防風(fēng)飲片炮制工藝研究

李俊明，陳光宇，何 群，謝夢洲*

(1.中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心， 湖南 長沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208)

防風(fēng)，別名銅蕓、回云、回草、百枝、百種，為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikoviadivaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根，春、秋二季采挖未抽花莖植株的根，除去須根和泥沙曬干。主產(chǎn)中國黑龍江、四川、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、寧夏、甘肅、陜西、山西、山東等省區(qū)，生長于草原、丘陵、多礫石山坡，根供藥用，在我國有數(shù)千年應(yīng)用歷史，是中醫(yī)藥常用藥材，系中國東北地區(qū)著名藥材之一。有祛風(fēng)解表、勝濕止痛、止痙的功效，用于感冒頭痛、周身關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)疹瘙癢、破傷風(fēng)等癥，味辛、甘，微溫，被歷版《中國藥典》收載，現(xiàn)收載于2015版《中國藥典》一部149-150頁，防風(fēng)的化學(xué)成分主要有色原酮類、香豆素類、揮發(fā)油和多糖類等，其中的色原酮是其發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，主要有效成分為升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷系色原酮類主要成分，具有較好的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、消腫等活性。2015版《中國藥典》一部150頁防風(fēng)飲片炮制規(guī)定：“除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，切厚片，干燥。”各版本的中藥炮制規(guī)范中防風(fēng)的炮制工藝基本上皆為凈制、軟化、切制和干燥，皆無確切的、具體的工藝參數(shù)，工藝變數(shù)大，欠規(guī)范，可操作性不強(qiáng)，批間差異大，重復(fù)性差，從而影響了防風(fēng)飲片的質(zhì)量。為使防風(fēng)炮制工藝科學(xué)、客觀、量化、數(shù)字化、可操作性強(qiáng)，故本實(shí)驗(yàn)以浸出物、升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為評價(jià)指標(biāo)，參照2015版《中國藥典》一部、各種炮制規(guī)范及相關(guān)文獻(xiàn)，對防風(fēng)進(jìn)行了炮制工藝參數(shù)優(yōu)化研究，優(yōu)選出科學(xué)、合理、穩(wěn)定、可行的防風(fēng)炮制工藝參數(shù)，為工業(yè)化生產(chǎn)提供質(zhì)量一致的防風(fēng)飲片。

1 儀器與藥材

1.1 儀器

Ultimate 3000高效液相色譜系統(tǒng)(賽默飛世爾科技(中國)有限公司；包括G1316A四元梯度泵，G1313A標(biāo)準(zhǔn)型自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A恒溫箱，G1314A紫外檢測器，Agilent Chemstation 色譜工作站)；中文液晶臺式超聲波清洗器(昆山美美超聲儀器有限公司)；ME204E型電子分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；TCS-100型電子臺秤(上海乾峰電子儀器有限公司)；PW135型中草藥粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；SHH.W21電子三用水箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；QY-1中藥切片機(jī)(溫州頂歷醫(yī)療器械有限公司)；101-0AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)。

1.2 藥材及試劑

各批防風(fēng)藥材經(jīng)王智教授鑒定為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikoviadivaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根；升麻素苷對照品(批號：111522-201712)購自中國食品藥品檢定研究院(國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))，供含量測定用(升麻素苷含量96.2%)；5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品(批號：111523-201610)購自中國食品藥品檢定研究院(國家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))，供含量測定用(5-O-甲基維斯阿米醇苷含量96.1%)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑皆為色譜純或分析純規(guī)格；液相色譜柱(月旭，Ultimate?XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm)。

2 方法與結(jié)果

2.1 防風(fēng)浸出物的測定

將防風(fēng)飲片粉碎過二號篩，取防風(fēng)飲片粉末4.000 g，精密稱定，用乙醇作溶劑，按照2015版《中國藥典》[1]四部通則2201浸出物測定法測定。

2.2 升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定[1]

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 液相色譜柱(月旭，Ultimate?XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm)；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(40∶60)為流動(dòng)相，檢測波長為254 nm，流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃，理論板數(shù)按升麻素苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2.2 升麻素苷對照品溶液的制備 取升麻素苷對照品約0.010 0 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含升麻素苷1.08 mg的升麻素苷濃溶液1；精密移取1 mL升麻素苷濃溶液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含升麻素苷0.108 mg的升麻素苷濃溶液2；精密移取6 mL升麻素苷濃溶液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含升麻素苷64.8 μg的對照品溶液，過0.22 μm微孔濾膜至進(jìn)樣小瓶中。

2.2.3 5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液制備 取5-O-甲基維斯阿米醇苷約0.010 0 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含5-O-甲基維斯阿米醇苷1.02 mg的5-O-甲基維斯阿米醇苷濃溶液1；精密移取1 mL 5-O-甲基維斯阿米醇苷濃溶液1于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含5-O-甲基維斯阿米醇苷0.102 mg的5-O-甲基維斯阿米醇苷濃溶液2；精密移取6 mL5-O-甲基維斯阿米醇苷濃溶液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含5-O-甲基維斯阿米醇苷61.2 μg的對照品溶液，過0.22 μm微孔濾膜至進(jìn)樣小瓶中，即得。

2.2.4 供試品溶液制備的藥典法 將防風(fēng)原藥材敲除去泥沙灰塵，去除雜草、非藥用部位和蟲蛀、霉敗品，切片后粉碎，取過五號篩(80目)的防風(fēng)原藥材細(xì)粉，約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，稱定重量，水浴回流2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取4 mL離心5 min，吸取上清液，過0.22 μm微孔濾膜至進(jìn)樣小瓶中，即得。

