基于數(shù)據(jù)挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的血脂異常用藥規(guī)律和作用機制研究＊

耿秀超，張雨豪，王 梓，蔡紫赟，尹艷紫，張曉蕾，孫坤舉，李 強＊＊，于文濤，4＊＊

(1.河北中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院 石家莊 050200；2.河北大學(xué)醫(yī)學(xué)院 保定 071000；3.河北中醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)院 石家莊 050200；4.河北省心腦血管病中醫(yī)藥防治研究重點實驗室 石家莊 050091)

血脂異常是以血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)增高和(或)高密度脂蛋白(HDL)降低為主要特征的代謝性疾病[1]。祖國醫(yī)學(xué)無“血脂”或“血脂異常”之名，常將其引起的諸多癥狀歸于各種內(nèi)傷雜病中。《黃帝內(nèi)經(jīng)》記載“甘肥貴人，則膏粱之疾也”，張志聰在《靈樞集注》有“精微溢于外則皮肉膏肥，余于內(nèi)則膏脂豐滿”等論述，可見血脂異常符合“膏粱之疾、膏脂豐滿”的描述，且中醫(yī)認為膏、脂皆為水谷精微所化有益物質(zhì)，而嗜食肥甘酒醪，膏脂過多又可釀生痰濁而致諸多疾病，這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對血脂的認識是不謀而合的。近年來，隨著經(jīng)濟發(fā)展和飲食習(xí)慣的改變，血脂異常發(fā)病率逐年上升，我國人群的血脂異常總體患病率已高達40.40%[1]，美國成人單項低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)異常者超1億[2]。另外，該病呈低齡化趨勢，高膽固醇血癥在兒童和青少年中的患病率也明顯增加。血脂異常與脂肪肝、高血壓、動脈粥樣硬化、冠心病、糖尿病和腦卒中等多種疾病密切相關(guān)[3]，現(xiàn)已發(fā)展為全球性公共衛(wèi)生問題，嚴重威脅人類生命健康。世界衛(wèi)生組織報道由血脂異常誘發(fā)的心血管疾病死亡已占據(jù)了非感染性疾病死亡的一半以上[4]。

