2018年銅川地區兒童嗜血桿菌耐藥監測分析

任亞文，張甲龍，賀 蕾，張碧瑩，張 娜

銅川市人民醫院檢驗科，陜西銅川 727000

嗜血桿菌是兒童呼吸道感染的常見病原菌，其中流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌居多。流感嗜血桿菌是一種機會致病菌，可引起多種感染，包括中耳炎、會厭炎、鼻竇炎和肺炎[1-2]。流感嗜血桿菌的傳播主要通過直接接觸攜帶者的呼吸道飛沫。新生兒可能會因吸入羊水或接觸含有活菌的生殖道分泌物而感染[3-4]。如果未能及時有效治療，流感嗜血桿菌感染可能會危及生命，例如引起菌血癥和腦膜炎[5]。副流感嗜血桿菌為呼吸道正常菌群，但是人體免疫力下降時可能引起急慢性呼吸道感染或其他疾病。青霉素類、頭孢菌素類及大環內酯類抗菌藥物是治療兒童呼吸道感染的主要經驗性用藥，近年來，隨著臨床抗菌藥物廣泛應用，嗜血桿菌的耐藥菌株不斷增多，給臨床治療帶來很大困難[6-7]。本研究旨在收集2018年臨床住院患兒中分離的114株嗜血桿菌進行調查研究，以期為臨床合理應用抗菌藥物提供參考依據。

1 材料與方法

1.1菌株來源 臨床住院患兒(0～14歲)送檢的合格痰液樣本，對其進行涂片鏡檢，每個低倍鏡視野內鱗狀上皮細胞少于10個，白細胞多于25個，視為合格痰液樣本。選取114株嗜血桿菌分離自2018年1月1日至12月31日兒科住院患兒的合格痰液樣本。

1.2儀器與試劑

1.2.1培養基來源 嗜血桿菌巧克力平皿(用于分離)購自鄭州安圖公司，藥敏HTM培養基購自溫州康泰公司。

1.2.2鑒定和藥敏紙片 鑒定用Vitek2 Compact及配套NH(VITEK 2 NH Test Card,NH)奈瑟菌/嗜血桿菌鑒定卡。用于測定β-內酰胺酶檢測的頭孢硝噻吩試劑和藥敏試驗選用的12種抗菌藥物紙片：氨芐西林(10 μg)、阿莫西林/克拉維酸(20/10 μg)、阿奇霉素(15 μg)、頭孢曲松(30 μg)、亞胺培南(10 μg)、哌拉西林/他唑巴坦(100/10 μg)、美羅培南(10 μg)、頭孢呋辛(30 μg)、復方磺胺甲噁唑(25 μg)、頭孢噻肟(30 μg)、頭孢他啶(30 μg)、左氧氟沙星(5 μg)購自溫州康泰公司。血清學分型所用生化管購自溫州康泰公司。

1.3方法

1.3.1細菌培養及鑒定 按照《全國臨床檢驗操作規程(4版)》[8]進行操作，將各種以劃線分離法接種于嗜血桿菌巧克力平皿，孵箱(5%CO2，35 ℃)培養18～24 h。自嗜血桿菌巧克力平皿挑取呈無色、透明、表面光滑、邊緣整齊、似露滴狀的濕潤可疑菌落，進行革蘭染色，分純后菌落配3.0麥氏濁度菌液上NH卡鑒定，根據鑒定結果選取流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌，并接種蔗糖、木糖和甘露糖生化管進行血清學分型，35 ℃孵育24 h。

1.3.2藥敏試驗 根據美國臨床和實驗室標準化協會《抗微生物藥物敏感試驗執行標準》進行藥敏試驗和結果判定，溫州康泰公司的標準菌株ATCC49247為質控菌株，使用紙片擴散法對12種抗菌藥物進行藥敏試驗。β-內酰胺酶測定用頭孢硝噻吩紙片[9]，根據試劑說明書進行檢測，并判斷陰陽性。10 min內變紅表示β-內酰胺酶陽性，不變色表示其為陰性。β-內酰胺酶測定陽性質控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC29213,陰性質控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC25923。

