復(fù)方藏茴香治療功能性消化不良作用機(jī)制及藥效驗(yàn)證研究＊

朱慧明，喬 莉，馮小龍

(石家莊學(xué)院化工學(xué)院 石家莊 050035)

FD又稱(chēng)消化不良，基于功能性胃腸病羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)[1]，F(xiàn)D臨床以上腹部疼痛或燒灼感、餐后飽脹、早飽、過(guò)度噯氣等上消化道癥狀為主要表現(xiàn)，世界范圍內(nèi)廣泛流行，西方國(guó)家發(fā)病率為9.8%-20.2%，中國(guó)大陸地區(qū)為11.8%-23.8%[2]。臨床上無(wú)特效治療方案，目前臨床上常見(jiàn)治療方法多為促進(jìn)胃腸動(dòng)力、抑制胃酸分泌及胃粘膜保護(hù)藥物療法，如胃復(fù)安、嗎丁啉、西沙必利等，上述藥物的治療作用單一，且副作用較多。因此，研究開(kāi)發(fā)用于治療FD的藥物具有十分重要的意義，近年來(lái)，用中成藥治療FD的臨床報(bào)道增多，并顯示出一定優(yōu)勢(shì)[3]。

復(fù)方藏茴香[4]是正在研發(fā)的中藥5類(lèi)新藥，目前處于III期臨床實(shí)驗(yàn)階段，適應(yīng)癥為FD，主要由薄荷油[5,6](Peppermint Oil)和藏茴香油[7](Caraway Oil)組成。

薄荷油系從唇形科植物薄荷(Menthɑhɑplocɑlyx Briq)中提取的揮發(fā)油，具有清涼止癢、解痙、利膽、溶石、抗炎鎮(zhèn)痛作用，可治療頭痛、暈船、反胃、胃腸氣脹等，主要含有薄荷醇、薄荷酮及薄荷酯類(lèi)化學(xué)成分[8]。薄荷醇和薄荷酮是藥典收載薄荷油的含量測(cè)定指標(biāo)性成分，具有較強(qiáng)的利膽作用，可促進(jìn)膽汁排出[9]。薄荷油在歐洲也具有較長(zhǎng)的藥用歷史，是一種安全有效的腸易激綜合征(IBS)治療用藥[10]，瑞士Tillotts Pharma公司生產(chǎn)的薄荷油腸溶包衣膠囊[11,12](Colpermin，含薄荷油約187 mg)已在歐盟多個(gè)國(guó)家上市銷(xiāo)售。

藏茴香油系從藏茴香(Cɑrum cɑrvi L.)藥材中提取的揮發(fā)油，該藥性溫、味微辛，有芳香健胃驅(qū)風(fēng)理氣之功，用于治療食欲不振、胃脘疼痛、腹脹、消化不良及小腸疝氣等癥[13]，主要含香芹酮(carvone)、檸檬烯(limonene)及β蒎烯等萜烯化學(xué)成分[14]。香芹酮能延長(zhǎng)豚鼠組胺、乙酰膽堿性哮喘的引喘潛伏期，對(duì)豚鼠氣管有直接松弛作用，并有抗氨甲酰膽堿作用，可抑制豚鼠離體氣管Schultz-Dale反應(yīng)，抑制過(guò)敏介質(zhì)釋放和拮抗過(guò)敏介質(zhì)引起氣道收縮，發(fā)揮呼吸道抗過(guò)敏作用[15]。檸檬烯具有祛痰、止咳、平喘，溶解膽結(jié)石，鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)等作用，以檸檬烯為主要成分的復(fù)方檸檬烯膠囊，具有利膽溶石，理氣開(kāi)胃，消炎止痛的功效[16]。

