RPA1基因多態性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的相關性

沙金平 薛 萌 謝媛媛

結直腸癌又稱大腸癌，屬于人體最常見的惡性腫瘤之一，晚期結直腸癌的治療以化療為主，鉑類藥物是其常用化療藥物[1-2]。研究表明，RPA1基因與鉑類等化療藥物耐藥性的產生息息相關，其基因多態性與多種腫瘤化療后臨床療效與總體生存期密切相關[3-4]。在上述研究背景下，本研究探討了RPA1基因多態性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的相關性，為臨床制定結直腸癌患者個性化治療方案提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2015年8月至2017年8月本院的晚期結直腸癌患者92例作為研究對象，納入標準：均符合《臨床腫瘤內科手冊》中晚期結直腸癌的病理學診斷標準[5]。排除標準：合并除結直腸癌外其他惡性腫瘤者；對本研究所用藥物過敏及不耐受者；非首次治療者；適宜手術治療者；臨床病理資料不全者。本研究經本院醫學倫理委員會會議表決通過。

1.2 方法

基因分型：在給予鉑類藥物化療前采集所有患者外周靜脈血5 ml，置于抗凝管內靜置1.5 h，用離心機(德國Hettich，ROTOFIX32A)離心10 min，轉速3 000 r/min，用移液槍抽取上清液置入微型離心管中，-80 ℃保存備用。取出備用血清，用水浴鍋預熱5 min，溫度37 ℃，預熱畢取血清200 μl，用DNA提取試劑盒提取患者外周血清總DNA，用基因分型試劑盒、熒光定量試劑盒、PCR儀(美國ABI，QuantStudio3)對RPA1基因進行標記、擴增，用SDS軟件對擴增后產物進行基因分型。相關試劑盒操作流程均嚴格參照試劑和儀器說明書。藥物治療：對所有患者給予奧沙利鉑注射液靜脈滴注2 h，每次劑量130 mg/m2，每3周給藥1次。整個療程為3個月。分組：根據RPA1基因型的不同將患者分為CC組、CT組、TT組。

1.3 觀察指標

(1)觀察所有患者RPA1基因分型結果。(2)療程結束后，參照《RECIST療效評價標準》[6]，對所有患者進行療效評定，以腫瘤病灶消失視為完全緩解(complete remission，CR)；以腫瘤病灶最大直徑縮小30%以上視為部分緩解(partial remission，PR)；以腫瘤最大直徑縮小30%以下或增大20%以下視為病情穩定(stable Disease，SD)；以腫瘤最大直徑增大20%以上視為病情惡化(progression disease，PD)。總有效=CR+PR+SD。比較CC組、CT組、TT組之間的療效差異。(3)將CR、PR、SD患者劃分為有效組，將PD患者劃分為無效組，比較2組一般資料差異，并對相關影響因素進行Logistic回歸分析，觀察晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的獨立影響因素。(4)對患者進行為期2年的門診、電話隨訪，第1年前6個月每半月1次，后6個月每月1次，第2年每2個月1次，記錄CC+CT組、TT組的總生存期(overall survival，OS)情況。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 RPA1基因分型結果

本研究92例晚期結直腸癌患者中，RPA1基因116為密碼子中第二位堿基共存在3種等位基因型，分別為CC型(n=38)、CT型(n=28)、TT型(n=26)，基因出現頻率分別為41.31%、30.43%、28.26%。

2.2 CC組、CT組、TT組治療后臨床療效比較

CC組、CT組、TT組總體臨床療效與治療總有效率比較，差異均具有統計學意義(P<0.05)；組間比較，CC組、CT組治療總有效率明顯高于TT組(P<0.05)，CC組與CT組治療總有效率無明顯差異(χ2=0.001，P>0.05)。見表1。

表1 CC組、CT組、TT組治療后臨床療效比較(例，%)

2.3 有效組與無效組一般資料比較

單因素分析結果顯示，有效組與無效組在有無癌栓、RPA1基因分型上差異明顯(P<0.05)。見表2。

表2 有效組與無效組一般資料比較

2.4 影響化療療效的Logistic多因素回歸分析

將晚期結直腸癌患者化療療效作為因變量，將單因素分析中差異具有統計學意義的因素(有無癌栓、RPA1基因分型)作為自變量，并進行賦值，晚期結直腸癌患者化療療效(有效=0，無效=1)，有無癌栓(無=0，有=1)、RPA1基因分型(CC型或CT型=0，TT型=1)，將上述數據納入Logistic回歸模型，結果顯示，RPA1基因分型是晚期結直腸癌患者鉑類藥物臨床療效的獨立影響因素(OR=1.570，P<0.05)。見表3。

