血NGAL、L-FABP、CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN

王小明　　彭四萍　廖潔

[摘要] 目的 探討血中性粒細胞明膠酶相關性載脂蛋白（NGAL）、肝型脂肪酸結合蛋白（L-FABP）、胱抑素C（CysC）早期預測絕經期婦女經皮冠脈介入（PCI）術后對比劑腎病（CIN）。 方法 選擇2018年6月至2020年9月我院收治的絕經期婦女PCI術后CIN患者80例為試驗組，同期在我院行PCI術治療且術后無CIN發生的絕經期婦女80例為對照組。對比兩組NGAL、L-FABP、CysC差異，分析NGAL、L-FABP、CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN價值。 結果 試驗組NGAL、L-FABP、CysC水平高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;NGAL早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的曲線下面積（AUC）為0.919，敏感度和特異度分別為88.96%、87.01%;L-FABP早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的AUC為0.851，敏感度和特異度分別為85.95%、88.11%;CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的AUC為0.922，敏感度和特異度分別為83.24%、94.68%。 結論 血NGAL、L-FABP、CysC均是早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的有效指標，可作為診斷CIN的“肌鈣蛋白”。

[關鍵詞] 絕經期婦女;對比劑腎病;經皮冠脈介入;中性粒細胞明膠酶相關性載脂蛋白;胱抑素C;肝型脂肪酸結合蛋白

[中圖分類號] R587.2? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2021）13-0021-04

Value of serum NGAL， L-FABP and CysC in early prediction of CIN of menopausal women after PCI

WANG Xiaoming1? ?PENG Siping2? ?LIAO? Jie1

1.Medical Laboratory， Pingxiang People′s Hospital in Jiangxi Province， Pingxiang? ?337000， China; 2.Department of Cardiovascular Internal Medicine， Pingxiang People′s Hospital in Jiangxi Province， Pingxiang? ?337000， China

[Abstract] Objective To explore the value of serum neutrophil gelatinase-associated apolipoprotein （NGAL）， liver fatty acid binding protein （L-FABP） and cystatin C （CysC） in the early prediction of contrast-induced nephropathy （CIN） for menopausal women after percutaneous coronary intervention（PCI）. Methods A total of 80 menopausal women with CIN after PCI in our hospital from June 2018 to September 2020 were selected as the experimental group， while 80 menopausal women without CIN after PCI in our hospital at the same time were selected as the control group. The differences of NGAL， L-FABP and CysC between the two groups were compared， and the value of NGAL， L-FABP and CysC in the early prediction of CIN of menopausal women after PCI was analyzed. Results The levels of NGAL， L-FABP and CysC were higher in the experimental group than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The area under curve （AUC） of NGAL for early prediction of CIN in menopausal women after PCI was 0.919， and the sensitivity and specificity were 88.96% and 87.01%，respectively. The AUC of L-FABP for early prediction of CIN in menopausal women after PCI was 0.851， and the sensitivity and specificity were 85.95% and 88.11%，respectively. The AUC of CysC for early prediction of CIN in menopausal women after PCI was 0.922， and the sensitivity and specificity of 83.24% and 94.68%， respectively. Conclusion Serum NGAL， L-FABP and CysC are all effective indicators for early prediction of CIN in menopausal women after PCI， and can be used as “troponin” for diagnosis of CIN.

[Key words] Menopausal women; Contrast agent nephropathy; Percutaneous coronary intervention; Neutrophil gelatinase-associated apolipoprotein; Cystatin C; Liver fatty acid binding protein