1.3.3嗜血桿菌生物學分型結果判斷標準 流感嗜血桿菌根據吲哚、脲酶試驗及鳥氨酸脫羧酶試驗，分為8個生物分型，見表1。

表1 嗜血桿菌生物學分型結果判斷標準

1.4統計學處理 采用WHONET 5.6分別統計流感與副流感嗜血桿菌菌株耐藥性情況，采用SPSS22.0軟件統計分析不同年齡段患者之間耐藥率，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1不同年齡段患者菌株分離情況 本地區流感嗜血桿菌、副流感嗜血桿菌、埃及嗜血桿菌分離情況見表2。

表2 不同年齡段患者菌株分離情況(n)

2.2菌株的生物學分型 銅川地區流感嗜血桿菌生物學流行株主要為Ⅱ型(32.00%)和Ⅲ型(30.00%)，副流感嗜血桿菌生物學流行株以Ⅲ型(38.46%)為主。見表3。

表3 嗜血桿菌生物學分型(%)

2.3藥敏情況比較 流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌對左氧氟沙星、美羅培南、亞胺培南和哌拉西林/他唑巴坦這4種抗菌藥物敏感率均較高，未檢測出耐藥菌株。流感嗜血桿菌與副流感嗜血桿菌對氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢呋辛、阿奇霉素和復方磺胺甲噁唑敏感率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。經過頭孢硝噻吩紙片試驗，β-內酰胺酶陽株78株，占比68.42%，陰性36株中，氨芐西林耐藥6株，占比為16.67%。

表4 流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌對抗菌藥物的耐藥情況(%)

續表4 流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌對抗菌藥物的耐藥情況(%)

3 討 論

本研究結果顯示，嗜血桿菌感染主要為0～<1歲患兒，這與孫曹瑋[10]和文獻[11]報道結果相符。流感嗜血桿菌是引起嬰幼兒呼吸系統感染的常見病原菌之一，并在健康嬰幼兒鼻咽部具有較高的定植率。免疫系統發育尚未健全，是嬰幼兒流感嗜血桿菌感染率高的原因之一[12]。

本研究發現,2018年銅川地區流感嗜血桿菌菌株生物學分型以Ⅱ型(32.00%)和Ⅲ型(30.00%)為主，這與胡俊等[13]報道結果不同，提示其可能存在地區間差異性。副流感嗜血桿菌株生物學分型以Ⅲ型為主，這與文獻[11]報道結果不同。這提示不同地區之間嗜血桿菌流行株不同。迄今為止,流感嗜血桿菌生物學分型與其毒力和耐藥的關系尚不十分清楚，尚待進一步研究。氨芐西林作為治療嗜血桿菌感染的首選藥物，隨著使用的增加，該菌對其的耐藥率也逐年上升[14]。本研究中流感嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥率為68.06%，低于溫曉崢等[15]報道結果，但明顯高于孫燕等[16]報道結果。副流感嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥率為73.17%。

本研究發現，嗜血桿菌對氨芐西林耐藥率和β-內酰胺酶陽性率均超過50.00%，說明本院嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥機制主要以產β-內酰胺酶為主。另外，本研究中114株嗜血桿菌中β-內酰胺酶陰性嗜血桿菌對氨芐西林耐藥占16.67%，高于秦惠宏等[17]報道結果，可能是青霉素結合蛋白結構發生改變，導致其對氨芐西林的親和力下降及外膜蛋白發生改變[18]。

綜上所述，目前產β-內酰胺酶的嗜血桿菌分離株占比較高，表明氨芐西林已不能作為臨床一線藥物，而且兒童感染的嗜血桿菌對常用抗菌藥物的耐藥性已十分嚴重。因此，對嗜血桿菌的耐藥性進行監測從而指導臨床合理使用抗菌藥物具有重要意義。但是，本次研究樣本量偏小，來源單一，且抗菌藥物與菌種的匹配度亦有待完善，故上述結論尚有待大樣本、多中心的前瞻性研究來予以驗證。