現(xiàn)有臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方藏茴香治療FD安全有效，療效持續(xù)至停藥2周后[4]。但由于其化學(xué)成分復(fù)雜、作用廣泛，在FD治療中發(fā)揮作用的有效成分及其相關(guān)作用分子機(jī)制尚不清楚，因此，本研究將采用網(wǎng)絡(luò)藥學(xué)方法，對(duì)該藥潛在活性成分及其作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，同時(shí)采用部分實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其活性，明確藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，為該藥臨床研究、后期推廣及同類(lèi)藥物的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 化學(xué)成分庫(kù)的構(gòu)建

檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)數(shù)據(jù)庫(kù)(TCMSP，http://tcmspw.com/index.php)及查閱相關(guān)文獻(xiàn)收集薄荷油和藏茴香主要化學(xué)成分，利用PubChem數(shù)據(jù)為庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)對(duì)其分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn)，結(jié)合Chemdraw軟件獲取主要成分、CAS號(hào)、分子式、分子量、化學(xué)結(jié)構(gòu)式、SMILES等信息，并將每個(gè)化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)式保存為mol格式，用于后繼分析。

1.2 化合物靶點(diǎn)篩選

分別用STITCH，Swiss TargetPredict，TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)化學(xué)成分的靶點(diǎn)[17]，對(duì)TCMSP預(yù)測(cè)結(jié)果保留“validated”的靶點(diǎn)，對(duì)STITCH和SwisstargetPredict預(yù)測(cè)結(jié)果選取有結(jié)合性的靶點(diǎn)，將獲得的靶點(diǎn)進(jìn)一步在Uniport(https://www.uniprot.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)上獲取標(biāo)準(zhǔn)化命名，最終得到化學(xué)成分作用靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.3 FD相關(guān)靶點(diǎn)篩選

通過(guò)在DrugBank[18]數(shù)據(jù)庫(kù)(https://go.drugbank.com/)和OMIM[19]數(shù)據(jù)庫(kù)(https://omim.org/)中輸入關(guān)鍵詞Functional dyspepsia搜索已報(bào)道的與FD相關(guān)的基因，去除重復(fù)基因，得到FD疾病相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.4 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將化學(xué)成分作用靶點(diǎn)和FD疾病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行匹配，得到復(fù)方藏茴香治療FD的潛在作用靶點(diǎn)，將復(fù)方藏茴香化學(xué)成分和潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入Cysopscape 3.7.2軟件，構(gòu)建化學(xué)成分-潛在作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，利用NetworkAnalyzer工具計(jì)算網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，包括度值(Degree)、介數(shù)(Betweenness centrality，BC)[20]，確定關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，分析潛在活性成分和關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。

1.5 基因功能和信號(hào)通路分析

將潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，Select identifier設(shè)置為Official gene symbol，List type設(shè)置為Gene list，限定物種為人，根據(jù)P＜0.05作為篩選條件，對(duì)復(fù)方藏茴香作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集，并獲得KEGG通路富集結(jié)果[21]。

1.6 活性化合物的篩選

采用ADMET Predictor 9.5軟件[22]，對(duì)作用于潛在作用靶點(diǎn)的化學(xué)成分進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)預(yù)測(cè)研究，選擇人體的吸收分?jǐn)?shù)%Fa≥40%和人體口服生物利用度%Fb≥30%作為篩選指標(biāo)[23]，結(jié)合文獻(xiàn)中化學(xué)成分的含量信息，以化學(xué)成分的含量≥1%為指標(biāo)，最終篩選出藥物中主要活性成分。

1.7 藥效學(xué)驗(yàn)證

1.7.1 醋酸扭體法觀察復(fù)方藏茴香對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用

選取健康昆明種小鼠，體重23-25 g，雌雄各半，按性別、體重隨機(jī)分為對(duì)照組、復(fù)方藏茴香35、70、140 mg·kg-1、陽(yáng)性藥阿司匹林200 mg·kg-1劑量組，共5組，每組10只，灌胃給藥，給藥容積均為0.1 mL/10g體重，小鼠給藥后1 h，均腹腔注射0.6%醋酸溶液0.01 mL·g-1體重，記錄15 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)。