表3 晚期結直腸癌患者化療療效的Logistic多因素回歸分析

2.5 不同RPA1基因型患者用藥后的生存分析

CC+CT組中位OS為18個月，TT組中位OS為6個月；CC+CT組2年內生存率92.42%，TT組2年內生存率為57.69%，差異具有統計學意義(χ2=32.212，P<0.05)。生存曲線分析結果顯示，CC+CT組2年內生存情況明顯優于TT組，經Log-rank檢驗，差異具有統計學意義(χ2=33.590，P<0.05)。見圖1。

圖1 不同RPA1基因型患者用藥后的生存曲線

3 討論

結直腸癌早期多無明顯癥狀，晚期可表現為大便性狀改變、腹痛、腹脹、發熱、貧血、消瘦、腹部包塊、腸梗阻等，可因腫瘤轉移而累及其他器官，導致多器官功能障礙，嚴重威脅患者生命健康[7]。鉑類藥物是臨床用于治療晚期結直腸癌的常用化療藥物，但其臨床療效具有個體差異性，其差異形成原因尚且不明[8]。據相關文獻報道，RPA1基因可參與多種惡性腫瘤疾病的發生發展，與多種惡性腫瘤患者化療后的無進展生存率相關[9]。現為探討RPA1基因多態性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的相關性，特做此研究。

本研究結果顯示，CC組、CT組、TT組總體臨床療效與治療總有效率比較，差異具有統計學意義；兩組間比較，CC組、CT組治療總有效率明顯高于TT組，而CC組與CT組治療總有效率無明顯差異，提示整體上，不同RPA1基因型的晚期結直腸癌患者用鉑類藥物治療的效果存在明顯差異，其中CC型、CT型患者臨床療效要優于TT型患者。究其原因，鉑類化療藥物的藥理機制主要是通過產生水化衍生物靶向作用于DNA，與DNA雙鏈共價結合，易形成鏈內或鏈間的相互交聯，從而干擾腫瘤細胞DNA結構的正常復制[10]。研究表明，RPA1基因可合成一種具有高度保守蛋白序列的RPA1蛋白，此蛋白可與啟動子上游含大量GATA序列的順式作用元件相結合，能抑制腫瘤細胞惡性增殖所需蛋白的表達，同時可促進鉑類藥物與腫瘤細胞DNA的靶向結合，與鉑類藥物發揮協同抑癌作用[11]。而研究表明，CC型、CT型RPA1基因均可正常合成RPA1蛋白，TT型RPA1基因由于密碼子發生無義突變，RPA1蛋白表達缺失，因此抑癌作用明顯弱于CC型、CT型[12]。

本研究Logistic多因素回歸分析結果顯示，RPA1基因分型是晚期結直腸癌患者鉑類藥物臨床療效的獨立影響因素(OR=1.570，P<0.05)；生存曲線分析結果顯示，CC+CT組2年內生存情況明顯優于TT組，提示RPA1基因多態性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的密切相關，TT型RPA1基因是晚期結直腸癌患者鉑類藥物治療無效的獨立危險因素。探究其機制，研究表明，DNA修復功能是人體保持基因穩定性的重要保障，鉑類化療藥物通過破壞腫瘤細胞DNA正常雙鏈結構，抑制其DNA復制過程，從而發揮抑癌效應，因此DNA修復功能的個體化差異是晚期結直腸癌患者用鉑類藥物治療后出現療效差異的關鍵因素[13-14]。相關研究表明，RPA1基因CC型、CT型患者由于10號外顯子密碼子發生突變，導致氨基酸編碼序列變化，從而影響DNA修復功能，導致其對鉑類藥物的耐藥性要低于RPA1基因TT型患者[15]，因此RPA1基因CC型、CT型晚期結直腸癌患者鉑類藥物的臨床療效優于RPA1基因TT型患者。

綜上所述，TT型RPA1基因是晚期結直腸癌患者鉑類藥物治療無效的獨立危險因素；RPA1基因多態性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效密切相關，有望成為預測臨床療效的新指標。