腐爛莖線蟲對不同外源物的敏感性測定

毛佳 王宏寶 曹凱歌 施保國 高玉霞 趙桂東 吳險平

(1 江蘇徐淮地區(qū)淮陰農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所 江蘇淮安 223001;2 淮安市農(nóng)業(yè)科技實業(yè)總公司 江蘇淮安 223001;3 淮安市植保植檢站 江蘇淮安 223001;4 淮安市淮安區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心 江蘇淮安 223200)

腐爛莖線蟲 （Ditylenchus destructor） 是一種遷移性植物內(nèi)寄生線蟲，主要危害植物地下部，尤其是塊莖和球莖等，是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的植物寄生線蟲。腐爛莖線蟲寄主范圍廣泛， 多達90～120 種［1］，也是中國和許多其他國家和地區(qū)的檢疫性線蟲。近年來，國內(nèi)腐爛莖線蟲嚴重危害甘薯，一般發(fā)病田塊減產(chǎn)20%～50%，重病田塊甚至出現(xiàn)絕產(chǎn)［2］。甘薯腐爛莖線蟲的防治方法很多，有農(nóng)業(yè)防治、生物防治、物理防治和化學(xué)防治等。在實際生產(chǎn)中，化學(xué)防治一直是使用最廣泛的措施。防治腐爛莖線蟲的藥劑多為高毒或殘效期較長的農(nóng)藥，基于甘薯對農(nóng)藥殘留的特殊要求，此類農(nóng)藥在生產(chǎn)上受到很大的限制［3］。腐爛莖線蟲是一種遷移性內(nèi)寄生線蟲，遷移速度快、繁殖率高，一旦侵入秧苗就很難除治，對植株造成嚴重的危害［4］。目前廣泛使用的化學(xué)藥劑主要有克百威、苯線磷、甲基異柳磷、滅線磷、涕滅威等，但這些防治藥劑以高毒為主，對人畜不安全，并且易對環(huán)境造成污染［5-7］。為大力推進《農(nóng)藥減量控害行動實施方案》，避免農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標，提高農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)，保障農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境安全［8-11］，解決以往防治甘薯腐爛莖線蟲病多使用高毒高殘留農(nóng)藥的問題，國內(nèi)有關(guān)學(xué)者做了多方面的探索研究。如，漆永紅等［12］研究了1.8%阿維菌素乳油、20%辛硫磷乳油、25%毒死蜱乳油和20%丁硫克百威乳油對甘薯秧苗的保護作用，發(fā)現(xiàn)180 μg/mL 1.8%阿維菌素乳油和2 000 μg/mL 丁硫克百威乳油對甘薯秧苗的保護效果優(yōu)于其他藥劑處理。毛紅彥等［13］研究表明，30%辛硫磷微囊懸浮劑、5%辛硫磷顆粒劑、30%三唑磷微囊懸浮劑和10%噻唑磷顆粒劑對甘薯腐爛莖線蟲有很好的防治效果。由于生物農(nóng)藥、植物源殺線蟲劑在環(huán)境中易降解，對人類安全，具有良好的環(huán)境相容性，因此越來越受到人們的重視。本實驗選用目前市場上常見的化學(xué)農(nóng)藥、生物農(nóng)藥、植物源材料等6種藥劑，探討腐爛莖線蟲對其的敏感性，以期為線蟲防控提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗藥劑

40%辛硫磷乳油（連云港立本作物科技有限公司），1.8%阿維菌素乳油（連云港立本作物科技有限公司），50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑（南京南農(nóng)科技發(fā)展有限公司），25%噻蟲嗪水分散粒劑（江蘇寶靈化工股份有限公司），1 000 億芽孢/克枯草芽孢桿菌可濕性粉劑（德強生物股份有限公司），檳榔粉（提取比例15∶1，質(zhì)量比）（寶雞市方晟生物開發(fā)有限公司）。

1.1.2 腐爛莖線蟲

由本實驗室在甘薯塊莖上接種培養(yǎng)所得，包括成蟲和不同蟲態(tài)的幼蟲。

1.2 方法

1.2.1 試驗設(shè)計

各種藥劑分別配制100 和150 倍液2 份母液，同時配置約200 條/mL 的線蟲懸浮液備用。用移液槍吸取0.5 mL 線蟲懸浮液置入5 mL 離心管后，各濃度處理線蟲液統(tǒng)一設(shè)定為2 mL，根據(jù)總?cè)萘糠謩e計算對應(yīng) 400、600、800、1 200、1 600、2 400 倍液所需要的母液量和用水量。配置處理液時，先將計算好的用水量加入離心管的線蟲懸浮液中，接著加入不同稀釋倍數(shù)所需的母液量；將配置好的不同倍數(shù)處理液搖勻后置于試管架上，在25°C黑暗培養(yǎng)箱中分別處理24、48、144 h，鏡檢觀察線蟲死亡率。鏡檢時分別將處理液倒入凹面皿中并置于體視顯微鏡下統(tǒng)計存活狀態(tài)，線蟲存活狀態(tài)通過針刺法測定，即線蟲僵直不動為死蟲，彎曲蠕動狀態(tài)為活蟲［14］。試驗通過計算不同外源物對線蟲的校正死亡率（擊倒率）來測定各外源物對線蟲的敏感性。空白對照設(shè)為清水組，每個處理重復(fù)3次，每個處理的線蟲數(shù)量約為100條。

