氨曲南及注射用氨曲南的質量分析

劉 晟

(重慶市食品藥品檢驗檢測研究院化學室，重慶 401121)

氨曲南是由美國施貴寶制藥有限公司研制的單酰胺環類β-內酰胺類抗生素，主要與細菌的青霉素結合蛋白3結合而抑制其細胞壁的合成，使細胞迅速溶解死亡。氨曲南對β-內酰胺酶高度穩定[1]，因而許多耐藥菌對該藥仍較敏感。本品抗菌譜主要為G-菌，抗菌效果與頭孢他啶和慶大霉素相近，臨床上主要用于治療尿路感染、下呼吸道感染、血流感染、皮膚軟組織感染(包括手術傷口感染、潰瘍和燒傷創面感染)、腹膜炎等腹腔感染、生殖道感染等。氨曲南為國家基本藥物，為保證其用藥安全，重慶市食品藥品檢驗檢測研究院從安全性、有效性和質量可控性等方面對其進行了全面的質量評價，為藥品質量的提高和監督管理提供技術依據。

1 材 料

1.1 儀器 Thermo Ultimate 3000 DGLC雙三元高效液相色譜儀(美國賽默飛世爾科技有限公司)；Agilent 7890型氣相色譜儀、Agilent 7700X型電感耦合等離子體質譜儀(美國安捷倫科技有限公司)；HACH TL2300型濁度儀(美國哈希公司)；Binder KBFP240型恒溫恒濕穩定性留樣箱(德國Binder公司)；XPE205DR型電子天平(瑞士梅特勒公司)。

1.2 試劑和藥品 氨曲南原料藥13批、注射用氨曲南29批(A、B和C公司)及原研制劑1批(規格1.0 g/支，批號AAX7824，美國施貴寶制藥有限公司)；氨曲南開環物(雜質A，批號1-LIJ-166-1)、開環脫硫基氨曲南(雜質B，批號9-VSB-47-2)、脫磺基氨曲南(雜質D，批號15-MAR-98-2，加拿大多倫多化學研究所)；氨曲南E型異構體(雜質E，批號160303，加拿大Molcan公司)；氨曲南乙酯(雜質F，批號2149-084A3，加拿大TLC藥物標準品有限公司)。乙腈為色譜純，水為純化水，磷酸二氫鉀和磷酸均為分析純。

2 方法和結果

2.1 法定檢驗方法 按照《中華人民共和國藥典》2015年版二部[2]進行法定檢驗。

2.2 探索性研究方法 為深入揭示藥品內在品質，比較各企業產品質量差異，確保臨床用藥安全有效，進一步開展了有關物質、加速試驗后溶液的澄清度、殘留溶劑、重金屬等4個方面的探索性研究。

2.3 法定檢驗結果

2.3.1 現行標準及分析 氨曲南原料藥及注射用氨曲南的現行質量標準為《中華人民共和國藥典》2015年版二部。

2.3.2 總體檢驗結果 對全部樣品按法定標準檢驗，結果均符合規定，符合規定百分率為100%。進一步對與產品質量密切相關的主要檢查項目如溶液的澄清度與顏色、有關物質、含量測定等結果進行統計分析。

2.3.3 溶液的澄清度 13批氨曲南原料藥均未超過0.5號濁度標準液。注射用氨曲南有25批未超過0.5號濁度標準液，有4批超過0.5號濁度標準液，但均未超過標準要求的1號濁度標準液。

2.3.4 溶液的顏色 13批氨曲南原料藥均未深于黃綠色2號標準比色液；29批注射用氨曲南均未深于黃綠色4號標準比色液。全部42批樣品均符合規定，合格率為100%。

2.3.5 有關物質 樣品有關物質檢驗均符合規定。氨曲南原料藥單個雜質的測定結果為0.2%～0.6%(相關標準規定不得超過1.5%)，平均值為0.5%；總雜質的測定結果為0.6%～1.2%(相關標準規定不得超過3.5%)，平均值為1.1%。注射用氨曲南單個雜質的測定結果為0.3%～0.5%(相關標準規定不得超過1.5%)，平均值為0.4%；總雜質的測定結果為0.6%～1.6%(相關標準規定不得超過5.0%)，平均值為1.2%。3家企業間比較，樣品的最大單個雜質和雜質總量基本一致，3家企業生產工藝均為無菌分裝，工藝簡單，影響雜質水平的工藝參數相似，對雜質的控制水平相當。各規格間比較，雜質量基本一致，無統計學差異，其原因是各規格生產線、生產工藝相同，在原料雜質量相當的前提下，制劑生產過程中產生的雜質量基本一致。比較3家企業批間數據差異，B廠樣品單個雜質和雜質總量基本一致，批間質量控制最好。其他2家企業有批間數據波動的情況，批間差異較大，提示應加強生產過程的質量控制，提高批間質量一致性。