1.7.2 對(duì)大鼠血清胃泌素含量的影響

選取健康Wistar種大鼠，體重200-250 g，雌雄兼用，按性別、體重隨機(jī)分為對(duì)照組、復(fù)方藏茴香25、50、100 mg·kg-1、陽(yáng)性藥硫酸阿托品2.5 mg·kg-1劑量組，共5組，每組8-11只，灌胃給藥，灌胃容積均為0.01 mL·g-1體重，對(duì)照組給予等容量對(duì)照液。大鼠禁食供水24 h后，再灌胃給藥1次(共2次)，末次灌胃給藥1 h后，眼眶取血2 mL，立即3500 rpm離心10 min，分離血清置-20℃冰箱待測(cè)，采用放免法進(jìn)行胃泌素的測(cè)定。

1.7.3 對(duì)多巴胺致小鼠胃排空抑制的影響

選取健康昆明種小鼠，體重20-23 g，雌雄各半，按性別、體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組、鹽酸多巴胺模型對(duì)照組、復(fù)方藏茴香35、70、140 mg·kg-1及陽(yáng)性藥硫酸阿托品5 mg·kg-1劑量組，共6組，每組10只，小鼠禁食供水18 h后，灌胃給藥，給藥容積為0.01 mL·g-1體重，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組分別給予等容量對(duì)照液和蒸餾水，于給藥后1 h，除空白對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射鹽酸多巴胺2.54 mg·kg-，并同時(shí)灌胃給予營(yíng)養(yǎng)性半固體糊0.8 mL/只，20 min后脫頸處死動(dòng)物，剖腹、取胃、稱(chēng)量胃全重和凈重，計(jì)算胃內(nèi)殘留率。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方藏茴香中活性成分和作用靶點(diǎn)

通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)并檢索相關(guān)文獻(xiàn)[24-26]共收集到72個(gè)化學(xué)成分，主要為小分子化合物，對(duì)72個(gè)化學(xué)成分的作用靶點(diǎn)進(jìn)行檢索，其中有作用靶點(diǎn)的化學(xué)成分為68個(gè)，共獲得作用靶點(diǎn)180個(gè)。

運(yùn)用Cytoscape軟件構(gòu)建化學(xué)成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，如圖1所示，紅色節(jié)點(diǎn)為活性化合物，綠色為靶點(diǎn)，網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析顯示，化合物的平均度數(shù)為16.82，說(shuō)明復(fù)方藏茴香中潛在化學(xué)成分具有多靶點(diǎn)屬性，其中度數(shù)較大(度數(shù)＞17)的化合物共29個(gè)，藏茴香中含量較高的主要成分香芹酮和檸檬烯的度數(shù)分別為39和15，薄荷油中含量較高的主要成分薄荷醇和薄荷酮的度數(shù)分別為24和14。

圖1 復(fù)方藏茴香活性成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.2 潛在作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)分析

將化學(xué)成分作用靶點(diǎn)和FD疾病相關(guān)靶點(diǎn)(共341個(gè))進(jìn)行匹配，共獲得14個(gè)潛在作用靶點(diǎn)，通過(guò)String獲得14個(gè)潛在靶點(diǎn)的蛋白相互作用關(guān)系，導(dǎo)入Cytoscape軟件繪制蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)(圖2)，節(jié)點(diǎn)大小表示度值的大小，對(duì)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)14個(gè)靶點(diǎn)組成2個(gè)作用網(wǎng)絡(luò)，γ-氨基丁酸-多巴胺網(wǎng)絡(luò)和激素受體網(wǎng)絡(luò)。