祖國醫(yī)學(xué)源遠流長，大量數(shù)據(jù)證明，中藥在防治血脂異常的研究方面效果顯著，其具有多途徑、多靶點、多層次調(diào)節(jié)血脂異常，且不良反應(yīng)少、藥物依賴性低的優(yōu)點[5]。李平平等[6]通過隨機對照研究證實中成藥脂必泰膠囊治療血脂異常臨床療效可靠，與阿托伐他汀鈣在治療血脂異常方面臨床療效相當(dāng)，且安全可靠。卓冰帆等[7]通過臨床研究發(fā)現(xiàn)對于痰濕內(nèi)阻型高脂血癥合并脂肪肝患者，服用山荷降脂湯能明顯降低血脂，改善血液流變學(xué)且不良反應(yīng)少。趙穎等[8]通過對黃連素治療血脂異常有效性進行Meta分析和安全性進行評價，結(jié)果顯示單用黃連素與他汀藥物對照時，其降低TC、TG、LDL-C的療效與他汀相當(dāng)并且具有良好的安全性。李越等[9]使用Meta分析的方法，對中藥健脾法治療血脂異常的臨床療效以及安全性進行系統(tǒng)評價，發(fā)現(xiàn)中醫(yī)健脾法聯(lián)合常規(guī)西藥治療高脂血癥或單純中醫(yī)健脾法，均較單純西藥降脂在總有效率方面具有一定的優(yōu)勢，且不良反應(yīng)較小。動物試驗亦表明中藥有效成分梔子苷[10]可通過上調(diào)miR-142a-5p，達到抑制脂質(zhì)代謝基因SREBP-1c肝表達水平的作用，從而有效降低高脂模型小鼠血清脂質(zhì)水平，并對肝脂質(zhì)蓄積有良好的治療作用。Sun等[11]通過代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)五味子木脂素可顯著抑制肝臟脂肪生成基因的mRNA表達水平，并降低肝X受體α(LXRα)的mRNA表達，具有良好的調(diào)節(jié)血脂異常作用，其作用機制與三羧酸循環(huán)、酮體和TC合成、膽堿代謝和脂肪酸代謝有關(guān)。Huang等[12]研究表明普洱茶中的茶黃素可以減少腸道膽鹽水解酶活性相關(guān)的微生物，從而改變小鼠和人類的腸道菌群和微環(huán)境，達到調(diào)節(jié)血脂異常的良好效果。但由于中醫(yī)醫(yī)家臨證經(jīng)驗和遣方用藥規(guī)律各具特色，加之中藥復(fù)方化學(xué)成分復(fù)雜，其作用機制并不明確，大大影響了臨床應(yīng)用。近年來，數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)[13]和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法[14-17]在中醫(yī)藥組方規(guī)律和作用機制研究中應(yīng)用日益廣泛，中醫(yī)傳承輔助平臺(V2.5)是一款適合中醫(yī)藥特點的數(shù)據(jù)挖掘軟件，集合了數(shù)理統(tǒng)計、文本挖掘、關(guān)聯(lián)規(guī)則和復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類等分析方法，可以總結(jié)中醫(yī)在臨床用藥過程中的用藥和配伍規(guī)律，并從中發(fā)現(xiàn)新的處方和核心藥對[18]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)強調(diào)從“單靶標(biāo)”向“網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)”研究模式的轉(zhuǎn)變，作為藥物研究的新模式，其研究特點和中醫(yī)理論中的整體觀念、辨證論治及配伍原則相一致[15,17]。李梢課題組[17,19]提出并利用“網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)”的方法，從中醫(yī)傳統(tǒng)的絡(luò)病方劑中提取了中藥核心配伍網(wǎng)絡(luò)，從網(wǎng)絡(luò)中預(yù)測出了多種成分的抗血管新生作用，并且得到了證實，成為利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的典范。該課題組[19-20]還通過中藥-靶標(biāo)-疾病的多層網(wǎng)絡(luò)聯(lián)合模塊分析，對中藥方劑配伍理論開展研究，發(fā)現(xiàn)中藥六味地黃方治療疾病的表型多富集于代謝和免疫等通路，對該藥滋陰的傳統(tǒng)功效和臨床上“異病同治”的機制給出了新的闡釋。因此，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與中醫(yī)藥的有機結(jié)合是當(dāng)前中醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點之一。馬麗娟等[21]采用數(shù)據(jù)挖掘方法獲得新冠肺炎預(yù)防核心藥組，并通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進一步發(fā)現(xiàn)其通過基礎(chǔ)代謝和炎癥相關(guān)通路發(fā)揮預(yù)防療效。嚴瑤琦等[22]采用中醫(yī)傳承輔助平臺和BATMAN-TCM[23]在線分析工具，對治療痛風(fēng)濕熱蘊結(jié)證的核心藥組進行KEGG通路分析，揭示了藥物配伍規(guī)律和作用機制。尕藏措[24]采用數(shù)據(jù)挖掘的方法分析了藏醫(yī)治療高原紅細胞增多癥(HAPC)中高頻次使用的藏藥，并進一步通過KEGG進行通路注釋及GO功能富集分析研究了作用機制。因此，本課題組全面檢索并收集了近40年以來(1979年-2019年)中藥復(fù)方治療血脂異常的臨床研究文獻報道2萬余篇，經(jīng)過篩選納入符合研究標(biāo)準(zhǔn)的786篇，將中醫(yī)傳承輔助平臺和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在線分析工具BATMAN-TCM結(jié)合使用，對其用藥規(guī)律和潛在作用信號通路進行了分析，從宏觀和微觀2個角度去挖掘中醫(yī)組方規(guī)律及作用機制，為更好的防治該病提供新思路。

