所示。

表2 AISEN120“問題”樣本血型不符原因分析

2.2 交叉配血結果對比

連續1周對兩臺儀器進行交叉配血實驗比對，共檢測樣本100例，結果及分析如表3～4所示。

表3 Diana和力博AISEN120交叉配血結果比對

表4 AISEN120與WADiana交叉配血不符原因分析

2.3 問題處理

兩臺儀器都是微柱凝膠方法，過儀器比對試驗，本研究認為導致AISEN120儀器臨床實驗與WADiana不符的原因主要集中在照相判讀、強度判讀標準、血清加樣量等幾個方面，具體分析如下：① 照相判讀，判讀儀過于敏感，肉眼觀測不到也會報出“？”或者“陽性”；② 血清加樣量，標本反定的反應凝集強度達不到判讀標準。檢查儀器血清和紅細胞的加樣量，發現紅細胞和血清的加樣量均為50 μL；③ 試劑原因，用低離子配制反定細胞會加強反應體系，結果會有溶血導致判讀結果為“？”；④ 耗材原因，試劑卡中有氣泡和保養液分布不均；⑤ 纖維蛋白，凝塊，標本中有纖維蛋白的影響，或者有凝集的樣本加樣槍吸走凝塊影響結果；⑥ 抗體減弱，患者自身原因導致血型反定凝集強度偏弱。

分析原因后處理如下：① 協調儀器工程師根據實際情況調整判讀系統；② 檢查各個項目的實驗參數，按照儀器要求參數設置了實驗相對應的加樣量（紅細胞懸液50 μL+血清25 μL）；③ 使用生理鹽水稀釋國產反定試劑紅細胞；④ 在使用前，實驗室工作人員檢查ABO血型卡和抗人球蛋白卡，離心后方可使用；⑤ 標本離心前和上機前，確認是否含凝塊和纖維蛋白絲，避免影響儀器的判讀造成的假陽性。

調整儀器和實驗干擾因素后，本實驗室分別進行了50例血型檢測和交叉配血實驗，兩臺儀器檢測結果符合率分別為99%和100%，具體情況見表5～6。

表5 調整后血型鑒定比對結果

表6 調整后交叉配血比對結果

交叉配血驗證50例標本，主次側不一致5例均為次側不一致，次側不一致是因為兩臺儀器對凝集強度判讀的原理不同造成，但并不影響對配血實驗結果的判斷及臨床用血安全，故認為調整后AISEN120配血結果與WADiana相符率為100%。

3 討論

西班牙Diagnostic Grifols，S.A.公司的WADiana全自動配血儀因操作方便快捷、結果準確，作為輸血相容性檢測儀器在不同級別醫療機構輸血科廣泛使用[10]。但由于進口儀器，尤其是試劑細胞在運輸時間和檢測成本等方面的限制，醫療機構選擇引入適用于本機構日常工作需要的性能穩定的國產儀器和試劑，成為亟需解決的問題[11-13]。但新儀器引進投入臨床使用過程中通常會遇到各種問題，本研究分類記錄下遇到的問題，并分析判斷問題是否可控以及如何對結果進行質量控制。

在本研究中，發現儀器照相判讀是影響實驗結果準確性的最大問題（分別占血型鑒定、交叉配血與WADiana不一致結果的57%和25.6%）。WADiana的照相系統判讀儀組成包括透鏡、透鏡光源，卡支架、卡/微板照相機，卡/微板光源，檢測器，玻璃微板支架，圖像卡。原理如下：通過拍照反應圖譜保存到計算機并自動判讀。判讀的敏感可設定，判讀在膠卡中的免疫血清，凝血反應，通過條形碼識別膠卡。AISEN120照相系統結果判讀原理與其不同，為底部掃描成像，CCD數碼相機記錄反映圖像，通過調節透鏡光源讀取圖像體積面積反映凝集程度和敏感度，這可能導致凝集強度相似，而結果判讀不一致的問題。與AISEN120工程師溝通后精準調節儀器照相系統解決了這一問題。

由于儀器報出的結果中“？”較多，與實驗室現有成熟進口儀器相比，使得檢測結果一致性較低。分析結果表明儀器報出的結果中“？”的原因有兩種，一種就是判讀不出結果，判讀儀出現問題，另一種是出現溶血現象，導致結果判讀“？”，手工復檢和WADiana均未發生溶血，分別從儀器實驗參數、加樣量、試劑等方面進行分析。由于試管法鑒定血型中使用玻璃（試劑瓶中的吸頭）或塑料移液器（塑料吸管），均未經校準而難以精確加樣。加樣量可能會隨著施加到吸頭的壓力或滴管/移液器的加樣角度改變而發生根本變化。全自動檢測系統要求血清與細胞比例在規定的范圍內。如果使用不正確的試劑加樣的方式，結果不可靠。例如，對于使用低離子強度鹽水的測試系統，血清與細胞比例至少應為40：1（血清體積×100/紅細胞體積×濃度）。本研究發現，AISEN120全自動檢測體系中使用低離子液配制反定細胞，并且血漿加樣量為50 μL（儀器出廠默認體積），有加強反應強度效應，導致溶血，從而影響了判讀結果。隨后本研究改為使用生理鹽水稀釋國產反定細胞，將血清加樣量調整25 μL，血型正反定結果不一致問題得以解決。

實驗用耗材問題分析顯示：試劑與耗材在運輸過程中，會有不可避免的磕碰，凝膠卡就會產生氣泡與保養液的散落，甚至保養液濺落在外。通過一段時間的觀察，發現實驗血型和抗人球卡確實會有干裂和氣泡的問題，導致結果假陽性，提示工作人員在實驗中必須仔細的去檢查耗材質量，不僅檢查實驗耗材的有效期，還要檢查外觀是否完整，凝膠卡保養液是否足量，是否存在干裂，是否有氣泡。通過離心卡片后，這些問題是可以避免的。

另外，本研究增設了儀器的雙向功能，由機器來識別所需實驗項目，雙向功能不僅可以識別項目，還可以核收條碼信息所需要的實驗項目，減少人工差錯，降低成本浪費[14-15]。在使用過程中，AISEN120全自動血型配血儀可以快速進行患者血型鑒定和交叉配血試驗，并可以準確進行Rh血型分型，實現患者精準輸血。具有如下：① 檢測速度快，每小時360T測試，兩針加樣通道，雙離心機；② 國產配套試劑成本低，降低我科耗占比；③ 可以同時進行大量標本的檢測，一個標本可同時運行多個實驗項目（抗體篩查，血型檢測，Rh分型檢測，DAT的檢測，交叉配血試驗）；④ 樣本可連續裝載，可同時裝載120（24×5）個樣本，12（2×6）瓶試劑，96張微柱凝膠卡，采樣一次性加樣吸頭。只要有空余樣本裝載架，可隨時加入樣本進行各項實驗；⑤ 可插入急診樣本；⑥ 保養操作簡便。

綜上所述，經過實際應用比對、查找問題、分析原因和優化檢測關鍵點，本科室AISEN120全自動血型配血儀從儀器性能的穩定性，與進口儀器比對的重復性及每日檢驗結果的可靠性、準確性均得到了切實改進，可以替代進口儀器與試劑，保障臨床用血安全。本研究中的新儀器性能驗方法和問題處理流程能有效驗證全自動血型分析系統的性能是否滿足臨床需求，可作為同類檢測系統的性能驗證和改進操作流程。