IL-32表達與食管鱗癌放療后預后的關系

馬志宇，郭加友，董 振，郭嘉漪，程貝貝，馬建新

食管癌在中國的發病率居于世界前列[1]。其中食管鱗癌的新發病例數約占世界新發食管癌總數的53%[2]。目前放療是臨床上食管癌綜合治療的關鍵手段之一，主要包括術前放療、同步放化療，但是食管癌病人的5年存活率僅為15%～25%[3]。大量飲酒和吸煙及其協同作用是食管癌的主要危險因素[1]。此外，腫瘤與炎癥之間存在一定聯系[4]。2005年，KIM等[5]首次正式報道了一種新的促炎癥因子-自然殺傷細胞轉錄物4的基因產物，并命名為白細胞介素(interleukin，IL)-32。近年有研究[6-11]表明，IL-32表達的高低與腫瘤細胞凋亡、轉移、侵襲存在一定關系，甚至抑制腫瘤生長，但這種關系在不同的腫瘤中存在差異，并且對預后也產生不同的影響。基于此，本研究通過免疫組織化學法檢測95例食管鱗癌病人腫瘤組織，了解IL-32在食管鱗癌組織中的表達情況，探討病人IL-32與放療預后關系。現作報道。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2014年1月至2016年1月連云港東方醫院及連云港市第二人民醫院收治的食管鱗癌病人95例。納入標準：確診為食管鱗癌病人，行根治性放射治療，臨床病理信息完整。所有病人均行食管鏡活檢，經病理診斷確診為鱗癌，并在放療前行胸部CT，腹部及鎖骨上彩超等基線檢查。其中男66例，女29例；年齡39～83歲；腫瘤位置：胸上段19例，胸中段42例，胸下段34例；根據UICC/AJCC第七版食管癌TNM分期標準：Ⅱ期49例，Ⅲ期46例；淋巴結轉移陽性36例，陰性59例；中-高分化60例，低分化35例。其中行單純放射治療40例，行同步放化療55例(化療方案為以鉑類為基礎的聯合化療或多西他賽單藥化療)。

1.2 放療方法 所有病人均行6 mV高能X線放射治療。食管病灶區域放射治療為60～66 Gy，各段相應淋巴結引流區域放射治療為50 Gy。單次劑量為2 Gy，每天1次，每周5次。危及器官控制劑量：肺V20≤30%，V30≤20%；心臟V40≤40%；脊髓最大劑量<45 Gy。

1.3 觀察指標 采用免疫組織化學法檢測病人食管鱗癌組織中IL-32表達。兔抗人IL-32多克隆抗體購自美國Proteintech公司，免疫組織化學染色試劑盒購自武漢Servicebio公司。嚴格按照試劑說明完成實驗。組織切片使用二甲苯、各濃度乙醇梯度脫蠟，使用檸檬酸鈉-EDTA抗原修復液修復。3%H2O2孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶，BSA血清封閉30 min。加入稀釋的兔抗IL-32抗體孵育，4 ℃過夜，選擇相應的二抗室溫孵育2 h，DAB顯色，蘇木精復染，脫水、透明、封片，顯微鏡采集圖像并進行數據分析。以細胞質呈現黃色或棕黃色顆粒為IL-32陽性細胞，400倍顯微鏡下觀察并對陽性細胞和所有細胞數進行計數，根據細胞染色程度和陽性細胞相對總細胞百分比，對染色結果進行半定量分析。細胞染色程度：0分為無色或淡藍色無顆粒，1分為淺黃色顆粒，2分為較多棕黃色顆粒，3分為大量棕黃色或深棕色顆粒。每張切片陽性細胞占總細胞百分比：0分為<5%，1分為5%～<25%，2分為25%～<50%，3分為50%～<75%，4分為≥75%。兩項評分乘積<4分計為陰性，其余計為陽性。

1.4 統計學方法 采用χ2檢驗、Kaplan-Meier生存分析、log-rank檢驗和Cox比例風險回歸模型。

2 結果

2.1 IL-32高表達與低表達病人的相關特征比較 95例中IL-32低表達54例(56.84%)，高表達41例(43.16%)。高表達組與低表達組病人性別、年齡、腫瘤位置、是否合并化療差異均無統計學意義(P>0.05)，而2組腫瘤分化程度差異有統計學意義(P<0.05)(見圖1、表1)。

表1 不同臨床病理特征病人的IL-32表達(n)

2.2 IL-32與預后影響因素分析 Kaplan-Meier生存分析顯示，IL-32高表達組與IL-32低表達組預后差異有統計學意義(P<0.05)(見圖2)。Cox多因素分析顯示，合并化療和IL-32高表達是食管鱗癌放療病人預后的獨立影響因素(P<0.05)(見表2)。

3 討論

25%的上皮源性腫瘤由慢性感染或者慢性炎癥導致[12]。作為一種新的促炎癥因子，IL-32基因位于人類染色體16p13.3上。IL-32有9種可變剪接的亞型，分別為IL-32α、IL-32β、IL-32γ、IL-32δ、IL-32ε、IL-32ζ、IL-32η、IL-32θ、IL-32small。就分子量及對細胞作用而言，IL-32γ是最大最有效的亞型[13]。研究[14]表明，IL-32的結構呈現典型的α-螺旋，類似于黏附激酶的黏附靶區(FAT)，而這是整合素結合后的重要信號傳導介質。所以因IL-32類似于FAT的結構，其可能成為FAT活化的天然調節因子。

IL-32通過對許多癌癥細胞的代謝和調亡產生不同作用而影響腫瘤進展。本研究結果顯示，IL-32高表達組與IL-32低表達組預后差異有統計學意義，IL-32高表達是食管鱗癌放療病人預后的獨立影響因素。提示IL-32高表達病人放療后預后優于IL-32低表達者。而DONNEM等[8]在腎透明細胞癌的研究中發現，IL-32過表達與高復發率呈正相關關系，與無病生存率和總生存率呈負相關關系。不過有研究[15]發現，在人IL-32γ過表達轉基因小鼠模型中，IL-32γ會通過抑制持續激活的NF-κB和信號轉導和轉錄激活因子(STAT)3來抑制體外和體內黑素瘤和結腸癌腫瘤生長。STAT3是STAT蛋白家族的主要成員和重要的核轉錄因子。STAT3目前被認為是增加放射敏感性的關鍵基因，抑制STAT3/HIF-1α/VEGF信號通路可以逆轉食管癌細胞的放射抵抗[16-17]。因此，有理由認為高表達的IL-32可能通過抑制STAT3信號通路增強食管癌放療效果，繼而影響食管癌預后。同時本研究結果也顯示，合并化療是食管鱗癌放療病人預后的獨立影響因素。有研究[18]表明，不同亞型的急性白血病血清中IL-32表達程度不同。化療與IL-32亦可能發生協同作用，增加化療效果，延長病人總生存時間。

綜上，IL-32高表達是中期食管鱗癌放療后預后的獨立影響因素，IL-32可能作為一種新的治療靶點，為食管鱗癌的治療提供新的方法。但本研究屬于回顧性研究，且總樣本量較少，仍需要開展大樣本、多中心的前瞻性研究進一步驗證。未來還需進一步闡明IL-32及各種亞型對食管鱗癌細胞放療作用的分子機制。