2.2.5 測定法 分別精密吸取對照品溶液各3 μL與供試品溶液2 μL，注入液相色譜儀，測定，見圖1、圖2、圖3、圖4。

圖1 升麻素苷對照品圖譜

圖2 5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品圖譜

圖3 防風(fēng)藥材HPLC圖譜

圖4 陰性對照品(甲醇空白)圖譜

2.3 防風(fēng)藥材前處理方法

取防風(fēng)藥材，除去泥沙、雜草、非藥用部位和蟲蛀、霉敗、腐爛品，將其放入瀝箕內(nèi)，用自來水淋濕，旋轉(zhuǎn)瀝箕(模擬滾筒式洗藥機(jī))1 min，再用自來水沖洗1 min，如此操作數(shù)次，直至洗凈為止(無肉眼可見泥沙灰塵等)，總計(jì)約11 min，使?jié)崈舳确弦?guī)定，甩干水，待切制。

2.4 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)選防風(fēng)最佳切片(炮制)工藝參數(shù)

2.4.1 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素水平的確定 影響飲片炮制質(zhì)量的主要因素有鼓風(fēng)干燥溫度、飲片厚度(藥典規(guī)定切厚片，故從2～4 mm中選擇)、鋪層厚度、翻動(dòng)次數(shù)。考察因素水平見表1。

表1 防風(fēng)切片工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

2.4.2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理 以浸出物、升麻素苷(A)和5-O-甲基維斯阿米醇苷(B)總和含量為評價(jià)指標(biāo)，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排表進(jìn)行試驗(yàn)，其組合方案見表2。飲片樣品制備：取洗凈藥材約1 000 g，按大小品質(zhì)均分為9份，每份100 g，分別淋洗11 min，甩干水，1、4、7號切2 mm片，2、5、8號切3 mm片，3、6、9號切4 mm片，濕飲片按表1因素水平與表2組合試驗(yàn)號進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對9個(gè)試驗(yàn)號所得飲片按照2.1～2.2評價(jià)指標(biāo)及測定方法，結(jié)果見表2，極差分析見表3，因素間方差分析見表4，對有統(tǒng)計(jì)意義的因素進(jìn)行水平間方差分析見表5。

表2 防風(fēng)飲片炮制正交試驗(yàn)結(jié)果 (%)

由表3、表4、表5結(jié)果可知，以浸出物含量為評價(jià)指標(biāo)時(shí)，因素水平皆無統(tǒng)計(jì)意義，各因素可取任意水平；以升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷總量為評價(jià)指標(biāo)時(shí)，B因素有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C因素影響最小，作為誤差項(xiàng)，A、D因素?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可取任意水平；對有統(tǒng)計(jì)意義的B因素進(jìn)行水平間方差分析見表5，其水平取值按最高值確定，B因素取1水平或2水平，從經(jīng)濟(jì)學(xué)角度考慮，A因素取3水平，C因素取3水平，D因素取1水平；綜合分析可得，A因素取3水平，B因素取1水平或2水平，C因素取3水平，D因素取1水平，最終確定最佳組合為A3B1或B2C3D1，即防風(fēng)最佳切制炮制工藝為60 ℃鼓風(fēng)干燥，切2～3 mm厚片，堆放3 cm厚，翻動(dòng)1次。

表3 防風(fēng)飲片炮制正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)極差分析結(jié)果

表4 防風(fēng)飲片炮制正交試驗(yàn)因素間方差分析(完全隨機(jī)模型)

表5 防風(fēng)飲片炮制正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)水平間 方差分析(完全隨機(jī)模型)

2.4.3 防風(fēng)炮制正交設(shè)計(jì)驗(yàn)證試驗(yàn) 對15批防風(fēng)飲片炮制工藝進(jìn)行了放大驗(yàn)證試驗(yàn)，即每批1 000 g，首先將防風(fēng)藥材去除雜質(zhì)泥沙，淋洗11 min，瀝干，再按照防風(fēng)最佳切制炮制工藝：60 ℃鼓風(fēng)干燥，切2～3 mm厚片，鋪層(堆放)3 cm厚，翻動(dòng)1次進(jìn)行防風(fēng)炮制正交設(shè)計(jì)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表6，評價(jià)指標(biāo)增加了指紋圖譜相似度一項(xiàng)。由表6結(jié)果可知，所有項(xiàng)目的量值傳遞率均在90%以上。

表6 防風(fēng)藥材-飲片量值傳遞結(jié)果

3 討論

防風(fēng)中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測定系以干燥品計(jì)算，故在測定的同時(shí)必須測定樣品的含水量，將樣品重量減去含水量計(jì)算含量。

最初采用手工切制工藝，防風(fēng)必須洗凈悶潤軟化后才能切片，后來由于使用了切藥機(jī)，所以防風(fēng)除雜清洗甩干水后可以直接切片干燥，無須悶潤，節(jié)約時(shí)間，防止污染，縮短防風(fēng)炮制生產(chǎn)周期，縮短時(shí)間，提高炮制效率。

由防風(fēng)飲片炮制實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，切片厚度對飲片質(zhì)量影響較顯著，藥典規(guī)定切厚片，即從2～4 mm中選擇，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明2～3 mm優(yōu)于4 mm。

防風(fēng)從藥材到飲片的指紋圖譜相似度反映其炮制前后質(zhì)量屬性的變化，防風(fēng)量值傳遞率平均值均達(dá)100%以上，說明防風(fēng)從藥材到飲片量值傳遞率高。