氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分析冠心膏中揮發(fā)性成分

李海燕，楊 元，李桂本，康 建

（1. 河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州 450000；2. 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

冠心膏由丹參、川芎、當(dāng)歸、紅花、沒(méi)藥、丁香、乳香、降香、樟腦、二甲苯麝香、薄荷腦、鹽酸苯海拉明、冰片等組成，具有活血化瘀、行氣止痛的功效，用于冠心病、心絞痛的預(yù)防和治療。冠心膏收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十九冊(cè)[1]，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀及檢查項(xiàng)，缺少控制處方藥味質(zhì)量的有效檢驗(yàn)方法。處方中樟腦、二甲苯麝香、薄荷腦、冰片等均是揮發(fā)性成分，川芎[2]、當(dāng)歸[3]、乳香[4]、丁香[5]、降香[6]等藥味也含有大量揮發(fā)性成分，因此制定了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定冠心膏中揮發(fā)性成分的方法[7-8]，以更全面、更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量。本文采用揮發(fā)油提取法、超聲提取法分別制備供試品溶液，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）對(duì)上述兩種供試品溶液的總離子流圖進(jìn)行分析和處理，鑒定比較兩種提取方法所得揮發(fā)性成分，此法可較好地控制處方藥味的投料情況，并為冠心膏氣相色譜指紋圖譜的研究及其質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 儀器與材料

Thermo Fisher TSQ 8000EVD-NO VPI 三重四級(jí)桿氣質(zhì)聯(lián)用儀；ThermoTG-5MS石英毛細(xì)管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）。冠心膏由河南羚銳制藥股份有限公司生產(chǎn)（批號(hào)190101，190102，190103）；實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 氣相色譜條件

Thermo TG-5MS石英毛細(xì)管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）；載氣為高純度氦氣；柱流量1.0 ml/min；分流比1:1；進(jìn)樣口溫度250 ℃；程序升溫：初始溫度60 ℃（1 min），10 ℃/min升至100 ℃，保持30 min，7 ℃/min的升溫速率升至150 ℃，保持20 min，2 ℃/min的升溫速率升至190 ℃，保持3 min，再以20 ℃/min的升溫速率升至230 ℃，保持5 min。

2.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源為EI源；電離電壓70 eV；離子源溫度300 ℃；MS傳輸線溫度為280 ℃；掃描范圍m/z 50～500。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 揮發(fā)油提取法 取冠心膏樣品210 cm2，剪成窄條，除去蓋襯，置250 ml燒瓶，加水100 ml，按《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2204“揮發(fā)油測(cè)定法”項(xiàng)下甲法，自測(cè)定器上端加水至充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，再加甲苯2 ml，加熱回流提取2 h，放冷，取甲苯液，加乙酸乙酯2 ml稀釋，置鋪有無(wú)水硫酸鈉的濾紙濾過(guò)，濾液置入50 ml量瓶，以適量乙酸乙酯分次洗滌容器及濾器，洗滌液并入同一量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得[9]。

2.3.2 超聲提取法 取冠心膏樣品210 cm2，加乙酸乙酯50 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，吸取濾液5 ml，置入25 ml量瓶，加乙酸乙酯稀釋至刻度，即得。

2.4 測(cè)定法

取2.3項(xiàng)下供試品溶液各1 μl，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。

2.5 測(cè)定結(jié)果

樣品經(jīng)GC-MS法分析得總離子流圖（TIC），見(jiàn)圖1。所得譜圖數(shù)據(jù)經(jīng)NIST MS Search 2.2譜圖庫(kù)自動(dòng)檢索，與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照、人工譜圖解析等方法確認(rèn)各化合物，并采用面積歸一化法確定各組分的相對(duì)百分含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 GC-MS法測(cè)定冠心膏揮發(fā)性化學(xué)成分

