向日葵花粉對小鼠高尿酸血癥作用的實驗研究

徐勇軍，吳 偉，黃春敏

（北京泓九生命科學研究院有限公司，北京 101300）

高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA）是由于體內嘌呤物質的新陳代謝異常，導致尿酸的合成量增加或尿酸排泄減少所致[1]。大量研究證實，長期的高尿酸癥狀會導致腎機能障礙、氧化應激和炎癥反應，與動脈粥樣硬化、腎結石、胰島素抵抗、高脂血癥、高血壓等疾病的發生、發展密切相關[2-5]。高尿酸血癥的發病率日益增高，已成為威脅人類健康的重要疾病之一。針對高尿酸血癥的病因[6]，降低尿酸生成或增加腎臟中尿酸排泄是治療方向。

向日葵是重要的油料作物，種植面積廣泛，其種子用作榨油，去籽實后的花盤含有豐富的活性物質，如多糖、綠原酸、黃酮類物質等。多項藥理活性研究表明，向日葵花盤提取物在治療和預防痛風方面有較好效果[7]。但目前向日葵花盤的食用安全性及遠期副作用還未知，未能廣泛應用。

向日葵花粉已被列為新資源食品，用于食品、化妝品等多個領域。花粉含有脂肪酸、維生素、氨基酸、黃酮類等物質，有抑制前列腺疾病、降低膽固醇、增強免疫力等作用[8-9]，但目前尚未發現其關于治療高尿酸血癥和痛風的研究分析。本研究將向日葵花粉作用于高尿酸血癥模型小鼠，探討其對高尿酸血癥的作用效果，以氧嗪酸鉀（oxygen oxazine acid potassium，OXO）和酵母膏聯合造模建立高尿酸血癥小鼠模型，研究向日葵花粉對高尿酸血癥小鼠的體重及其變化量的影響和對小鼠尿酸水平的影響，以期為向日葵花粉及相關產品的進一步開發與應用提供參考。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

TG1650-WS臺式高速離心機（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）；BSA124S-CW分析天平（成都一科儀器設備有限公司）。

1.2 實驗動物與飼養環境

ICR小鼠（體重18±2g，雄性，56只），浙江省醫學科學院實驗動物中心[許可證號：SCXK（浙）2019-0002]，動物飼養在特定的無特殊病原體（SPF）的條件下，溫度20～26 ℃，濕度40 %～70 %，明暗交替時間12 h/12 h，普通飼養。

1.3 藥品與試劑

向日葵花粉，棕黃色固體粉末（山西原生肽科技有限公司）。

酵母膏（上海碧云天生物技術有限公司）；氧嗪酸鉀（上海源葉生物科技有限公司）；尿酸（UA）檢測試劑盒、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）檢測試劑盒、黃嘌呤氧化酶測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

2 方法

2.1 劑量分組及給藥

48只小鼠隨機分為空白對照組、模型組、向日葵花粉0.25，0.50，1.00，2.00 g/kg 4個劑量組，每組8只。各組小鼠灌胃給予相應濃度的藥物溶液，空白和模型組給予等容積的純水。每天給藥1次，連續給藥42 d。

2.2 高尿酸血癥小鼠模型的建立

各組實驗動物適應性給予樣品14 d后，除空白對照組外，其余實驗動物每天灌胃給予酵母膏15 g/kg，連續給予28 d；實驗結束前10 d，模型組及各劑量組小鼠給予酵母膏的同時，腹腔注射給予氧嗪酸鉀300 mg/kg。

2.3 指標檢測

實驗期間每天觀察大鼠精神狀態、攝食情況并每周稱量一次體重。實驗最后一次給予樣品后，乙醚麻醉小鼠后于內眼眥取血，4 ℃下靜置過夜，4000 r/min離心10 min取血清，保存于-80 ℃條件下待測。取小鼠肝臟，稱取約0.1 g組織，加入1 ml試劑盒提取液，進行冰浴勻漿，4 ℃下8000 g離心10 min，取上清保存于-80 ℃下待測。用前4 ℃解凍，用全自動生化分析儀檢測出血清中尿酸、肌酐、尿素氮的含量和黃嘌呤氧化酶（XOD）活性。

2.4 數據統計方法

3 結果

3.1 向日葵花粉對高尿酸血癥小鼠體重及變化量的影響

向日葵花粉對高尿酸血癥小鼠體重的影響結果見表1。由表1可見，空白組動物的體重逐漸增加，模型組受造模藥物的影響，體重增加相對緩慢。向日葵花粉的各個劑量組與模型對照組相比較，動物體重未出現大范圍的減重現象，而是增加到一定水平后趨于穩定，只有0.5 g/kg劑量組動物體重在第3周時比模型對照組顯著增加，但是增加幅度與空白對照組相近。向日葵花粉不影響實驗動物體重的變化。

