HER-2、Ki-67及CD147在乳腺癌中的表達及對病情進展和預后生存的評估

張國平，陳小龍，楊傳盛，康 寧

乳腺癌是全球女性最為常見的惡性腫瘤，其發病率居我國女性惡性腫瘤的首位。盡管人們對乳腺癌防治的觀念和自我檢查意識有所提高，但其發病率的升高趨勢仍不見減緩，且部分患者常因就醫不及時錯過最佳治療時機，導致腫瘤分期進展及相關并發癥的出現，嚴重影響預后生存[1]。因此，臨床上急需尋找敏感性和特異性高的指標對乳腺癌病情進展、預后生存進行評估。現代分子生物學研究發現，原癌基因激活、抑癌基因失活或突變、抗凋亡基因過度表達在乳腺癌的發生和發展中起著重要作用，與其相關的原癌基因增殖細胞核抗原Ki-67備受關注[2-3]。人類表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor-2, HER-2)是一種糖基化多肽性分泌因子，在腫瘤的發生發展過程中發揮關鍵作用[4]。此外，研究表示細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子CD147，可參與腫瘤浸潤過程中黏附、降解和移動[4]。本研究對乳腺癌組織HER-2、Ki-67及CD147的表達情況進行分析，旨在為臨床病情監測、預后評估提供新思路，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年7月—2017年6月于我院進行乳腺癌根治術治療的112例作為研究對象。①納入標準：均滿足世界衛生組織制定的乳腺浸潤性導管癌診斷標準[5]，無患側乳腺手術史，經檢查無腫瘤遠處轉移；未進行化療、放療或性激素類藥物治療者；②排除標準：臨床資料缺失或不真實；合并其他惡性腫瘤者；合并心、肺、肝、腎等重要臟器功能不全者；合并結締組織疾病者；有惡性腫瘤病史者。本組符合納入與排除標準者101例，收集乳腺癌組織及癌旁的正常組織(距離癌組織5 cm以上)，分別作為乳腺癌組和癌旁組織組。

1.2方法

1.2.1主要試劑與儀器：鼠抗人Ki-67抗原單克隆抗體、兔抗人CDKN1A抗體購自美國Proteintech公司；羊抗兔熒光二抗購自美國ROCKLAND公司；單克隆抗體購自上海基因科技有限公司；免疫組織化學檢測試劑盒、山羊抗小鼠二抗、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司；光學顯微鏡(BX41型)購自日本OLYMPUS公司。

1.2.2免疫組織化學檢測：收集本組患者術后標本，所有組織標本均為常規石蠟包埋組織，制成厚4 μm的病理切片，行免疫組織化學染色，操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行[6-7]。

1.2.3結果判定：免疫組織化學結果由兩位病理科主任醫師通過雙盲法閱片進行判定，每張切片在光學顯微鏡下隨機觀察5個高倍(×200)視野，每個視野計數200個腫瘤細胞，HER-2染色定位于細胞質或細胞膜，Ki-67和CD147染色定位于細胞核，陽性表達均為棕黃色顆粒。依據切片中細胞染色強度和染色陽性細胞百分率判定染色結果[8-9]，按染色陽性細胞百分率評分：<25%為1分，25%～50%為2分，≥50%為3分；按染色強度評分：不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩種評分的乘積為每例的加權分數，加權分數是0為陰性，其余均為陽性。

1.3觀察指標 比較乳腺癌組和癌旁組織組HER-2、Ki-67、CD147的表達差異，并分析三者與乳腺癌臨床病理參數的關系。根據隨訪情況分析影響乳腺癌患者預后生存的危險因素。

1.4隨訪方法 本研究隨訪從患者術后開始，直至患者死亡或隨訪結束，為期3年，隨訪時間截止于2020年6月。患者的隨訪時間為10～36(26.71±5.78)個月。隨訪方式以患者來院復查為主。

1.5統計學方法 采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析。計數資料以率(%)表示，比較行χ2檢驗；采用多因素Logistic回歸分析影響乳腺癌患者預后生存的危險因素。α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1HER-2、Ki-67及CD147在乳腺癌組織中的表達 乳腺癌組織中，HER-2染色主要顯示于細胞膜或細胞質，Ki-67和CD147染色主要顯示于細胞核，三者在乳腺癌中陽性表達均呈現棕黃色。見圖1。

圖1 CD147、HER-2及Ki-67在乳腺癌組織中免疫組織化學染色圖(DAB×200)

2.2乳腺癌組和癌旁組織組HER-2、Ki-67及CD147的表達差異 HER-2、Ki-67及CD147在乳腺癌組中的陽性表達率均高于癌旁組織組，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 乳腺癌組和癌旁組織組HER-2、Ki-67及CD147的表達差異[例(%)]