死亡率＝死亡線蟲數(shù)/總線蟲數(shù)×100%

校正死亡率（擊倒率）＝（處理組的死亡率－對照組的死亡率）/（100－對照組的死亡率）×100%

1.2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用Excel 2019 和DPS7.05 軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 處理24 h后腐爛莖線蟲對不同外源物的敏感性

不同外源物處理24 h 后，腐爛莖線蟲的敏感性測定結(jié)果見表1。在6 個供試材料中，氯溴異氰尿酸處理和枯草芽孢桿菌處理對線蟲擊倒率均較高，其中氯溴異氰尿酸在400～2 400 倍液下對線蟲的敏感性較強，擊倒率達86.69%以上；而枯草芽孢桿菌在400～800 倍液下，對線蟲擊倒率也達到93.69%以上。辛硫磷、阿維菌素和噻蟲嗪不同濃度處理24 h后對線蟲敏感性較差。

表1 處理24 h后腐爛莖線蟲對不同外源物的敏感性

2.2 48 h后腐爛莖線蟲對不同外源物的敏感性

隨著處理時間的延長，在48 h 后腐爛莖線蟲對各處理液的敏感性測定結(jié)果見表2。氯溴異氰尿酸在不同濃度處理下對線蟲藥效表現(xiàn)良好，枯草芽孢桿菌對線蟲也表現(xiàn)出較好的敏感性；而檳榔粉部分濃度處理下的擊倒率低于處理24 h 的擊倒率，表現(xiàn)為部分線蟲有復(fù)蘇現(xiàn)象，這可能與供試藥劑藥效及線蟲耐受性有關(guān)。其中，枯草芽孢桿菌、噻蟲嗪和阿維菌素部分濃度處理下的擊倒率與處理24 h相比，對線蟲的防效均有所提高。

表2 處理48 h后腐爛莖線蟲對不同外源物的敏感性

2.3 144 h后腐爛莖線蟲對不同外源物的敏感性

隨著處理時間的延長，在144 h 后腐爛莖線蟲對各處理液的敏感性測定結(jié)果見表3。氯溴異氰尿酸在6 個不同濃度處理下對線蟲擊倒率達96.70%；阿維菌素800 倍液處理144 h 擊倒率在61.36%；辛硫磷對線蟲的擊倒率較低，檳榔粉在400～600 倍液下對線蟲擊倒率達到82.70%以上，噻蟲嗪在400～600 倍液下對線蟲擊倒率高達96.70%，此3 種藥劑1 200、1 600、2 400倍液下藥效較差；枯草芽孢桿菌在400～800 倍液下對線蟲的擊倒率在76.36%～96.70%，但在其它幾個濃度下，線蟲的敏感性下降。

3 討論與結(jié)論

腐爛莖線蟲在田間主要為害當歸、甘薯和馬鈴薯等作物地下部組織，其為害較為隱蔽。線蟲體壁外存在角質(zhì)層，通透性差，抗逆性強，且神經(jīng)系統(tǒng)不發(fā)達，殺線劑又多為神經(jīng)毒劑，使得線蟲病害的化學(xué)防治難。往往是一些毒性較高的藥劑才能起到理想的效果。從實驗結(jié)果來看，腐爛莖線蟲對辛硫磷的敏感性并不高，不同濃度處理不同時間對線蟲擊倒率均不強，室內(nèi)測定藥效并不理想，這與漆永紅等［12］報道結(jié)果較為一致。50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑在2 400 倍液處理24、48 和144 h 時，各處理均無線蟲復(fù)蘇現(xiàn)象，表現(xiàn)出穩(wěn)定的防控效果，值得在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。而噻蟲嗪作為一類低毒內(nèi)吸殺蟲劑，在400～600 倍液下對線蟲表現(xiàn)出較好的防效，隨著稀釋倍數(shù)增加，對線蟲敏感性降低。枯草芽孢桿菌在試驗中對線蟲擊倒率較高，表現(xiàn)出較好的防控效果，但在個別處理中存在線蟲復(fù)蘇現(xiàn)象，這種線蟲的假死現(xiàn)象在趙立榮等［14］研究中也有報道；但鑒于該藥劑有較好的擊倒率，在生產(chǎn)上建議將其作為防控線蟲的藥劑輪換使用。試驗中也發(fā)現(xiàn)，檳榔粉作為一類植物源材料，在400～600 倍液下表現(xiàn)出較好的擊倒效果，可作為固體藥劑的填充材料用于線蟲防控。室內(nèi)生物測定結(jié)果對殺線蟲劑的實際應(yīng)用只有一個定性的指導(dǎo)作用，其作用在于篩選出具有使用前景的殺線蟲劑［14］。本試驗僅對6 種藥劑（外源物）的直接觸殺作用做了初步篩選，而其他不同藥劑之間的混配是否具有增效作用還有待進一步的研究。

表3 處理144 h后腐爛莖線蟲對不同外源物的敏感性