表1 向日葵花粉對高尿酸血癥小鼠體重的影響（/g，±s，n=8）

表1 向日葵花粉對高尿酸血癥小鼠體重的影響（/g，±s，n=8）

注：#P< 0.05 vs 空白對照組，##P<0.01 vs 空白對照組；*P<0.05 vs模型對照組，**P<0.01 vs 模型對照組。

組別 劑量/g·kg-1 初始體重 1周 2周 3周 4周 5周 6周空白對照組 - 23.2±1.4 33.4±2.6 35.6±3.1 35.6±3.1 33.8±5.4 34.5±4.5 36.3±3.4模型對照組 - 22.6±0.6 29.5±1.0 32.0±1.2# 32.9±1.0# 33.0±0.9 33.6±1.0 34.3±1.1劑量組 0.25 23.1±1.0 291±1.5 31.4±1.8 32.4±1.6 32.8±1.4 34.0±1.2 34.2±1.5 0. 50 22.8±1.1 31.7±3.4 33.7±4.0 35.8±3.4* 35.9±4.0 35.7±2.9 33.7±2.7 1.00 23.1±1.3 26.9±8.9 32.6±2.5 33.9±2.4 33.8±2.3 34.1±2.5 33.9±3.0 2.00 23.1±1.4 29.9±2.5 32.7±2.9 33.8±2.9 34.0±3.4 35.1±3.2 36.4±2.3

3.2 向日葵花粉對小鼠血清尿酸含量的影響

結果表明，腹腔注射氧嗪酸鉀并結合酵母膏灌胃能升高小鼠血尿酸，成功建立高尿酸血癥模型[10]。由圖1可見，與空白對照組相比，模型組的尿酸含量明顯偏高，且與空白對照組相比有顯著性差異（P<0.01）。向日葵花粉1.00，2.00 g/kg劑量組血清尿酸含量與模型組相比分別顯著減少60 %和64 %（P<0.01），0.25 g/kg劑量組小鼠血清尿酸含量與模型組差異無統計學意義，但有降低的趨勢。

圖1 向日葵花粉對高尿酸血癥小鼠血清中尿酸含量的影響

3.3 向日葵花粉對小鼠血清肌酐和尿素氮的影響

由圖2可見，同空白組比較，模型組中尿素氮、肌酐的含量極顯著升高（P<0.01），表明持續高尿酸可引起腎臟損傷。與模型組比較，向日葵花粉劑量組中肌酐和尿素氮極顯著下降（P<0.01），表明向日葵花粉能保護腎功能。與吳婷等[11]研究結果一致。

圖2 向日葵花粉對高尿酸血癥小鼠血清肌酐和尿素氮含量的影響

3.4 向日葵花粉對小鼠黃嘌呤氧化酶活性的影響

由圖3可見，給予小鼠灌胃氧嗪酸鉀和酵母膏后，模型組小鼠血清中黃嘌呤氧化酶的活性與正常組相比顯著增高33 %（P<0.01）。向日葵花粉0.50，1.00，2.00 g/kg劑量組小鼠血清中黃嘌呤氧化酶活性與模型組比較分別顯著降低21 %，29 %和21 %（P<0.05），0.25 g/kg劑量組血清與模型組比較無顯著性差異，但有降低的趨勢。

圖3 向日葵花粉對高尿酸血癥小鼠血清黃嘌呤氧化酶活性的影響

4 討論

向日葵花粉含有多種氨基酸、不飽和脂肪酸、黃酮類化合物和多糖等活性物質，維生素E、A、C含量均甚豐富[12-13]。藥理動物模型實驗研究發現，向日葵花粉有多種生理功能，如抑制前列腺疾病、降低膽固醇、增強免疫細胞活性等功效。可見，向日葵花粉有廣闊的研究和應用前景。

本實驗主要觀察向日葵花粉在高尿酸血癥方面的作用效果。實驗采用氧嗪酸鉀+酵母膏結合灌胃小鼠，氧嗪酸鉀可競爭性地與尿酸酶結合，部分抑制尿酸酶活性，抑制小鼠體內尿酸分解，造成高尿酸血癥模型[2]；酵母通過增加黃嘌呤氧化酶活性和產生大量的尿酸而干擾正常的嘌呤代謝。二者結合，所建立模型與人高尿酸血癥類似。

本實驗采用高尿酸血癥小鼠模型評價向日葵花粉降尿酸功效，結果表明，向日葵花粉能顯著降低血清尿酸含量，抑制黃嘌呤氧化酶活性[14-15]，減少尿酸生成和尿酸鹽晶體沉積，因此，向日葵花粉有降低血尿酸的作用。研究結果為向日葵花粉降尿酸產品的開發提供了科學依據，也為向日葵花粉的高值化利用提供了技術基礎。