1 資料與方法

1.1 處方來源

檢索1979-2019年“中國知網(wǎng)(CNKI)”“萬方數(shù)據(jù)”“維普中文期刊”數(shù)據(jù)庫中關(guān)于中醫(yī)藥治療“血脂異常”的臨床文獻。檢索方法為：運用關(guān)鍵詞“血脂異常”“高血脂”“高血脂癥”等進行初級檢索，從數(shù)據(jù)庫中檢索到相關(guān)文獻后，運用關(guān)鍵詞“中藥”“中醫(yī)”“臨床”“醫(yī)案”“經(jīng)驗”“療效”“觀察”“報道”等分別進行二次檢索，在上述機檢的基礎(chǔ)上，根據(jù)文獻納入和排除標(biāo)準(zhǔn)進行逐一篩選，完成第3次檢索。文獻篩選流程見圖1。

圖1 文獻篩選流程圖

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①血脂異常的中醫(yī)治療臨床研究資料，包括隨機對照試驗、病例報告和專家經(jīng)驗等；②干預(yù)措施為中藥復(fù)方，給藥途徑為口服；③文獻中有明確方藥組成、劑量和治療效果；④研究病例數(shù)30例以上；⑤公開的期刊、會議、學(xué)位論文文獻，有復(fù)診的文獻只取首次處方；⑥方藥組成完全相同，或同一作者發(fā)表多篇文章，以1篇計。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①非臨床研究，包括實驗研究文獻、科普性期刊和綜述等；②外用中藥、針灸、耳穴、刮痧等非口服湯劑治療者；③臨床診療情況與文獻描述差異過大，方劑組成不完整或劑量表述不準(zhǔn)確者；④臨床總有效率低于85%的文獻報道；⑤在1個方劑基礎(chǔ)上根據(jù)不同證型辨證加減的文獻報道。

1.4 處方篩選及藥名規(guī)范

按照上述標(biāo)準(zhǔn)篩選后，共786篇文獻符合檢索條件，文獻來源期刊年度分布見圖2；文獻來源期刊類型分布見圖3；提取中復(fù)方組成，共得到方劑786首，包含中藥314味，方劑類型分布見圖4。根據(jù)《中藥學(xué)》(全國高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材新世紀第4版)規(guī)范整理文獻內(nèi)中藥名稱[25]，對于書中未記錄的藥物，按照《中國藥典》(2015年版)對中藥名進行統(tǒng)一[26]。如：“紫丹參”統(tǒng)一記錄為“丹參”；“田七”統(tǒng)一記錄為“三七”；“炒棗仁”“棗仁”統(tǒng)一記錄為“酸棗仁”等。

圖2 文獻來源期刊年度分布

圖3 文獻來源期刊類型分布

圖4 方劑類型分布

1.5 數(shù)據(jù)錄入與核對

將篩選并規(guī)范后的處方錄入到中醫(yī)傳承輔助平臺(V2.5)臨床采集模塊，該軟件是由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所聯(lián)合中國科學(xué)院自動化研究所共同研制的統(tǒng)計分析軟件。全程錄入過程均由兩人配合完成，1人錄入1人審核，保證數(shù)據(jù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1.6 統(tǒng)計方法

1.6.1 基于頻次統(tǒng)計分析

將藥物出現(xiàn)頻次從大到小進行排序；對藥物類別、性味和歸經(jīng)屬性占比進行統(tǒng)計分析，并將結(jié)果分別導(dǎo)出。

1.6.2 基于關(guān)聯(lián)規(guī)則分析

關(guān)聯(lián)規(guī)則[27]是分析項集之間頻繁模式、因果結(jié)構(gòu)和相關(guān)關(guān)系的數(shù)據(jù)算法，可對常用藥物組合、配伍規(guī)律進行分析總結(jié)，并對創(chuàng)制新處方提供依據(jù)。“支持度”設(shè)置為20(支持度表示藥物組合在所選處方中出現(xiàn)的頻率，平臺默認支持度為20)，“置信度”設(shè)置為0.9(置信度表示在藥物組合中，當(dāng)A出現(xiàn)時，B出現(xiàn)的概率，數(shù)值越靠近1，表示概率越大，如決明子→山楂0.915，表示決明子出現(xiàn)時，山楂出現(xiàn)的概率為91.5%)。根據(jù)藥組出現(xiàn)頻次進行排序，通過“規(guī)則分析”功能得到常用藥物組合，并進行網(wǎng)絡(luò)可視化展示。