2.3.6 含量 13批氨曲南原料藥含量測定結果均符合規定，按無水物計算的含量測定結果為97.5%～98.0%(相關標準規定應為93.0%～103.0%)，含量基本一致，無統計學差異。29批注射用氨曲南含量測定結果均符合規定，按無水、無精氨酸物計算的含量測定結果為93.0%～100.2%(相關標準規定應為91.0%～103.0%)；按平均裝量計算的含量測定結果為標示量的95.4%～106.8%(相關標準規定應為標示量的90.0%～115.0%)，平均值為99.4%，極差11.4。提示各企業均應嚴格按照要求合理投料。

2.4 探索性研究結果

2.4.1 有關物質 分別采用《美國藥典》40版[3]氨曲南有關物質測定方法和自行建立的有關物質測定方法對氨曲南原料藥和注射用氨曲南進行測定,結果見表1、表2。結果顯示，13批氨曲南原料藥中氨曲南開環物(雜質A)和開環脫硫基氨曲南(雜質B)之和均<0.6%，脫磺基氨曲南(雜質D)均<0.7%，氨曲南E型異構體(雜質E)均<0.5%，氨曲南乙酯(雜質F)均<0.4%，各雜質總和均<3.5%。

表1 有關物質測定結果Table 1 Determination results of the related substances (%)

表2 按自擬有關物質測定方法測得的各雜質總和Table 2 The total impurities determined by the self-made method in the related substances (%)

29批注射用氨曲南中氨曲南開環物(雜質A)和開環脫硫基氨曲南(雜質B)之和均<0.6%，脫磺基氨曲南(雜質D)均<0.7%，氨曲南E型異構體(雜質E)均<0.5%，氨曲南乙酯(雜質F)均<0.4%，各雜質總和均<2.5%。

13批氨曲南原料中，部分企業產品的最大單個未知雜質超過0.1%，29批注射用氨曲南中部分企業產品的最大單個未知雜質超過0.2%。與原研制劑比較，雖然部分企業中已知雜質明顯高于原研制劑，但均符合目前國內外藥典的規定；部分企業中最大單個未知雜質超過了0.2%，明顯高于原研制劑，原研制劑未超過0.10%。

同時結果顯示，《美國藥典》40版氨曲南有關物質測定方法(等度洗脫)不能有效測定已知雜質F，導致已知雜質F未檢出，也導致單個未知雜質檢出率低，方法有缺陷。故采用自擬的HPLC法測定。色譜柱為Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節pH至3.5)-乙腈(93∶7)混合溶液為流動相A，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節pH至3.5)-乙腈(60∶40)混合溶液為流動相B，流速為1.0 ml/min，梯度洗脫(0～20 min,100%A;20～40 min,100%B;40～45 min,100%B;45～55 min,100%A)；檢測波長為270 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為20 μl。

測定結果表明，A公司有1批氨曲南原料的最大單個未知雜質超過0.1%，測定結果為0.18%；B公司有2批新生產的氨曲南原料以及2批近效期氨曲南原料的最大單個未知雜質超過0.1%，測定結果分別為0.53%、0.50%、0.53%、0.47%，均超過《美國藥典》40版氨曲南單個未知雜質≤0.1%的規定。C公司有2批近效期注射用氨曲南最大單個未知雜質超過0.2%，測定結果分別為0.29%和0.21%；B廠有6批注射用氨曲南以及2批近效期注射用氨曲南的最大單個未知雜質超過0.2%，測定結果分別為0.28%、0.26%、0.25%、0.26%、0.25%、0.25%、0.53%、0.41%。

2.4.2 溶液的澄清度及倒置加速試驗 注射用氨曲南樣品倒置加速試驗條件：倒置于60 ℃恒溫條件下，靜置5 d后，按溶液的澄清度測定方法[4]用濁度儀測定。比較倒置前后溶液的澄清度變化情況。未經倒置加速的樣品溶液的澄清度均低于1號濁度標準液，均符合規定。60 ℃倒置加速5 d后，濁度有增加的趨勢，有2批超過了1號濁度標準液。倒置前樣品濁度為(1.22±0.39) NTU，倒置后樣品濁度為(1.72±0.58) NTU，倒置后樣品濁度明顯高于倒置前。同時將倒置加速前后樣品的濁度進行配對秩和檢驗，其結果有顯著性差異(P<0.05)。

