注射用舒尼鉑（凍干）無菌檢查方法研究

李東嫻 張曉南 普冰清 王鵬 徐怡 游燕

摘 要 目的：對注射用舒尼鉑（凍干）的無菌檢查方法進行適用性研究。方法：按《中國藥典》2015年版通則1101進行試驗，采用薄膜過濾法對注射用舒尼鉑（凍干）進行無菌檢查。結果：注射用舒尼鉑（凍干）經pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100 ml/膜沖洗后，試驗組均生長良好，與陽性對照組一致。結論：薄膜過濾法可用于注射用舒尼鉑（凍干）的無菌檢查。

關鍵詞 注射用舒尼鉑（凍干） 無菌檢查 方法適用性

中圖分類號：R979.19； R927.1 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2021）07-0076-02

Validation on sterility test method for suniplatin injection

LI Dongxian*， ZHANG Xiaonan， PU Bingqing， WANG Peng， XU Yi， YOU Yan（Yunnan Bai Yao Group Innovation and R&D Center/Yunnan Institute of Materia Medica/ Yunnan Provincial Enterprise Key Laboratory for the New Drug Creation of Traditional Chinese Medicine and Ethnic Drug， Kunming 650111， China）

ABSTRACT Objective： To analyze the applicability of sterility test method for suniplatin injection. Methods： According to the Chinese Pharmacopeia （2015 edition） General rule 1101， the sterility test for suniplatin injection was conducted by membrane filtration. Results： The microbes in the test group grew well after suniplatin injection （lyophilized） was washed with pH 7.0 sterile sodium chloride-peptone buffer at 100 ml/membrane， which was consistent with the results of positive control group. Conclusion： This method can be used for the sterility test for suniplatin injection.

KEy WORDS suniplatin injection； sterility test； validation

鉑類抗癌藥物屬于一類結構獨特的無機配合物，目前已批準上市的鉑類抗癌藥物有順鉑[1]、卡鉑等7個品種[2-3]，是目前治療常見惡性腫瘤的藥物，在臨床上得到廣泛使用，對改善癌癥患者的生活質量、延長壽命起到重要的作用。但不良反應和耐藥性一直是鉑類抗癌藥物亟需解決的問題。因此，開發新型鉑類化合物是目前抗癌藥領域的研究方向之一[4]。

舒尼鉑是由對卡鉑（carboplatin）和舒鉑（heptaplatin）的化學結構進行組合修飾而得。注射用舒尼鉑（凍干）為云南省藥物研究所以舒尼鉑為原料的自研凍干注射用藥，為控制產品質量，需對注射用舒尼鉑（凍干）進行無菌檢查的方法學研究。而中國藥典規定，只要供試品性狀允許，可采用薄膜過濾法進行無菌檢查[5]。據此，擬采用薄膜過濾法對注射用舒尼鉑（凍干）的無菌檢查進行方法學研究。

1 材料與方法

1.1 樣品

舒尼鉑（云南省藥物研究所生產；共3批：170412，

170711，170727）。

1.2 稀釋劑及培養基

pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液、胰酪大豆胨液體培養基、硫乙醇酸鹽流體培養基、沙氏葡萄糖液體培養基，均由北京三藥科技開發公司提供。

1.3 菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003 第Ⅲ代]、枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501 第Ⅲ代]、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104 第Ⅲ代]和白色假絲酵母[CMCC（F）98001 第Ⅲ代]、生孢梭菌[CMCC（F）64941第Ⅲ代]均由云南省食品藥品檢驗所提供；黑曲霉[CMCC（B）98003 第Ⅱ代]，由中國藥品生物制品檢定研究院提供。

1.4 方法

參照中國藥典無菌檢查法進行試驗[5]。

1.4.1 菌液制備

將金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養物接種至胰酪大豆胨液體培養基，生孢梭菌的新鮮培養物接種至硫乙醇酸鹽流體培養基，30～35 ℃培養18～24 h；白色假絲酵母的新鮮培養物接種至沙氏葡萄糖液體培養基，20～25 ℃培養2～3 d；黑曲霉的新鮮培養物接種至沙氏葡萄糖瓊脂培養基，20～25 ℃培養5～7 d。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢桿菌、白色假絲酵母的新鮮培養物，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液備用；取黑曲霉的新鮮培養物，加入3～5 ml含體積分數0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫后用含體積分數0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成孢子懸液并稀釋成適宜濃度備用。

1.4.2 方法摸索與優化

用170412批次的樣品，進行無菌檢查方法探索。

1）供試品處理 各批次表面滅菌后的樣品，去除鋁蓋，用碘伏棉球擦拭膠塞后，通過一次性全封閉薄膜過濾器注入葡萄糖注射液10～15 ml，振搖使凍干粉全部溶解后將所有液體通過濾筒。