經皮冠脈介入（Percutaneous coronary intervention，PCI）是臨床常用治療手段，因血管內對比劑的使用增加會增加對比劑腎病（Contrast induced nephropathy，CIN）發生的風險[1]。CIN多由大劑量高滲性含碘造影劑所致，臨床癥狀為尿中出現尿酸鹽結晶、腎小管上皮細胞等，能夠損害患者消化、循環系統，嚴重時可誘發腎衰竭、呼吸衰竭等并發癥，甚至危及生命安全[2]。因此，早期準確預測CIN，盡早給予患者相應的治療措施，對改善患者預后至關重要。因受蛋白攝入量、藥物等因素影響，臨床常用的血清肌酐（Serum creatinine，Scr）診斷滯后于實際腎小球濾過率的改變，一般在術后24 h出現水平升高，難以早期反映腎損傷[3]。血中性粒細胞明膠酶相關性載脂蛋白（Neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）、肝型脂肪酸結合蛋白（Liver fatty acid binding protein，L-FABP）、胱抑素C（Cystatin C，CysC）等腎標志物指標逐漸受到臨床關注。本研究分析血NGAL、L-FABP、CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN，為臨床早期診斷和治療提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年6月至2020年9月我院收治的絕經期婦女PCI術后CIN患者80例為試驗組，年齡51～69歲，平均（59.24±2.45）歲;對比劑使用劑量71～130 mL，平均（104.65±14.58）mL;CIN病程4～10 d，平均（7.21±0.64）d。選擇同期在我院行PCI術治療且術后無CIN發生的絕經期婦女80例為對照組，年齡52～70歲，平均（59.63±2.42）歲;對比劑使用劑量68～129 mL，平均（104.37±14.35）mL。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標準

納入標準：認知功能正常;簽署知情同意書;凝血功能正常;絕經期女性;試驗組術前腎功能正常，碘造影劑使用24～72 h后血清Scr濃度從基線值相對增加>25%或絕對增加≥0.5 mg/dL，符合CIN中相關診斷標準[4];對照組腎功能正常。

排除標準：急慢性感染;急性心肌梗死;慢性心力衰竭;急性腎功能不全;對比劑過敏;行血液透析治療。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。

1.3 方法

采集兩組患者術后24 h空腹靜脈血5 mL，離心10 min，3000 r/min，獲取上清液，放置在-20℃冰箱中備用。

1.3.1 血清NGAL、L-FABP檢測? 使用酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）測定血清NGAL、L-FABP。分別設置校準品孔、空白孔和待測樣品孔，在空白孔中加入標準品&樣品稀釋液100 μL，將100 μL標準品加入校準品孔，100 μL待測樣品加入待測樣品孔，每孔加入100 μL生物素化抗體，振蕩混勻，給酶標板覆膜，孵育90 min，37℃恒溫。酶標板底部加樣品，盡量不接觸孔壁，輕晃混勻，控制加樣時間在10 min內。孔內液體棄去，依次加入稀釋好的洗滌液，洗板3次，每孔浸泡30 s至1 min，液體甩干，去除孔內液體。每孔加入10 μL辣根過氧化物酶標記抗體親和素工作液，避光放置，覆膜，孵育30 min，37℃恒溫。取出酶標板，孔內液體棄去，每孔加入350 μL稀釋好的洗滌緩沖液，室溫下靜置1 min，洗滌緩沖液甩去，重復上述操作5次。每孔加入90 μL底物溶液，酶標板加上覆膜，避光孵育15 min，37℃。分別在每孔中加入終止液50 μL，終止反應，15 min內使用伯樂680型酶標儀，在450 mm波長處對各孔的OD值檢測，計算每組復孔的平均OD值。

1.3.2 血清CysC檢測? 使用顆粒增強散射免疫比濁法測定CysC。取250 μL樣本前處理液和20 μL血清混勻，反應10 min，37℃。加入SAHasa抑制劑250 μL，室溫反應5 min，加入腺苷脫氨酶溶液250 μL，室溫反應5 min。將校準品或前處理后的樣本加入試劑R1，反應5 min，37℃。在加入試劑R2，反應5 min，37℃。試劑R2反應1 min、5 min后分別讀取第1個和第2個吸光度值。校準品濃度為0時，試劑RI中的SAH mAb抗體全部與試劑R2乳膠顆粒上交聯SAH抗原形成免疫復合物，吸光度達最高;校準品濃度為非0時，校準品中的ASH會結合試劑R1中的SAH mAb抗體反應，剩下的SAH mAb與試劑R2乳膠顆粒上交聯SAH抗原形成免疫復合物，吸光度對于0濃度吸光度。按照樣本中SAH濃度明確標準曲線。儀器為貝克曼AU5800全自動生化分析儀。