圖2 潛在作用靶點(diǎn)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

運(yùn)用Cytoscape軟件構(gòu)建潛在化學(xué)成分-潛在作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，如圖3所示，紅色節(jié)點(diǎn)為活性化合物，綠色為靶點(diǎn)，網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析顯示，共有42個(gè)化學(xué)成分作用于潛在作用靶點(diǎn)，平均度數(shù)為2.85，其中最大度值為6，表明復(fù)方藏茴香中成分具有多靶點(diǎn)屬性，且多個(gè)成分均可以作用于潛在作用靶點(diǎn)；潛在作用靶點(diǎn)的平均度數(shù)為8.57，度數(shù)較大的靶點(diǎn)有4個(gè)，分別為AR(度數(shù)38)、ESR1(度數(shù)26)、SLC6A4(度數(shù)17)和GABBR1(度數(shù)13)，14個(gè)潛在作用靶點(diǎn)信息見(jiàn)表1。

表1 活性成分潛在靶點(diǎn)信息

圖3 復(fù)方藏茴香活性成分-潛在作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.3 潛在作用靶點(diǎn)生物學(xué)功能分析

將14個(gè)潛在作用靶點(diǎn)映射到DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)中，設(shè)定P≤0.05，進(jìn)行GO功能富集分析和信號(hào)通過(guò)分析，共發(fā)現(xiàn)9個(gè)富集分析結(jié)果和1個(gè)信號(hào)通路(表2)。富集分析結(jié)果涉及到的生物過(guò)程有4個(gè)，主要是氯化物運(yùn)輸、γ-氨基丁酸信號(hào)通路、多巴胺能突觸傳遞和磷脂酶C激活多巴胺受體信號(hào)通路；分子功能有3個(gè)，包括多巴胺結(jié)合、GABA-A受體活性和細(xì)胞外配體門(mén)控離子通道活性；細(xì)胞組成2個(gè)，包括GABA-A受體復(fù)合物和質(zhì)膜的組成成分。通路富集分析表明神經(jīng)活性配體-受體相互作用(Neuroactive ligand-receptor interaction)是復(fù)方藏茴香的主要作用通路。

表2 復(fù)方藏茴香作用靶點(diǎn)基因功能和蛋白通路

2.4 主要活性成分分析

為進(jìn)一步確定主要活性成分，對(duì)42個(gè)作用于潛在作用靶點(diǎn)的化學(xué)成分進(jìn)行預(yù)測(cè)篩選，結(jié)合化學(xué)成分在藥物中的含量[25-26]，采用ADMET Predictor軟件中人體生物利用度預(yù)測(cè)評(píng)估系統(tǒng)，選擇1 mg和10 mg 2個(gè)劑量，以%Fa≥40%和%Fb≥30%作為篩選指標(biāo)，共篩選出潛在活性成分共17個(gè)，藏茴香油中4個(gè)，薄荷油中13個(gè)，其中，香芹酮和薄荷醇分別是藏茴香油和薄荷油中含量最高的成分，預(yù)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3可見(jiàn)，化合物平均分子量156.43，最大分子量為257.42，均為小分子化合物，所有化合物在不同劑量(1.0 mg和10 mg)下的吸收分?jǐn)?shù)%Fa值均較高，表明此類(lèi)藥物在腸道內(nèi)滲透性良好，且生物利用度值均在40%以上，文獻(xiàn)報(bào)道，兩種揮發(fā)油中含量較高的香芹酮和薄荷醇在人體內(nèi)吸收良好[27]，表明此類(lèi)小分子化合物口服給藥后在人體內(nèi)可以被吸收利用。

2.5 藥效學(xué)驗(yàn)證

2.5.1 鎮(zhèn)痛作用

通過(guò)以上研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方藏茴香可影響神經(jīng)活性配體-受體相互作用，可能具有止痛作用，因此在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(表4)。

由表4可見(jiàn)，與對(duì)照組比較，陽(yáng)性藥阿司匹林有明顯鎮(zhèn)痛作用，復(fù)方藏茴香70、140 mg·kg-1劑量組明顯減少醋酸致小鼠的扭體次數(shù)，與空白對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。此結(jié)果表明，復(fù)方藏茴香有明顯的鎮(zhèn)痛作用，起效劑量為70 mg·kg-1，隨劑量增加作用增強(qiáng)。