1.6.3 基于熵聚類方法分析

熵聚類分析法[27]能定量、定性分析藥物之間的相關(guān)性，特別是對挖掘具有混合型、離散型和連續(xù)型特點的數(shù)據(jù)具有優(yōu)勢，能揭示中藥核心組合以及用藥規(guī)律。使用平臺默認數(shù)值，將“相關(guān)度”設(shè)置為8(相關(guān)度表示兩個事物間存在相互聯(lián)系的百分比)，“懲罰度”設(shè)置為2(懲罰度表示為了減少負面數(shù)據(jù)信息干擾的1個參數(shù))的條件進行約束，通過復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類算法演化出核心藥物組合，在此基礎(chǔ)上再運用無監(jiān)督的熵層次聚類算法演化出新處方。

1.7 作用機制分析

1.7.1 高頻藥組活性成分和潛在靶點分析

將組方規(guī)律分析中得到的核心藥物配伍錄入到BATMAN-TCM在線分析平臺，設(shè)定預(yù)測候選目標(biāo)(包括已知目標(biāo))得分不小于每個成分得分分界的20%，AdjustP-value設(shè)為0.05，獲取核心藥味活性成分和相應(yīng)潛在靶點進行生物信息學(xué)分析。

1.7.2“潛在靶點-信號通路-疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

采用BATMAN-TCM在線分析系統(tǒng)，將核心高頻藥組的活性成分、作用疾病和潛在靶點作為“節(jié)點”，灰色的連線能可視化呈現(xiàn)節(jié)點間，直接、間接的調(diào)控關(guān)系，構(gòu)建核心高頻藥組的“潛在靶點-信號通路-疾病”網(wǎng)絡(luò)。

1.7.3 基因富集分析和通路注釋研究

通過基因本體(GO)和京都基因與基因組百科全書(KEGG)對藥物作用靶點的分子功能(MF)、細胞組分(CC)以及參與的生物過程(BP)和差異表達基因進行信號通路分析，并依據(jù)P-value排名，將通路依次展示在結(jié)果中。通過研究核心高頻藥組的生物信號通路等生物學(xué)信息，可預(yù)測其發(fā)揮生物學(xué)功能的作用機制。

2 結(jié)果

2.1 藥物頻次

在篩選的786首方劑中，共包含中藥314味，使用藥物總頻次共4724次，其中27味藥物使用頻次超過10%，統(tǒng)計排名前10味中藥依次為山楂、澤瀉、丹參、決明子、茯苓、何首烏、白術(shù)、黃芪、大黃、陳皮，具體結(jié)果見表1。

表1 藥物頻次統(tǒng)計

2.2 藥物功效

27味高頻次藥物按照功效統(tǒng)計，使用頻次較高的藥物依次為活血化瘀藥、補虛(健脾補腎為主)藥、利水滲濕藥、消食化積藥，具體結(jié)果見表2。

表2 藥物功效統(tǒng)計

2.3 藥物性味和歸經(jīng)

27味高頻次藥物中，四氣頻次最高為溫性，其次為涼性，具體結(jié)果見圖5；五味頻次最高為苦味，其次為甘味，具體結(jié)果見圖6。藥物歸經(jīng)頻次最高為肝經(jīng)，其次為脾經(jīng)、胃經(jīng)，具體結(jié)果見圖7。

圖5 藥物四氣頻次統(tǒng)計

圖6 藥物五味頻次統(tǒng)計

圖7 藥物歸經(jīng)頻次統(tǒng)計

2.4 基于關(guān)聯(lián)規(guī)則的組方規(guī)律

當(dāng)支持度=20，置信度=0.9時，共得到常用藥對(藥組)17個，按藥物組合出現(xiàn)頻次由高到低排序，見表3。核心組方中藥6味，分別為：山楂、澤瀉、丹參、決明子、茯苓、何首烏，網(wǎng)絡(luò)展示見圖8。當(dāng)置信度≥0.9時，統(tǒng)計顯示多種藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則和組合模式，按照置信度升序排序，分別為決明子+山楂，決明子、澤瀉+山楂，決明子、丹參+山楂，具體結(jié)果見表4。

