EV71型IgG、IgM和IgA抗體在手足口病診斷中的意義

賴芳， 溫歡雨， 梁雪燕

手足口病多發生于年齡<5歲的嬰幼兒，由多種不同的腸道病毒引起，臨床表現為口腔及四肢部位出現斑丘疹、皰疹等，可累及中樞神經和呼吸系統，導致神經源性肺水腫、無菌性腦膜炎、腦干腦炎等危重狀況，有傳染性，且致死率及致殘率均較高，為兒童的生命健康帶來巨大的威脅和挑戰[1-2]。腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是手足口病常見的致病病毒，易產生腦干腦炎等嚴重中樞神經系統并發癥，疾病進展快，病情重，幸存患兒常伴隨顯著的疾病后遺癥[3]。快速檢測病原菌，及早確診，進行對癥治療對手足口病患兒的預后非常重要[4]，本研究以2019年3月至2020年3月我院收治的手足口病患兒為研究對象，探究EV71型IgG、IgM和IgA抗體在手足口病診斷中的應用價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2019年3月至2020年3月在我院就診的EV71感染的手足口病患兒116例為研究對象，其中普通型67例和重癥49例。普通型患兒中男32例，女35例；年齡0.4～6歲，平均(2.37±1.68)歲。重癥患兒中男24例，女25例；年齡0.4～6歲，平均(2.66±1.93)歲。普通型患兒和重癥患兒在性別、年齡方面比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標準 參照《手足口病診療指南(2018年版)》中手足口病的診斷標準[5]。輕癥患兒僅發熱或在口腔或四肢部位出現皮疹，重癥患兒出現神經系統或心肺系統并發癥。

1.3 納入標準 (1)符合手足口病的診斷標準；(2)年齡0.4～6歲；(3)病程<5 d的急性期患兒；(4)本研究經醫院倫理委員會審批，患兒家屬知情同意。

1.4 排除標準 (1)近期應用免疫調節劑者；(2)合并結核等其他病原菌感染者；(3)并發惡性腫瘤者；(4)合并免疫系統功能異常者。

1.5 方法 取患兒的咽拭子或糞便樣本，加入500 μL HBSS溶液，混勻，8 000 r/min離心5 min(離心半徑10 cm)，取上清提取RNA，使用EV71 RNA檢測試劑盒(中山大學達安基因股份有限公司)，進行EV71的核酸檢測，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，判定標準為Ct值<35為陽性，Ct值≥35需重復檢測，無Ct值為陰性。清晨采集手足口病患兒空腹狀態下的靜脈血3 mL，3 000 r/min離心10 min(離心半徑10 cm)，取血清進行抗體檢測。使用EV71-IgM、EV71-IgG、EV71-IgA抗體檢測試劑盒(上海金標生物科技有限公司)進行檢測，檢測原理為膠體金免疫層析法，操作嚴格按照試劑說明書進行，判定標準為僅對照區出現紅線為陰性，僅檢測區出現紅線為結果無效，需重新檢測，對照區和檢測區均出現紅線為陽性。

1.6 統計學方法 使用SPSS 20.0軟件對數據進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 手足口病患兒EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢出情況 116例患兒中核酸檢測陽性率為72.41%(84/116)，EV71型IgM抗體陽性檢出率為68.10%(79/116)，IgG抗體陽性檢出率62.07%(72/116)，IgA抗體陽性檢出率60.34%(70/116)，與EV71核酸檢測陽性率比較，差異均無統計學意義(χ2=0.516，2.818，3.786，P>0.05)。

2.2 不同病情EV71感染手足口病患兒的EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢出情況 重癥手足口病患兒的EV71型IgM、IgG抗體陽性率高于普通型，差異均有統計學意義(P<0.01)；重癥和普通型手足口病患兒的EV71型IgA抗體陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同病情EV71感染手足口病患兒的EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢出情況[n(%)]

3 討論

手足口病是近年來高發的兒科急性傳染病，一年四季均可發病，4～7月發病率最高，多發于嬰幼兒，起病急，進展快，為患兒家庭帶來了沉重的經濟生活負擔，影響兒童的健康成長，成為各國日益關注的公共衛生問題[6-7]。EV71和柯薩奇病毒A16是手足口病的主要致病原，EV71發現于1969年，基因組為單股正鏈RNA分子，顆粒為球形結構，表面無突出和包膜，EV71感染在手足口病流行中占比較高，部分患兒并發中樞神經等系統的并發癥而死亡[8-9]。因此，對手足口病患兒進行早期診斷和對癥干預有重要意義。

目前手足口病感染的病原學診斷金標準為病毒分離培養，但該法操作要求高，耗時長且成本高，隨著分子生物學的發展，實時熒光定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)成為病毒診斷的重要方法[10]。患兒感染EV71病毒后，機體產生免疫應答，在抵抗病毒和自身恢復過程中發揮重要作用。IgM抗體是在病毒感染早期即產生的免疫球蛋白，恢復期血清濃度下降或消失，林威等[11]發現發病第1天患兒體內即可產生EV71型IgM抗體，發病5～8 d時血清濃度達峰值，在疾病的早期診斷中顯示出較好的效果。IgG抗體則是機體抗感染的重要部分，可中和有害代謝物、毒素和病原體，疾病恢復期IgG抗體的血清可達平時數倍；呼吸道分泌型的IgA抗體可預防局部感染，在防御外來病原體方面有重要作用[12]。

本研究對實時熒光定量PCR法和EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢測對手足口病患兒的檢出能力進行統計，結果顯示和實時熒光定量PCR相比，EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢測陽性率無顯著差異，提示核酸檢測和血清學檢測在檢測能力上相差不大。血清學檢測對實驗設備和操作技術要求較低，檢測所需時間短，成本低，逐漸在基層醫療機構推廣使用。重癥手足口病患兒的EV71型IgM抗體陽性檢出率高于普通型，提示EV71感染是引發重癥的危險因素，可根據EV71型IgM抗體檢測結果進行快速分疹，做好防護，進行對癥治療，改善患兒預后[13]。有研究報道EV71型IgG3抗體能夠介導抗體依賴性病毒感染增強作用，加重病情，而無中和病原體的活性[14]，本研究中重癥手足口病患兒的血清EV71型IgG抗體陽性檢出率高于普通型，可能與EV71型IgG介導的抗體依賴性增強效應參與疾病進程，導致更嚴重的臨床表現有關，提示可考慮研發中和抗體的EV71疫苗，以避免潛在的抗體依賴性增強效應現象。分泌型IgA抗體發揮預防局部感染的作用，有研究顯示和對照組相比，手足口病患兒的血清IgA抗體降低，降低機體呼吸道防御能力，更易發生口腔皮疹[15]。本研究中重癥患兒和輕癥患兒的EV71型IgA陽性檢出率無顯著性差異，提示臨床治療中可適當補充免疫球蛋白，增強患兒免疫能力。

綜上所述，EV71型IgM、IgG和IgA抗體檢測在手足口病診斷中有較好的診斷能力，重癥手足口病患兒的血清EV71型IgM和IgG抗體陽性檢出率高于輕癥患兒，進行血清學抗體檢測對于手足口病的分診和對癥治療有重要意義。