黃芪、茯苓等增強免疫力中藥復方篩選研究

呂夢琪，王言之，環 飛,3，胡 奇,3，孫亞琴，張青考，李世芬,3

(1.南京醫科大學 公共衛生學院，江蘇 南京 211166；2.南京醫科大學 第一臨床醫學院，江蘇 南京 211166；3.江蘇省醫藥農藥獸藥安全性評價與研究中心，江蘇 南京 211166;4.石家莊以嶺藥業股份有限公司，河北 石家莊 050035)

在新冠肺炎對人類社會構成嚴峻挑戰的背景下，以提高免疫力為靶向的藥物研究正逐步成為當下熱點.一方面，以瑞德西韋[1]為典型的新型化學合成藥物不斷得到研發；另一方面，基于中藥學的復方制劑成為預防、調理甚至治愈病患的有效手段[2].明代吳又可在《溫疫論》中以“本氣”和“外邪”的關系為切入點對疫病進行了系統性的論述，相對于先前古籍進一步地認識到瘟疫是內在原因和外在原因共同作用的結果[3]；而當代的龐穩泰等[4]將25個地方方案與中醫藥防治新冠診療的國家方案進行比較和歸納，發現針對“濕、毒”致病的核心病機是各方案重要的共性特征，反映出我國現代中醫學對傳統理念的繼承和發揚.許多中藥在治療已有的病灶外還能讓機體充滿“本氣”、增強免疫功能、減少“外邪”入體的觀念已經成為普遍共識.

考慮到許多病毒細胞的侵襲及轉移過程較為復雜，往往并不局限于一條通路，故復方制劑相對于單獨用藥所具備的多靶點多層次[5]的優勢在當下的藥理學研究中得到廣泛關注.吳水生等[6]采用大鼠模型對理中丸及其拆方進行研究，合理驗證了中藥復方的疾病縮減效應[7]與多成分多靶點的整合、協同作用存在一定聯系.基于以上，現進行增強免疫力復合配方的功效檢驗及篩選.

1 材料和方法

1.1 樣品來源及組成原則

依據石家莊以嶺藥業股份有限公司提供的黃芪茯苓膠囊擬定本實驗復方，成分包括黃芪、茯苓、陳皮、當歸、金銀花，用水提取，濃縮提取液并干燥，制成提取物.

1.2 實驗動物

清潔級BALB/c健康雄性小鼠200只，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司繁殖場提供，實驗動物生產許可證號為SCXK(滬)2017-0005，合格證號：20170005027172.

1.3 劑量選擇和樣品配制

受試復方按劑量不同設定為3個配方，擬定劑量分別為 4.5 g/(人·d)、3.0 g/(人·d)、1.5 g/(人·d)(體重 60 kg 計)，按人體擬定劑量的10倍設定劑量，增強免疫力配方1、2、3的劑量分別為0.75、0.50、0.25 g/kg/d(bw).另設一個溶劑對照為 0 g/kg/d(bw).受試樣品用無菌水配制，配制濃度分別為75、50、25 mg/mL，經口單位體重每日一次給予小鼠相應劑量的受試物，小鼠灌胃量為 0.1 mL/10 g(bw).

1.4 試驗方法：

參考文獻[8-9]的方法，將所有小鼠稱量體重，并以此為標準將其隨機平均分為V、W、X、Y、Z 5個大組，再將每大組分成以10為數量單位的4個劑量組.對V組小鼠進行ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化、NK細胞活性試驗；W組小鼠進行耳廓腫脹試驗；X組小鼠進行抗體生成細胞檢測和半數溶血值HC50的測定；Y組小鼠進行碳廓清試驗；Z組小鼠進行腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗.連續灌胃1個月，測定各項指標.

2 結果

2.1 小鼠胸腺、脾臟器官

由表1結果可見，0.25、0.50、0.75 g/kg/d(bw) 組胸腺體比和脾體比與 0 g/kg/d(bw) 組比較，差異均無統計學意義(P>0.05).