表4 復(fù)方藏茴香對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用(±s，n=10)

表4 復(fù)方藏茴香對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用(±s，n=10)

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001(與對(duì)照組比較)

組別對(duì)照復(fù)方藏茴香復(fù)方藏茴香復(fù)方藏茴香阿司匹林劑量(mg·kg-1)35 70 140 200動(dòng)物數(shù)(只)10 10 10 10 10扭體次數(shù)(次)28.1±11.51 20.3±6.88 16.2±9.43*12.1±8.89**6.0±4.45***

2.5.2 血清胃泌素含量影響

復(fù)方藏茴香對(duì)大鼠內(nèi)分泌的影響，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 復(fù)方藏茴香對(duì)正常大鼠血清胃泌素含量的影響(±s)

表5 復(fù)方藏茴香對(duì)正常大鼠血清胃泌素含量的影響(±s)

注：*P＜0.05，**P＜0.01(與對(duì)照組比較)

組別對(duì)照復(fù)方藏茴香復(fù)方藏茴香復(fù)方藏茴香硫酸阿托品劑量(mg·kg-1)25 50 100 2.5動(dòng)物數(shù)(只)11 10 10 11 8胃泌素含量(pg·kg-1)135.99±27.54 127.28±17.37 107.18±22.15*95.28±26.55**105.25±26.57*

結(jié)果表明，復(fù)方藏茴香50、100 mg·kg-1灌胃給藥能降低正常大鼠血清胃泌素含量，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)，陽(yáng)性藥硫酸阿托品亦有明顯作用。

2.5.3 對(duì)多巴胺致小鼠胃排空抑制的影響

復(fù)方藏茴香對(duì)多巴胺致小鼠胃排空的影響，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 復(fù)方藏茴香對(duì)多巴胺致小鼠胃排空抑制的影響(±s)

表6 復(fù)方藏茴香對(duì)多巴胺致小鼠胃排空抑制的影響(±s)

注：△P＜0.05(與空白對(duì)照組比較)，*P＜0.05，**P＜0.01(與多巴胺模型組比較)

組別空白對(duì)照鹽酸多巴胺模型復(fù)方藏茴香+多巴胺復(fù)方藏茴香+多巴胺復(fù)方藏茴香+多巴胺硫酸阿托品+多巴胺劑量(mg·kg-1)2.54 35+2.54 70+2.54 140+2.54 5+2.54動(dòng)物數(shù)(只)10 10 10 10 10 10胃內(nèi)殘留率(%)26.34±7.29 48.00±15.08▲▲47.55±10.67 53.32±12.38 68.95±14.72**61.94±14.04*

結(jié)果表明，復(fù)方藏茴香140 mg·kg-1可增加多巴胺致小鼠胃排空抑制作用，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)。陽(yáng)性藥硫酸阿托品也有增加多巴胺致小鼠胃排空抑制作用。