2.4.3 殘留溶劑 采用氣相色譜(GC)法測定殘留溶劑。根據合成工藝，采用頂空法測定甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷5種溶劑，色譜柱為DB-624型毛細管色譜柱，檢測器類型為火焰離子化檢測器，檢測器溫度為230 ℃，進樣口溫度為200 ℃，載氣為氮氣，流速2.0 ml/min，程序升溫：初始溫度40 ℃，維持時間為10 min，升溫速率30 ℃，終止溫度200 ℃，維持時間為3 min；頂空進樣：平衡溫度為80 ℃，平衡時間為30 min，傳輸管溫度為110 ℃。

二甲亞砜采用直接進樣測定，色譜柱為DB-624型毛細管色譜柱，檢測器類型為火焰離子化檢測器，檢測器溫度為250 ℃，進樣口溫度200 ℃，載氣為氮氣，流速2.0 ml/min，程序升溫：初始溫度50 ℃，維持時間為5 min，升溫速率1為20 ℃，終止溫度180 ℃，維持時間為5 min，升溫速率2為30 ℃，終止溫度為230 ℃，維持時間為3 min。

結果A公司的氨曲南3批原料藥中均檢出丙酮和二甲亞砜殘留，B公司的注射用氨曲南中檢出了微量甲醇。

2.4.4 重金屬 采用電感耦合等離子體質譜法測定砷、鉛、汞、鎘、銅、鋇和鎳。樣品加硝酸后微波消解，用水定容。儀器選擇干擾較小的氦碰撞模式，等離子氣流量15.0 L/min，蠕動泵10 r/min，霧化室溫度2 ℃，輔助氣體和載氣流量均為0.8 L/min，氦氣流量5 ml/min，射頻功率1550 W，跳峰掃描100次，采樣深度8 mm，重復3次，積分時間0.20 s。樣品中砷、鉛、汞、鎘等1類危害元素[5]和銅、鋇、鎳等重金屬元素均低于各元素檢出限，均未檢出。

3 討 論

本次評價性抽驗采用法定檢驗結合探索性研究模式，對國產氨曲南及注射用氨曲南制劑從質量評價標準到質量的現狀、質量影響因素各方面進行了較全面的分析和評價。由法定檢驗可知，42批樣品按現行標準檢驗，合格率為100%，可以認為目前上市的氨曲南及注射用氨曲南的生產工藝較成熟，總體質量情況較好，質量標準基本可行。

探索性研究發現如下問題。國家藥品監督管理局頒布的“化學藥物雜質研究的技術指導原則”規定，原料藥最大日劑量不超過2 g時，雜質的鑒定限度為0.10%或1.0 mg(取最小值)，質控限度為0.15%或1.0 mg(取最小值)；制劑最大日劑量為10 mg～2 g時，雜質的鑒定限度為0.2%或2 mg(取最小值)，最大日劑量為100 mg～2 g時，雜質的質控限度為0.2%或2 mg(取最小值)。A、B和C公司部分樣品最大單個未知雜質測定結果均超過該指導原則的限度值，而且原研制劑最大單個未知雜質測定結果為0.08%。因此，建議氨曲南藥品生產企業改進合成以及生產工藝，降低未知雜質的含量，提高產品質量，與原研制劑的雜質水平保持一致或更優。

倒置加速后的注射用氨曲南樣品濁度明顯高于未倒置的樣品，說明在倒置加速過程中，主藥與膠塞發生相互作用造成了澄清度變差。因此，各生產企業應加強主藥與膠塞的相容性研究，使用覆膜膠塞或不與主藥發生相互作用的膠塞進行包裝，確保臨床使用藥品的安全性。

A公司在氨曲南的合成路線中使用了丙酮和二甲亞砜，且在其3批原料藥中均檢出丙酮和二甲亞砜殘留。這兩種溶劑屬于《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則規定需要控制的第三類溶劑，有一定的風險隱患。雖然3批樣品測得的殘留量遠低于規定限度，但企業還是應加強丙酮和二甲亞砜殘留量的研究和考察，建立定期監測制度，并進行長期數據收集，盡量避免溶劑殘留帶來的風險。B公司生產的注射用氨曲南中檢出了微量甲醇，提示企業應加強生產過程控制，查找原因，盡量避免不明有機溶劑的引入。