2.2 ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化

由表2結果可見，和空白組相比，其余各劑量組吸光度差值出現不同程度的增長，0.75 g/kg/d(bw) 組相對平均增加了0.069，差異較顯著且有統計學意義(P<0.05)；而各組間NK細胞活性無明顯差異(P>0.05).

表1 小鼠胸腺、脾臟器官體比結果

表2 V組小鼠脾淋巴細胞轉化及NK細胞活性試驗結果

2.3 DNFB誘導小鼠DTH

由表3結果可見，0.75 g/kg/d(bw) 組耳殼增重顯著高于 0 g/kg/d(bw) 組，差異有統計學意義(P<0.05).

2.4 小鼠溶血空斑數及血清半數溶血值(HC50)

由表4結果可見，隨受試物劑量的增加，小鼠溶血空斑數及血清半數溶血值亦出現增長，0.75 g/kg/d(bw) 組顯著高于 0 g/kg/d(bw) 組，同比增幅分別達到29.73%、21.78%，差異有統計學意義(P< 0.05).

2.5 小鼠碳廓清能力

由表5結果可見，0.75 g/kg/d(bw) 組小鼠碳廓清吞噬指數a顯著高于 0 g/kg/d(bw) 組，差異有統計學意義(P<0.05)；而對比其余實驗結果發現，0.50、0.25 g/kg/d(bw) 劑量組雖然吞噬指數也出現一定的增長，但與對照組相比差異無統計學意義，可能與實驗動物數目有限存在一定聯系.

表3 DNFB誘導W組小鼠DTH實驗結果

表4 X組小鼠溶血空斑數及血清半數溶血值

表5 Y組小鼠碳廓清實驗結果

2.6 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬百分率及吞噬指數

由表6結果可見，在腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬指數一項上，0.50、0.75 g/kg/d(bw) 組均顯著高于 0 g/kg/d(bw) 組，且后者增幅更大；此外，0.75 g/kg/d(bw) 組吞噬百分率和對照組相比平均上升了3.5%，差異有統計學意義(P<0.05).

表6 Z組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞吞噬率及吞噬指數實驗結果

3 結語與討論

參照衛生部《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003版)之增強免疫力功能試驗的結果判定，在本試驗條件下，增強免疫力篩選研究配方1具有增強免疫力功能作用.

從成分上看，本配方中黃芪[10]、茯苓[11]、陳皮[12]、當歸[13]、金銀花[14]等數味中草藥既均含有黃酮類、揮發油類物質，又各自具備獨特的微量元素或稀有氨基酸，在抗氧化、抗炎、抗腫瘤因子等方面或存在一定的協同作用.這種通過合理配比多種有效組分而建立對機體功能多系統、多靶點、多途徑的綜合調節機制的設計理念恰恰體現了復方用藥的診療優勢及特色[15].

近年來，我國各地區疾病譜中傳染性疾病、母嬰疾病[16]帶來的負擔相對降低，而以“三高”為典型的慢性非傳染性疾病的發病率不斷上升.在沒有特效藥的情況下，西藥雖然起效快，但預后存在一定的不確定性，或會引發較為嚴重的不良反應，故相較于單一西藥，中藥聯合西藥在臨床治療中有更光明的前景.有研究表明，在女性冠心病的治療中，使用中藥生脈散合酸棗仁湯聯合西藥[17]能夠在護肝、清心、止血、降血壓等多方面有效提高心肌供血功能，減少疼痛，體現了中西醫聯合的獨特優勢.

鑒于當下絲綢之路、海上絲綢之路等多種渠道讓中藥學傳播到世界各地[18]，為我國中藥保健品的研發和推廣帶來良好契機，進一步深化對中藥藥理作用的實驗研究迫在眉睫.建立并優化更多的復方制劑配方，既是形成正向文化輸出的內核需求，更是提升群眾身體素質、踐行一級預防理念的利民之舉.