表4 處方中高頻藥物的關(guān)聯(lián)規(guī)則(置信度≥0.9)

圖8 核心藥物關(guān)系網(wǎng)絡(luò)

表3 處方中的高頻藥物組合

2.5 基于熵聚類的組方規(guī)律

2.5.1 基于復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類的核心藥物組合分析

使用平臺默認數(shù)值，通過復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類分析，得到核心藥物組合22組，作為演化提取新處方的基礎(chǔ)(表5)。

表5 處方中的核心藥物組合

2.5.2 基于無監(jiān)督熵層次聚類的新方組合分析

結(jié)合上述核心藥物組合提取結(jié)果，獲得新處方11個(表6)。

表6 防治血脂異常的新處方

2.6 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)高頻藥組治療血脂異常的作用機制

基于數(shù)據(jù)挖掘研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)山楂、澤瀉和決明子是防治血脂異常的高頻藥物，三藥不僅作為常用藥物組合出現(xiàn)，而且也在生成的新處方中列出。通過BATMAN-TCM在線分析系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)，三藥共涉及182個有結(jié)構(gòu)信息的化合物，71個無結(jié)構(gòu)信息。通過分析發(fā)現(xiàn)雌激素受體1(ESR1)、大麻素受體1型(CNR1)、糖皮質(zhì)激素受體基因(NR3C1)、環(huán)氧合酶2(PTGS2/COX2)等可作為藥組的核心潛在靶點調(diào)控人體血脂水平。三藥潛在靶點所涉及的疾病共21種，主要包括高血壓、腦損傷、心力衰竭、疼痛、心律失常、藥物依賴等。三藥所含化合物及其對應(yīng)潛在靶點、信號通路與疾病的網(wǎng)絡(luò)圖展示(圖9)。

圖9 潛在靶點、信號通路與疾病網(wǎng)路圖

進一步KEGG通路分析顯示，“山楂、澤瀉和決明子”對應(yīng)潛在靶點富集的生物通路46條，其中對應(yīng)靶點數(shù)在20以上的有17條。該高頻藥組涉及三羧酸(TCA)循環(huán)、脂質(zhì)代謝、脂肪酸降解等調(diào)節(jié)血脂相關(guān)的關(guān)鍵信號通路，從而揭示了調(diào)節(jié)血脂功能的作用機制(圖10)。此外，神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、和氨基酸代謝(如組氨酸、絡(luò)氨酸等)作為靶點數(shù)量較多的信號通路也參與其中。

圖10 KEGG關(guān)鍵通路分析圖

通過GO功能分析，“山楂、澤瀉和決明子”所涉及的生物過程和分子功能如圖11所示，三藥除共同參與一些基礎(chǔ)代謝過程外，還可直接參與脂質(zhì)合成與代謝、免疫和循環(huán)系統(tǒng)進程、細胞間信號傳遞過程等，可見該藥組通過介導(dǎo)多個生物過程維持機體血脂正常代謝。

圖11 GO功能分析圖

3 討論

血脂異常屬現(xiàn)代醫(yī)學(xué)之病名，其發(fā)病機制復(fù)雜，與糖脂代謝異常、胰島素抵抗、血小板聚集等多種因素有關(guān)。中醫(yī)文獻將其歸納到“痰濁”“血瘀”“膏梁之疾”等范疇。中醫(yī)學(xué)者多認為[28-32]，血脂異常多因嗜食肥甘、脾胃受損，中焦失運、聚濕為痰，脈絡(luò)瘀滯、痰瘀互結(jié)為病，或七情太過、肝腎虧虛，肝郁犯脾、脾失運化，導(dǎo)致痰瘀內(nèi)生。因此本病多為本虛標(biāo)實之證，與肝、脾、腎三臟關(guān)系密切，脾虛、腎虛為其本，痰凝、血瘀為其標(biāo)，治療多用健脾補腎、活血化瘀、祛濕化痰之法。