1.4 觀察指標

①對比兩組NGAL、L-FABP、CysC差異;②分析NGAL、L-FABP、CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN價值。

1.5 統計學方法

應用SPSS 21.0統計學軟件分析數據，計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，繪制受試者工作曲線（ROC），并計算曲線下面積（AUC），分析NGAL、L-FABP、CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN價值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組NGAL、L-FABP、CysC水平比較

試驗組NGAL、L-FABP、CysC水平高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2 NGAL、L-FABP、CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN價值

NGAL早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的AUC為0.919，敏感度和特異度分別為88.96%、87.01%;L-FABP早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的AUC為0.851，敏感度和特異度分別為85.95%、88.11%;CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的AUC為0.922，敏感度和特異度分別為83.24%、94.68%。

3 討論

CIN是醫院獲得性腎衰竭的主要因素之一，能夠增加并發癥、延長患者住院時間，并可增加遠期不良事件的發生，病死率約為1.2%～16.0%。尚不十分清楚CIN發病機制，可能與以下幾點因素有關：①對比劑能夠造成腎血管短暫擴張和持續4 h的收縮，誘發髓質缺血，腎小管上皮嚴重缺氧而發生損傷;②對腎小管上皮的直接毒性作用;③對比劑會增加尿酸鹽重吸收，尿酸鹽沉積會阻塞腎小管，或誘發Tamm-Horsfall尿蛋白分泌、沉淀，阻塞腎小管，造成腎小管進一步損傷[5-6]。大部分CIN是在對比劑使用后2～3 d后出發生Scr升高，4～5 d后方可達到峰值，而多數PCI術治療患者會在術后1～3 d內出院，住院期間期間檢查的Scr難以早期準確反映患者腎損害，易造成患者錯失治療最佳時機，影響預后恢復[7-8]。

NGAL屬于載脂蛋白超家族成員，生理狀態下在覆蓋活化的上皮細胞的各種組織和器官中不存在NGAL，僅表達于粒細胞前體及受損的活化上皮細胞中[9]。當腎臟發生損傷時，位于腎小管上皮內的NGAL可短時間內迅速升高，短期內可在血液中被檢測到。NGAL是在腎組織產生mRNA和蛋白質的最早最快上升的基因，為無偏轉錄，腎受損后幾分鐘至幾小時，受損的遠端腎單位誘導和釋放NGAL，可作為診斷腎損傷敏感且可靠的生物標志物之一[10-11]。L-FABP屬于游離脂肪結合蛋白，是維持機體穩態的重要因素，參與游離脂肪酸在細胞內的代謝、轉化等途徑，在腎臟近端小管也有表達[12-13]。腎損傷時，大量位于腎近曲小管中的游離脂肪酸過度堆積，其過氧化產物和氧化產物能夠造成腎小管損傷進一步加重，促使細胞內L-FABP呈高表達，是反映腎組織損傷的敏感指標之一。CysC是一種廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液中的半胱氨酸蛋白酶抑制劑蛋白質，能在所有的有核細胞內以恒定速度持續轉錄與表達，正常情況下血清中含量極低，且不會受到年齡、性別、肝臟疾病等因素影響[14-15]。CysC分子量小，能夠經腎小球濾過，完全被腎小管上皮細胞重吸收并于細胞內降解，是反映腎小球濾過率變化的理想標志物。與Scr相比，CysC預測到CIN發生早1～2 d。本研究中，試驗組NGAL、L-FABP、CysC水平高于對照組，NGAL早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的AUC為0.919，敏感度和特異度分別為88.96%、87.01%;L-FABP早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的AUC為0.851，敏感度和特異度分別為85.95%、88.11%;CysC早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的AUC為0.922，敏感度和特異度分別為83.24%、94.68%，提示血NGAL、L-FABP、CysC均是早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的有效指標，能夠篩查PCI術后高危患者實施重點監測，早期給予患者有效的干預措施，改善預后。

綜上所述，血NGAL、L-FABP、CysC是早期預測絕經期婦女PCI術后CIN的有效指標，能夠篩查絕經期婦女PCI術后CIN高危患者，指導臨床實施相應防治措施。

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（收稿日期：2020-12-12）