圖1 冠心膏揮發(fā)性成分的總離子流圖

揮發(fā)油提取法所得的冠心膏樣品中共分離出34個(gè)峰，鑒定出19個(gè)成分，占總揮發(fā)性成分相對(duì)含量的93.4 %，鑒定的化合物主要有萜類(lèi)、酯類(lèi)、烷烴類(lèi)等，相對(duì)含量較高的成分分別為樟腦（20.75 %）、龍腦（21.81 %）、薄荷腦（18.07 %）、異龍腦（12.54 %），根據(jù)相關(guān)參考文獻(xiàn)報(bào)道，處方中的主要藥味樟腦、冰片、薄荷腦、二甲苯麝香、鹽酸苯海拉明，及當(dāng)歸、川芎揮發(fā)油中含有的川芎內(nèi)酯、蒿本內(nèi)酯[10-11]，丁香、降香揮發(fā)油中的丁香酚[12-13]，丹參、丁香揮發(fā)油中的石竹烯[14]，乳香揮發(fā)油中的乙酸辛酯、α-衣蘭油烯[15]，均可在冠心膏揮發(fā)油提取樣品總離子流圖中顯示出來(lái)；冠心膏超聲提取法所得的樣品中共分離出27個(gè)峰，鑒定出16個(gè)成分，占總揮發(fā)性成分相對(duì)含量的29.2 %，鑒定的化合物主要有萜類(lèi)、酯類(lèi)等，相對(duì)含量較高的成分分別為長(zhǎng)葉烯（9.14 %）、二甲苯麝香（7.24 %）、苯海拉明（3.58 %）。

2.6 對(duì)照品比對(duì)

2.6.1 對(duì)照品溶液的配制 分別稱取樟腦、龍腦、異龍腦、薄荷腦對(duì)照品各1 mg置入100 ml量瓶，制成混合對(duì)照品溶液。

2.6.2 供試品溶液的配制 取同一批冠心膏樣品照“2.3”項(xiàng)下方法分別制備5份供試品溶液。

2.6.3 測(cè)定方法 取對(duì)照品溶液與供試品溶液按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)樣。

2.6.4 測(cè)定結(jié)果 按“2.3.1”項(xiàng)下方法提取的5份供試品溶液中均呈現(xiàn)與樟腦、龍腦、異龍腦、薄荷腦對(duì)照品色譜保留時(shí)間一致的色譜峰；按“2.3.2”項(xiàng)下方法提取的5份供試品溶液中均呈現(xiàn)與樟腦、龍腦、薄荷腦對(duì)照品色譜保留時(shí)間一致的色譜峰。

3 討論

3.1 曾分別采用石油醚、甲苯接收液和無(wú)接收液直接提取揮發(fā)油的方法制備供試品，結(jié)果所得的3種揮發(fā)油樣品總離子流圖差別較大，以甲苯為接收液提取揮發(fā)油的總離子流圖信息量較大，提取的揮發(fā)性成分最多，見(jiàn)圖2。

圖2 3種方法提取揮發(fā)油樣品的總離子流圖

3.2 使用Thermo TG-5MS石英毛細(xì)管柱、HP DBWAX毛細(xì)管柱測(cè)定供試品溶液，Thermo TG-5MS石英毛細(xì)管柱比HP DB-WAX毛細(xì)管柱所得的總離子流圖分離度更好。

3.3 本實(shí)驗(yàn)分析比較了揮發(fā)油提取和超聲提取得到的揮發(fā)性成分，結(jié)果表明，二者共有成分15種，揮發(fā)油提取法特有成分4種，超聲提取法特有成分1種。樟腦、龍腦、薄荷腦等主要成分占揮發(fā)性成分相對(duì)含量的百分比遠(yuǎn)低于揮發(fā)油提取樣品，表明揮發(fā)油提取法能更有效、更完全提取樣品中揮發(fā)性成分。此結(jié)果對(duì)冠心膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的控制、揮發(fā)性成分的研究提供了科學(xué)依據(jù)。