不同產地羅漢松種子揮發油GC-MS分析

彭益淳，林樂珍，黃增瓊

(廣西醫科大學 藥學院，廣西 南寧 530021)

羅漢松種子為羅漢松科羅漢松屬植物羅漢松Podocarpusmacrophyllus(Thunb.) D.Don或短葉羅漢松Podocarpusmacrophyllus(Thunb.)D.Donvar.maki(Sieb.) Endl.的果實，由種子和花托組成[1]。羅漢松主要分布在我國江蘇、湖南、浙江、福建、廣東和廣西等地，廣西北海是全國最大的羅漢松種植基地，種植面積達1660 hm2[2]。文獻記載羅漢松種子具有治療血虛面色萎黃和心胃痛的功效[1]。目前，國內外關于羅漢松種子化學成分的研究報道較少。20世紀60-70年代，日本學者研究了羅漢松種子及同屬其他植物種子中的降二萜內酯類化合物[3-6]。近年來，國內學者孟軍[7]、龐逸敏[8]和Feng[9]先后研究了羅漢松種子中的氨基酸、多糖和降二萜內酯類成分。趙凱麗[10]在廣西北海羅漢松種子揮發油發現了具有抗心肌缺血作用的化學成分川芎嗪，并認為該成分與羅漢松實治心胃痛功效有關。為了解國內其他產地羅漢松種子揮發油化學組成，為今后相關藥理作用研究及藥材質量標準研究提供參考，本研究采用GC-MS法對國內六個不同產地羅漢松種子揮發油的化學組成進行了測定和分析，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

WJX-A500高速多功能粉碎機(上海緣沃工貿有限公司)；EL-204電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；Varian300-MS氣相色譜-質譜聯用儀(美國瓦里安公司)。羅漢松實種子采自廣西北海或購買于宿遷市日出種業有限公司，產地為分別為湖南長沙市、江西奉新縣、江蘇宿遷沭陽縣、福建泉州永春縣、河南洛陽市、湖北恩施市，經廣西醫科大學藥學院生藥學教研室李瓊講師鑒定為竹柏科植物羅漢松Podocarpusmacrophyllus(Thunb.) D.Don的種子。石油醚(30～60 ℃)和無水硫酸鈉均為分析純。

1.2 揮發油的提取

取產于河北、湖南、江蘇、四川、廣西、福建的羅漢松種子，按參考文獻[10]所述方法進行提取，均得到氣味芳香的淡黃色液體，置于4 ℃冰箱中備用。

1.3 GC-MS分析條件

1.3.1 氣相色譜條件 VF-5ms石英毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱溫：50 ℃保持4 min，然后以15 ℃/min的速率升溫至110 ℃，再以2 ℃/min的速率升溫至150 ℃，再以20 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持5 min。載氣：He，載氣流速：1 mL/min，進樣溫度：250 ℃，進樣量：1 μL，分流比：50。

1.3.2 質譜條件 EI(電子轟擊)：70 eV，倍增器電壓1 250 V，掃描質量范圍45～500m/z。

1.3.3 上機前處理及成分分析 分別取不同產地揮發油樣品2 μL，用石油醚定容至1 mL，即得。樣品進樣測定后，檢索質譜庫，以峰面積歸一化法測得揮發油各組分相對百分含量。

2 結果

各產地羅漢松種子揮發油化學組成及其相對含量，見表1。各產地羅漢松種子揮發油相對含量最高的4種成分，見表2。

表2 不同產地羅漢松種子揮發油相對百分含量較高的前四種化學成分

由圖1可見，以河北產羅漢松種子揮發油氣相色譜圖為例，在保留時間6 min、8 min、15 min、16 min處有4個較大的峰，按峰面積計算，其含量占3%～10%，經鑒定其成分是α-蒎烯、檸檬烯、α-蓽澄茄油烯和古巴烯，在保留時間18 min處有個更大的峰，鑒定為β-石竹烯，按峰面積計算占23%左右；但在福建產羅漢松種子揮發油中，檸檬烯含量更大，而β-石竹烯的含量更小。

圖1 河北產羅漢松種子揮發油GC-MS總離子流

由表1可見，各地羅漢松種子揮發油中的各化合物主要為β-石竹烯、古巴烯、γ-欖香烯、α-蓽澄茄油烯、石竹烯氧化物、α-石竹烯、β-欖香烯、桉油烯醇、β-蓽澄茄烯、檸檬烯、蒎烯等11種；其中β-石竹烯、古巴烯、γ-欖香烯、α-蓽澄茄油烯的含量較高，這4種化合物的相對百分含量之和在各地樣品中均超過40%，而其他成分相對百分含量較少。值得注意的是，在江蘇樣品中并未檢測出γ-欖香烯，而在福建樣品中檢測出了12%的檸檬烯，含量占比遠遠多于其他地區的樣品。

3 討論

趙凱麗等[10]曾對廣西北海羅漢松種子揮發油化學組成進行了GC-MS分析，發現揮發油中含有大量川芎嗪。本研究再次對廣西北海產羅漢松實揮發油進行了測定，但未鑒定出川芎嗪。我們曾采用HPLC法對本研究所采集的北海產羅漢松種子揮發油中的川芎嗪含量進行測定，發現其含量極低[11]。這可能與羅漢松種子采收季節或種植年份不同有關。分析羅漢松葉精油的化學成分[12]，各產地羅漢松種子揮發油均不含2(1H)-Phenanthrenone，3，4，4a，9，10，10a-hexahydro-7-methoxyl-1，1，4a-trimethyl和貝殼杉烯，但富含β-石竹烯、古巴烯等成分。本研究六個不同產地羅漢松實揮發油化學組成與王全澤報道的羅漢松葉揮發油化學成分相似[13]，均富含石竹烯、γ-欖香烯、α-蓽澄茄油烯和古巴烯等成分。

現代藥理學研究表明，揮發油中的許多成分具有較高的藥用價值，如β-石竹烯及其衍生物具有鎮咳平喘[14]、鎮痛抗炎[15]、抗氧化[16]等作用。也曾有報道γ-欖香烯、β-欖香烯對HCT-8、KB、K562和EJ腫瘤細胞有增殖抑制作用，其中γ-欖香烯對小鼠艾氏腹水癌有明顯的治療作用[17]。檸檬烯用途廣泛，研究發現其具有防腐保鮮、抑菌、抗氧化、抗炎等作用[18]，對結腸癌、乳腺癌、胃癌、皮膚癌等癌細胞的增殖也有顯著抑制作用[19]。此外，檸檬烯對酒精性肝損傷[20]及腦損傷[21]有減輕效果。可以推測，羅漢松種子揮發油可能在抗腫瘤方面具有較好的生物活性。下一步我們將對羅漢松實揮發油的抗腫瘤、抗心肌缺血等生物活性進行深入研究；同時，對更多產地及不同采收季節羅漢松實揮發油化學組成進行分析，以全面了解其活性物質及化學組成。