2.3HER-2、Ki-67及CD147與臨床病理參數的關系 乳腺癌患者HER-2、Ki-67及CD147表達水平與組織分化類型、TNM分期、脈管侵襲和淋巴結侵襲具有相關性(P<0.05，P<0.01)，與年齡、腫瘤位置無相關性(P>0.05)。乳腺癌患者HER-2、CD147表達水平與腫瘤最大徑無相關性(P>0.05)，但Ki-67與腫瘤最大徑具有相關性(P<0.05)。見表2。

表2 乳腺癌患者HER-2、Ki-67及CD147與臨床病理參數的關系(例)

2.4乳腺癌患者預后生存情況 截至隨訪結束，101例乳腺癌患者生存65例，死亡36例，病死率為35.64%。將生存患者納入生存組，死亡患者納入死亡組。

2.5生存組和死亡組HER-2、Ki-67及CD147的表達差異 死亡組HER-2、Ki-67及CD147陽性表達率高于生存組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 生存組和死亡組HER-2、Ki-67及CD147的表達差異[例(%)]

2.6影響乳腺癌患者預后生存的單因素和多因素分析 組織中低分化、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、脈管侵襲、淋巴結侵襲、HER-2、Ki-67及CD147表達陽性是影響乳腺癌患者預后生存的獨立危險因素(P<0.05，P<0.01)。見表4。

表4 影響乳腺癌患者預后生存的單因素和多因素分析

3 討論

乳腺癌作為嚴重危害婦女健康的主要疾病，其治療方法隨著外科技術、放療和化療藥物進展有了長足的進步，但部分患者治療效果仍不理想，導致預后較差[10]。雖然當前尚不清楚乳腺癌的具體發生機制，但研究發現腫瘤的生長、轉移和預后受到多方面因素的影響[11]。

HER-2屬于人類表皮生長因子受體家族成員，基因位于17號染色體q21區，是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白[12]。正常生理情況下HER-2單體處于非激活狀態，需要HER-2蛋白中的酪氨酸磷酸化后，發揮介導細胞內的磷酸化、基因表達及DNA合成代謝等生理功能[13]。而病理狀態下，則可通過HER-2在細胞膜過度表達導致細胞增殖迅速形成腫瘤，參與腫瘤細胞的生長增殖過程。既往研究發現，有20%～30%的乳腺癌患者存在HER-2基因或蛋白過度表達的情況，該類患者的治療效果及預后遠差于未出現HER-2過度表達的患者[14]。本研究結果基本與上述結論相似，提示HER-2可作為預測乳腺癌預后的一個重要參考指標。

Ki-67蛋白是由10號染色體長臂所屬基因轉錄、翻譯成為兩條多肽鏈組成的非組蛋白型核蛋白，正常生理情況下Ki-67主要表達于除G0和G1早期以外的所有細胞分裂階段，主要作用是反映細胞的增殖狀態[15]。隨著相關研究的深入，發現Ki-67的大量表達還與腫瘤的轉移情況、臨床治療效果及患者預后息息相關，因此有學者提出將其作為檢測腫瘤細胞增殖活性的可靠指標[16-17]。本研究結果顯示，乳腺癌細胞Ki-67的陽性表達率與組織分化類型、TNM分期、淋巴結侵襲和脈管侵襲等關系緊密，且經多因素Logistic回歸分析顯示，Ki-67表達陽性是影響乳腺癌患者預后生存的獨立危險因素，提示臨床上可通過監測乳腺癌患者Ki-67表達狀態進一步擴展診治手段，指導治療方案選擇和預后評價。

CD147為免疫球蛋白超家族的糖蛋白，是一種新發現的黏附分子。基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)能夠參與腫瘤新生血管的生成及腫瘤細胞的生長，有相關研究發現，CD147蛋白可通過刺激內皮細胞或成纖維細胞誘導MMP-9蛋白的表達上調，進而對乳腺癌的侵襲和轉移起到促進作用[18]。另外，在多種惡性腫瘤的發生和發展過程中都發現CD147存在較高水平的表達。本研究結果顯示，CD147在乳腺癌組織中的陽性表達率遠高于癌旁正常組織，表明CD147蛋白在乳腺癌的發生過程中發揮重要作用。另外，在組織中低分化、存在脈管和淋巴結侵襲及死亡乳腺癌患者中存在CD147高陽性表達現象，因此CD147可成為判斷乳腺癌患者腫瘤浸潤、轉移和預后的潛在指標。

綜上所述，HER-2、Ki-67及CD147在乳腺癌組織中表達異常，與患者病情進展及預后生存密切相關，或可作為預測乳腺癌患者預后生存的分子標志物和腫瘤治療的潛在靶點。