早期自然流產患者絨毛組織染色體異常分析*

陳 妍，禹東慧，寧 艷，王雙魁，田 英

(南方醫科大學附屬深圳婦幼保健院中醫科，廣東 深圳 518028)

早期自然流產是指12周前自然狀態非人為的妊娠終止，其發病率為15%～18%[1]，是孕產婦所面臨的巨大挑戰。多項研究表明，遺傳因素是導致自然流產的主要原因[2]。隨著輔助生育技術的發展，體外受精-胚胎移植(IVF-ET)是否增加妊娠早期流產的相關報道較少見。本研究采多重連接依賴探針擴增(MLPA)、低深度全基因組測序(CNV-seq)技術對IVF-ET術后患者及自然妊娠患者流產組織進行絨毛染色體異常分析，尋找其流產相關遺傳因素，為臨床提供理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2018年9月至2019年10月本院自然流產患者310例，其中IVF-ET助孕患者107例，自然妊娠患者203例。納入標準：(1)診斷為胚胎停育；(2)年齡小于或等于45歲，孕周小于或等于12周。排除標準：外傷、感染、發熱等因素所致流產。所有患者均簽署知情同意書。

1.2方法 收集患者一般資料，包括年齡、流產次數、孕周、受孕方式等。選取流產絨毛組織20～50 mg，用0.9%氯化鈉液清洗3～5次，采用MLPA、CNV-seq技術檢測絨毛組織DNA。

1.3統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件對數據進行分析。計數資料以率或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1絨毛組織染色體異常情況 310例自然流產患者中，絨毛組織染色體異常214例(69.03%)，其中數目異常200例(64.52%)，結構異常14例(4.52%)。絨毛組織染色體異常分布具體情況見表1。214例染色體非整倍性異常中，16號染色體異常發生頻率最高，其次是22號染色體、X染色體。見圖1。107例IVF-ET助孕患者中，染色體異常發生頻率為61.68%(66/107)，其中22號染色體異常占比最高[22.73%(15/66)],其次為16號染色體[16.67%(11/66)]。203例自然妊娠患者中,染色體異常發生頻率為72.91%(148/203)，其中16號染色體異常占比最高[23.65%(35/148)]，其次為22號染色體[11.49%(17/148)]。1例患者絨毛檢測結果顯示，20p13～20p11.23存在18.45 Mb重復，22q11.1～22q13存在26.8 Mb重復。

圖1 絨毛組織染色體異常發生頻率

表1 絨毛組織染色體異常分布情況(n=310)

2.2不同年齡段患者絨毛組織染色體異常情況 隨著年齡增加，絨毛組織染色體異常發生率隨之增加(P<0.05)。見表2。

表2 不同年齡段患者絨毛組織染色體異常情況

2.3不同自然流產次數患者絨毛組織染色體異常情況 隨著流產次數增加，絨毛組織染色體異常發生率隨之下降(P<0.05)。見表3。

表3 不同自然流產次數患者絨毛組織染色體異常情況

2.4不同受孕方式患者絨毛組織染色體異常情況 自然妊娠流產患者絨毛染色體異常發生率高于IVF-ET助孕患者，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同受孕方式患者絨毛組織染色體異常情況

3 討 論

自然流產病因復雜，包括遺傳因素、免疫失衡、內分泌異常、血栓前狀態、子宮結構異常、生殖道感染、不良環境和心理等[2]，其中遺傳因素占主要比例[3]。約半數的早期自然流產由染色體異常引起[4]，多數是染色體數目異常，少數為結構異常[5]。絨毛組織染色體檢測有助于了解早期自然流產病因，為患者再生育提供優生、優育科學指導。

本研究結果顯示，310例自然流產患者中，絨毛組織染色體異常214例(69.03%)，稍高于其他文獻[6-8]。考慮與樣本年齡相關。產前診斷中的80%～90%染色體數目異常常發生于13、18、21號染色體及性染色體[9]。本研究結果顯示，16號染色體異常發生頻率最高，其次是22號染色體、X染色體、15號染色體、21號染色體，其中包括胎兒有可能存活至孕中期甚至出生的染色體(X、21號染色體三體)，以及胎兒常規無法活產的染色體(16、22、15號染色體三體)[10]。1、5、19號染色體異常在本研究中均只檢測出1次，可能是這幾例罕見的染色體核型數目異常胚胎在著床時期已流產，甚至于無法著床。

本研究結果顯示，隨著年齡增加，絨毛組織染色體異常發生率隨之增加，與其他文獻一致[11]。隨著流產次數的增加，胎兒染色體異常檢出率呈下降趨勢[12]。本研究結果顯示，隨著流產次數增加，絨毛組織染色體異常發生率隨之下降，與其他文獻報道一致[13]。每次妊娠胚胎都是獨立個體，如果反復檢測絨毛染色體均出現復雜嵌合、微缺失等結構變化，需警惕父母雙方是否存在平衡易位等自身染色體異常。本研究結果顯示，自然妊娠流產患者絨毛染色體異常發生率高于IVF-ET助孕患者，與其他文獻報道不一致[14]。考慮IVF-ET助孕患者因本身存在不孕因素，如內分泌、免疫異常或生殖器器質性病變等，均可能會增加流產風險。因此，IVF-ET術后胚胎停育患者染色體異常發生率較自然妊娠者少。目前尚未明確促排卵治療、體外培養等對胚胎染色體是否存在的潛在風險[15]，需進一步大樣本研究。

本研究中，1例患者(已生育1個正常女嬰，自然流產3次，既往2次均未查絨毛染色體)流產(即第3次流產)絨毛檢測結果顯示，20p13～20p11.23存在18.45 Mb重復，22q11.1～22q13存在26.8 Mb重復。提示20號染色體斷臂存在18.45 Mb重復，該片段重復與20p部分三體綜合征有關[16]；22號染色體長臂存在27.8 Mb重復，該片段重復與22q部分三體綜合征有關[17]。追查夫妻雙方及孩子的染色體發現，男方及女兒染色體核型未見異常，女方染色體核型為46，XX，t(20；22)(p11.2q13)。提示平衡易位攜帶(20、22號染色體)。遺傳咨詢貫穿于整個流產過程中[18]，檢出染色體異常后，建議進行遺傳咨詢指導再次妊娠。對于絨毛染色體結構異常患者，有必要追蹤夫妻雙方染色體，并指導備孕。

綜上所述，胚胎染色體異常是導致流產的主要因素，與年齡、既往自然流產次數、受孕方式有一定相關性。對于反復因胚胎因素導致流產患者，建議行植入前遺傳學篩查。