本研究從宏觀角度看，通過中醫(yī)傳承輔助平臺對血脂異常方藥組成規(guī)律進行研究，收集了近40年的相關(guān)文獻，在786首方劑組成中，使用頻次排名靠前的有山楂、澤瀉、丹參、決明子、茯苓、何首烏等27味中藥，根據(jù)功效分類，這些高頻次的藥物以活血化瘀、健脾補腎、利水滲濕和消食化積功效為主，這與中醫(yī)對血脂異常患者血瘀、脾虛和痰濁病機的認識相一致[28-32]。使用頻次排列居首的藥物為山楂，其功效以消食化積、活血散瘀為主。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，山楂黃酮[33]作為山楂提取物，可通過調(diào)節(jié)血脂代謝及相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達，顯著降低血脂異常小鼠的血清總膽固醇和甘油三酯。利水滲濕藥中澤瀉是出現(xiàn)頻次最高的，侯少偉等[34]研究證實，澤瀉所含皂苷類成分可明顯降低大鼠血清TC和LDL-C的水平，并可改善大鼠肝臟脂肪變性程度。決明子是使用頻次最高的清熱藥，既善清肝熱，又兼益腎陰，鄧楠等[35]研究了決明子水提物治療高脂血癥大鼠血漿中9種明顯生物標(biāo)志物含量的變化，證明決明子水提物不僅能作用于氨基酸及脂肪酸的代謝通路，而且還有很好的調(diào)脂作用。由此可見，采用數(shù)據(jù)挖掘方法得出的高頻中藥，其防治血脂異常亦有現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)。從性味歸經(jīng)看，性溫，味苦甘，歸肝、脾、胃三經(jīng)的藥物最多。脾氣主升，其升清全賴于陽氣的蒸騰，溫性藥物的大量應(yīng)用，正是國醫(yī)大師路志正調(diào)理脾胃思想“脾病治宜溫補升陽燥濕”的重要體現(xiàn)[36]。苦能泄、能燥、能堅，《儒門事親·水腫黃膽第十五》提出“濕氣在上，以苦吐之，濕氣在下，以苦瀉之”，苦味藥物的大量應(yīng)用表明血脂異常的臨床治療應(yīng)重視濕邪。甘味可以補益，健脾益腎中藥是治療血脂異常的常用藥物，在臨床診療中運用健脾益氣、補腎填精法可起到顯著療效。藥物歸經(jīng)顯示，脾主運化，說明血脂異常的病機以脾虛胃弱、運化失常為主，肝主疏泄，可助脾運化，若肝氣條達，則脾氣健運，水谷津液輸布正常，痰濕自消。郭姣及其團隊[37]認為血脂異常等糖脂代謝病臨床多表現(xiàn)與“肝”相關(guān)的證候，治療中加入“調(diào)肝”中藥可使療效顯著提高，本研究結(jié)果與其認識相一致。在基于關(guān)聯(lián)規(guī)則的組方用藥規(guī)律研究中，綜合支持度和置信度排名發(fā)現(xiàn)高頻藥組是“山楂、澤瀉和決明子”。山楂歸脾經(jīng)和肝經(jīng)，以消食化積，活血祛瘀見長；澤瀉歸腎經(jīng)，以利水滲濕，泄熱化飲見長；決明子歸肝經(jīng)，以清肝明目，利水通便見長；三藥配伍可對水濕、痰飲、瘀血同治，尤以治標(biāo)見長。楊靜云等[38,39]發(fā)現(xiàn)中藥組合“山楂、澤瀉和決明子”經(jīng)紅曲霉發(fā)酵后，能顯著提高中藥有效成分的含量，且發(fā)酵產(chǎn)物對高脂血癥大鼠血脂水平具有良好的調(diào)節(jié)作用和安全性。在熵聚類的組方規(guī)律分析中，生成新處方11個。其中也包含“山楂、澤瀉和決明子”藥組的新處方(處方8)，該組合中何首烏屬于補益藥，可補精血、烏須發(fā)、強筋骨，干姜性溫、入脾經(jīng)，起到溫陽健脾功效，同時與“山楂、澤瀉和決明子”合用，共奏疏肝活血、除濕化痰之功。此外，處方1和處方2均是以滋補肝腎為主方劑，所治病位在肝腎下焦，處方1由淫羊藿、肉桂、黑大豆、五加皮組成，側(cè)重于溫補腎陽，壯火益氣，治療命門火衰，下焦虛寒之證；處方2由鉤藤、杜仲、桑寄生、酸棗仁、首烏藤組成，側(cè)重于滋補肝腎，養(yǎng)血安神，治療肝腎不足，肝陽上亢，擾動心神之證。處方3至處方10均是化痰利濕為主的方劑，處方3和處方5所治病位都在肝，其中處方3由桔梗、枳實、柴胡、竹茹、膽南星組成，以疏肝理氣，化痰祛濕為主，適合痰濕壅盛，肝氣疏泄不利之證；處方5，由虎杖、郁金、茵陳、金櫻子組成，以疏肝解郁，利濕退黃為主，適合肝膽濕熱之證。處方3和處方6，所治病在心，都具有開竅醒神作用，其中處方6，由天竺黃、石菖蒲、僵蠶、竹茹、膽南星組成，以祛濕化痰，開竅醒神為主，適合痰濕閉阻心竅，心神不寧之證；處方四，由澤蘭、雞內(nèi)金、白茅根、大腹皮、苦丁茶組成，以清熱利濕，行氣消食為主，所治在下焦，適合痰濕阻滯下焦，腑氣不通，小便不利之證。處方7，由槐花、酸棗仁、黃柏、毛冬青、冰片組成，以清熱涼血，開竅醒神為主，適用于血熱擾動，蒙蔽心神之證。處方9和處方10均為理氣化痰之劑，所治病位均在中焦，其中處方9，由砂仁、檀香、黃連、木香、白豆蔻組成，以清熱燥濕，理氣化痰為主，適合濕熱阻滯脾胃，中焦運化不利之證。處方10，由白術(shù)、茯苓、陳皮、半夏組成，是二陳湯加白術(shù)而成，以健脾益氣，燥濕化痰為主，適合脾虛生濕之證。處方11是桃紅四物湯加上地龍而成，重在涼血活血，化瘀通絡(luò)，適合血熱兼血瘀之證。綜合分析，新處方的藥物組成反映了血脂異常的生成與肝氣郁滯、脾腎兩虛、痰濕阻滯、血熱成瘀等病理因素相關(guān)。