3 討論

FD雖然為常見(jiàn)病，但其發(fā)病機(jī)制暫不明確，相關(guān)機(jī)制包括胃腸運(yùn)動(dòng)功能障礙、內(nèi)臟高敏感、胃酸、Hp感染、精神心理因素、腦腸肽等[28]。功能性胃腸病羅馬系列標(biāo)準(zhǔn)的推出，促進(jìn)了FD的基礎(chǔ)及臨床研究，逐漸明確FD的發(fā)生與胃腸道動(dòng)力異常、內(nèi)臟高敏感性有關(guān)，與胃腸黏膜炎癥、局部免疫功能異常及腸道菌群改變等可能有關(guān)，腦-腸軸異常在FD的發(fā)病機(jī)制中占有重要地位[29]。傳統(tǒng)的腦-腸軸從腸神經(jīng)系統(tǒng)的局部調(diào)控、自主神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)三各層面影響腸道功能，同時(shí)腸道和大腦之間還可以通過(guò)內(nèi)分泌、腦腸肽、腸道菌群等體液途徑實(shí)現(xiàn)雙向調(diào)節(jié)，從而維持正常的胃腸功能，病理情況下，腦腸相互作用的外周和中樞改變可能是慢性腹痛和胃腸道功能障礙癥狀的基礎(chǔ)[30]。本研究中發(fā)現(xiàn)，復(fù)方藏茴香具有多成分多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，通過(guò)氯化物運(yùn)輸、γ-氨基丁酸信號(hào)通路、多巴胺能突觸傳遞、磷脂酶C激活多巴胺受體信號(hào)通路等生物過(guò)程，影響GABA-A受體復(fù)合物、質(zhì)膜的組成成分，作用于神經(jīng)活性配體受體相互作用信號(hào)通路，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)消化道腸神經(jīng)系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌、間質(zhì)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等消化道動(dòng)力系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，從而發(fā)揮綜合治療作用，藥效學(xué)研究結(jié)果表明，復(fù)方藏茴香具有鎮(zhèn)痛，降低正常大鼠血清胃泌素含量，影響胃排空等作用。

在活性化合物預(yù)測(cè)研究中，目前多采用藥物相似性(drug-likeness，DL)[21]結(jié)合口服生物利用度(oral bioavailability，OB)作為的篩選指標(biāo)，當(dāng)DL≥0.18(整個(gè)相似度的平均值)則認(rèn)為該化合物與Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)中藥物具有一定的相似，成藥性較好。本研究發(fā)現(xiàn)，所有化合DL的平均值為0.05，均小于0.18，此指標(biāo)不適合用于揮發(fā)油類(lèi)小分子化合物的篩選。因此藥代動(dòng)力學(xué)指標(biāo)發(fā)揮著重要作用，中藥化學(xué)成分復(fù)雜，口服給藥后在體內(nèi)需經(jīng)過(guò)吸收、分布、代謝及排泄過(guò)程到達(dá)靶點(diǎn)器官和組織發(fā)揮作用，為了提高預(yù)測(cè)研究結(jié)果的準(zhǔn)確性，本研究中運(yùn)用ADMETPredictor軟件中人體生物利用度預(yù)測(cè)評(píng)估系統(tǒng)，建立了以表示活性成分在腸道內(nèi)滲透性的%Fa≥40%和人體口服生物利用度%Fb≥30%[23]的篩選標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)為減少了微量成分對(duì)作用機(jī)制的干擾，結(jié)合以化學(xué)成分含量≥1%組成綜合指標(biāo)，提高了預(yù)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，共確定以香芹酮和薄荷醇為代表的主要活性成分的17個(gè)。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是以系統(tǒng)生物學(xué)理論為基礎(chǔ)，融合多向藥理學(xué)、生物信息學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，具有整體性和系統(tǒng)性的特點(diǎn)，與中醫(yī)藥整體觀的原則相一致[31]。通過(guò)構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，探索藥物與疾病間的關(guān)聯(lián)，闡明中藥作用機(jī)制，并可以指導(dǎo)新藥研發(fā)。本研究構(gòu)建了復(fù)方藏茴香“活性成分-靶點(diǎn)”等網(wǎng)絡(luò)，從整體角度對(duì)藥物進(jìn)行了系統(tǒng)研究，網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果表明，AR、ESR1、SLC6A4和GABBR1可能為復(fù)方藏茴香關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。已有研究表明，AR并不在腸道上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，卻在腸道固有層的間充質(zhì)細(xì)胞表達(dá)，間充質(zhì)細(xì)胞在接收雄激素信號(hào)后，會(huì)分泌大量Bmp信號(hào)的抑制分子，減少Wnt拮抗信號(hào)分子的分泌，Bmp信號(hào)具有抑制腸干細(xì)胞分化的作用，Wnt有促進(jìn)腸干細(xì)胞增殖的作用，兩種信號(hào)協(xié)同維持腸干細(xì)胞自我增殖的穩(wěn)態(tài)[32]，AR與腸道相關(guān)疾病密切相關(guān)。雌激素及其受體與胃腸道疾病的發(fā)生及預(yù)后存在相關(guān)性，尤其在胃食管反流病、食管癌、消化性潰瘍、胃癌、炎癥性腸病、腸易激綜合征和結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起到了不同的作用[33]，腸道中雌激素受體的對(duì)正常的上皮結(jié)構(gòu)具有維持作用，同時(shí)具有抑制腸道炎癥作用，ESR1信號(hào)通路可能與胃黏膜腸上皮化生過(guò)程有關(guān)，并在其中發(fā)揮重要作用[34]。5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體SLC6A4在中樞和外周均能通過(guò)調(diào)控5-羥色胺的表達(dá)影響腸道的病理生理功能，在腸道疾病中發(fā)揮重要作用[35]，經(jīng)驗(yàn)方痛瀉安脾腸可通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠5-羥色胺和5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體水平，緩解腹痛、腹瀉、腹脹等不適癥狀[36]。GABA能信號(hào)系統(tǒng)在小腸上皮細(xì)胞功能性表達(dá)，可通過(guò)GABA受體影響小腸液體分泌[37]，GABA能信號(hào)系統(tǒng)激活后，破壞結(jié)腸粘膜屏障，增加腸通通透性，加重腸道有害細(xì)菌入侵，加重結(jié)腸粘膜炎癥反應(yīng)[38]，GABA通過(guò)不同受體調(diào)節(jié)不同共存遞質(zhì)的釋放而在胃腸動(dòng)力的興奮與抑制中發(fā)揮協(xié)調(diào)作用[39]，GABA可通過(guò)改善腸黏膜屏障損傷，緩解TNBS-乙醇溶液誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎[40]。