2）試驗組 取樣品40瓶，按供試品處理方法處理后，通過一次性全封閉薄膜過濾器（二聯），20瓶/膜，共做12份。其中6份用100 ml pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，另外6份用300 ml pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗。沖洗結束后，分別加入硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基，并加入金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢桿菌、白色假絲酵母菌液或黑曲霉孢子懸液。放入培養箱中培養。

3）供試品對照組 以沖洗液代替菌液，同試驗組操作。

4）菌液對照組 以沖洗液代替供試液，同試驗組操作。

5）陰性對照組 以沖洗液代替供試液和菌液，同試驗組操作。

1.4.3 方法驗證

1）試驗組 取供試品40瓶，按供試品處理方法處理后，將40瓶供試品全部通過一次性全封閉薄膜過濾器（二聯），20瓶/膜。再用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液200 ml沖洗濾膜，每膜100 ml，向一只濾筒中加入100 ml硫乙醇酸鹽流體培養基，向另一只濾筒中加入100 ml胰酪大豆胨液體培養基，取塑料夾片，在內含硫乙醇酸鹽流體培養基濾杯的進液口處導管上端約5～6 cm位置將其夾住，取一無菌剪刀，于夾片的上端約3 cm處將導管剪斷，并將尾端插入濾杯上端的呼吸器端口。如此分別重復3次，獲得含胰酪大豆胨液體培養基和硫乙醇酸鹽流體培養基的濾筒各3份。拔出插在呼吸器上端的軟管，通過呼吸器注入1 ml含菌量不大于100 cfu的菌液于杯體，重新封閉杯體并置于培養箱培養，用注射器穿刺濾管另一側。加入硫乙醇酸鹽流體培養基的3份濾筒分別加入金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌的菌液；加入胰酪大豆胨液體培養基的3份濾筒分別加入枯草芽孢桿菌、白色假絲酵母菌液或黑曲霉孢子懸液。加入硫乙醇酸鹽流體培養基的濾筒放入30～35 ℃的恒溫培養箱中，培養不超過5 d，加入胰酪大豆胨液體培養基的濾筒放入20～25 ℃培養箱中，培養不超過5 d。其余兩批樣品均用同法操作。

2）供試品處理、供試品對照組、菌液對照組、陰性對照組 分別同“1.4.2”1）、3）、4）、5）。

2 結果

2.1 方法優化

2.2 方法適用性驗證

對3批注射用舒尼鉑（凍干）進行無菌檢查方法適用性驗證的結果顯示，3個批次試驗組各容器中各菌種的生長狀況與菌液對照組一致，陰性對照組和供試品對照組各培養物均澄清，無微生物生長。表明注射用舒尼鉑（凍干）的檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計。

3 討論

本試驗使用薄膜過濾法對注射用舒尼鉑（凍干）進行無菌檢查，結果表明，舒尼鉑對6種試驗菌株均無明顯抑制作用，這與其他鉑類抗癌藥無菌檢查方法學研究的結果相符[6]。雖然有報道顯示，順鉑等鉑類藥物對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等有一定的體外抑菌活性[7]，但相關文獻與本試驗均表明這些抑菌活性并不影響使用薄膜過濾法對藥品進行無菌檢查。因此，可以采用薄膜過濾法作為舒尼鉑的無菌檢查方法。

參考文獻

[1] 陳鴻利， 吾麥爾江·艾麥提， 高峻峰， 等. 順鉑類抗腫瘤藥物研究進展[J]. 承德醫學院學報， 2005， 22（2）： 150-153.

[2] 祝天慧， 李裕鑫， 游松. 鉑類抗腫瘤藥物的研究進展[J].沈陽藥科大學學報， 2016， 33（6）： 512-518.

[3] 王慶琨， 普紹平， 朱澤兵， 等. 抗腫瘤藥米鉑的合成工藝改進[J]. 中國藥物化學雜志， 2012， 22（1）： 36-37； 43.

[4] Wheate NJ， Walker S， Craig GE， et al. The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials[J]. Dalton Trans， 2010， 39（35）： 8113-8127.

[5] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2015年版（四部）[M]. 北京： 中國醫藥科技出版社， 2015： 136-140.

[6] 高玉清， 王榮端， 紀敬娟， 等. 注射用奧沙利鉑的無菌方法學研究[J]. 河北醫藥， 2009， 31（11）： 1379-1380.

[7] 袁水斌， 陳江平， 劉敏知， 等. 抗腫瘤化療藥物對常見致病菌的抑制試驗研究[J]. 實驗與檢驗醫學， 2009， 27（3）： 237-240； 268.