本研究從微觀角度看，采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對高頻藥組的作用機制進行分析。由于新處方8中的“山楂、澤瀉和決明子”藥物組合，是關(guān)聯(lián)規(guī)則分析中的高頻藥物配伍，故將此藥組作為研究對象。BATMANTCM平臺是第1個專門研究中藥分子機制的在線生物信息學(xué)分析工具，其可展示中藥成分、中藥作用靶點和疾病的關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，體現(xiàn)了中藥多成分、多靶點、多途徑的作用機制，可為進一步通過實驗驗證作用機制指明方向[23]。Zhang等[40]使用BATMAN-TCM平臺分析表明乳炎內(nèi)消膏的潛在靶點可能為ESR1、PGR、PTGS2、EGFR、Src，隨后通過實驗驗證了乳炎內(nèi)消膏可以下調(diào)MCF-10AT細胞中ESR1、PGR、PTGS2、EGFR和Src基因和蛋白的表達水平，與平臺預(yù)測結(jié)果一致。Gong等[41]使用BATMAN-TCM平臺分析出IL-10、TNF-α等細胞因子是藏藥青鵬軟膏主要成分的效應(yīng)分子，同時也分析了青鵬軟膏相關(guān)的慢性皮炎相關(guān)分子和細胞信號通路信息，后通過實驗驗證了青鵬軟膏在降低IL-10、TNF-α水平方面顯示出良好的抑制作用，間接證明了該平臺分析的相對準(zhǔn)確性。因此，本研究采用該工具對“山楂、澤瀉和決明子”藥組防治血脂異常作用機制進行預(yù)測和分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在其所富集的疾病中，高血壓、腦損傷、心力衰竭、疼痛與本病的關(guān)系最大。高脂血癥可通過信息傳導(dǎo)和代謝調(diào)節(jié)，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)尤其是腦部造成損害[42]。研究表明如果采用同時控制血脂、血糖和血壓的多因素干預(yù)策略，可最大程度降低冠心病、心力衰竭等心血管疾病風(fēng)險[43]。在該藥組富集的生物學(xué)通路中，TCA循環(huán)、脂質(zhì)代謝和脂肪酸降解通路與血脂調(diào)節(jié)密切相關(guān)。李玉晶等[44]研究表明決明子蒽醌苷可通過脂質(zhì)代謝通路中固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1C(SREBP-1c)和過氧化物酶體增殖物激活受體ɑ(PPARα)基因表達的調(diào)節(jié)而達到改善肝功能、調(diào)節(jié)血脂的作用。該藥組調(diào)治血脂異常的潛在作用靶點，主要包括與調(diào)節(jié)激素有關(guān)的ESR1、NR3C1，與調(diào)節(jié)脂肪分布和代謝有關(guān)的CNR1，以及與炎癥和疼痛相關(guān)的PTGS2/COX2等。Zhao等[45]研究表明絕經(jīng)后中國漢族女性中ESR1和ESR2的多態(tài)性，與代謝綜合征及相關(guān)因素(如肥胖、脂質(zhì)和葡萄糖代謝)密切相關(guān)。Kaya等[46]評價了NR3C1的多態(tài)性對代謝綜合征患者的影響，研究發(fā)現(xiàn)NR3C1受體活性受損是誘發(fā)代謝綜合征的重要病因。Numakura等[47]通過對腎移植后血脂異常患者進行特征分析，發(fā)現(xiàn)NR3C1 Bcl1 G等位基因可作為血脂異常的重要危險因素。CNR1可參與糖皮質(zhì)激素對脂肪分解的調(diào)節(jié)，在2型糖尿病和胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下表達上調(diào)，有研究報道[48]外周CNR1可作為2型糖尿病和血脂異常的1個關(guān)鍵藥物靶點。李曉東等[49]研究則發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用高、低劑量的山楂活性成分(山楂葉總黃酮)干預(yù)非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠，其肝組織炎癥程度明顯降低，COX2 mRNA和蛋白表達較模型組水平下降。NASH的發(fā)生發(fā)展過程中有COX-2/Nrf2通路的參與，而山楂葉總黃酮能通過促進Nrf2/HO-1表達，負向調(diào)節(jié)COX-2，從而減輕氧化反應(yīng)所導(dǎo)致的細胞損傷和肝組織炎癥，抑制了NASH的進展。另外，血脂異常容易誘發(fā)心絞痛、冠心病等心血管疾病，也有研究表明[50]編碼COX2的PTGS2基因變異(rs20417)與心血管疾病風(fēng)險降低有關(guān)。