綜上所述，F(xiàn)D多有胃腸運(yùn)動(dòng)功能紊亂、迷走神經(jīng)功能亢進(jìn)，體內(nèi)乙酰膽堿、組胺等物質(zhì)釋放增多現(xiàn)象，導(dǎo)致胃腸運(yùn)動(dòng)與分泌亢進(jìn)而出現(xiàn)胃腸道痙攣、疼痛、脹氣、脹滿等消化道癥狀，復(fù)方藏茴香中以香芹酮和薄荷醇為代表的主要活性成分，通過(guò)作用于AR、ESR1、SLC6A4和GABBR1等關(guān)鍵靶點(diǎn)，影響神經(jīng)、神經(jīng)內(nèi)分泌、腦腸肽等途徑調(diào)控腦-腸軸系統(tǒng)，影響胃腸道動(dòng)力系統(tǒng)并產(chǎn)生鎮(zhèn)痛等作用，達(dá)到治療FD的目的。

FD臨床治療無(wú)特效藥，復(fù)方藏茴香臨床實(shí)驗(yàn)已顯示了一定的治療優(yōu)勢(shì)，但其成分復(fù)雜，作用機(jī)制不明確。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)復(fù)方藏茴香主要藥效成分、藥物作用靶點(diǎn)、藥物與疾病相互作用通路進(jìn)行了研究，并通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的結(jié)論，明確了復(fù)方藏茴香多成分-多靶點(diǎn)-多通路的治療FD的作用特點(diǎn)，加深了對(duì)復(fù)方藏茴香用于治療FD的認(rèn)識(shí)，為復(fù)方藏茴香分子機(jī)制的深入研究奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)為后期臨床研究中觀察指標(biāo)的選擇，臨床方案的制定提供參考，并為加快此類(lèi)藥物開(kāi)發(fā)，提高藥物臨床應(yīng)用的科學(xué)性合理性提供理論依據(jù)。