綜上所述，本文采用了數(shù)據(jù)挖掘結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，總結(jié)了中醫(yī)臨床防治血脂異常的用藥規(guī)律，挖掘出了部分常用藥對及新方組合，分析了“山楂、澤瀉和決明子”藥物組合可能作用的潛在靶點、涉及的關(guān)鍵信號通路，對理解和傳承中醫(yī)醫(yī)家治療血脂異常的經(jīng)驗與思想，及完善該病的中醫(yī)辨證論治體系具有一定借鑒意義。但本文所采用的中醫(yī)傳承輔助平臺和BATMAN-TCM分析軟件也存在局限性，主要是所依賴的現(xiàn)有數(shù)據(jù)中仍存在許多不確定性，缺乏大樣本、多中心研究，在線相關(guān)的數(shù)據(jù)庫需要及時更新和完善。另外，納入文獻質(zhì)量也有待進一步提高，具體表現(xiàn)在各配方中有效成分的定義不完整，各配方中各成分的定量信息缺失等，尤其是中藥有效成分和靶點之間關(guān)系的機制研究還需進一步結(jié)合實驗驗證。在臨床診療中，需要重視各處方中的藥物用量以及君臣佐使的構(gòu)成情況，同時還需明確處方所治血脂異常的主癥、兼癥，做到選方遣藥明辨病機，隨癥化裁。