藏豬脾臟轉移因子對小鼠抗氧化作用的研究

葉兵兵　楊瑩湘　張輝梅　倪萍　劉登波

摘要：為了研究藏豬脾臟中轉移因子（TF）的抗氧化作用，試驗選擇20只小鼠（雌雄各半），隨機分為藥物組和對照組（每組10只），藥物組注射TF，對照組注射等量生理鹽水，檢測小鼠部分組織中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。結果表明，藥物組小鼠脾臟SOD活性與對照組相比顯著降低（P<0.05），其他組織中SOD活性無顯著差異（P>0.05）。藥物組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟MDA含量均顯著低于對照組（P<0.05），腎臟MDA含量與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。說明藏豬脾臟TF能增強其機體清除自由基的能力。

關鍵詞：藏豬;脾臟;轉移因子（TF）;抗氧化性

中圖分類號：S828? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2021）04-0010-02

自從1995年Lawrence發現轉移因子（Tansfer factor，TF）以來[1]，人們對轉移因子的研究越來越廣泛。TF是來自于具有細胞性免疫功能的淋巴細胞產生的一類可透析的小分子多肽類物質，其分子質量小，含多種氨基酸，可提高機體免疫活性，并且還可以誘導靶細胞產生大量的細胞因子，實踐中經常用于免疫缺陷病以及感染性疾病防治[2，3]。

抗氧化（vAnti-Oxidant）是指抗氧化自由基的簡稱，抗氧化是任何以低濃度存在就能有效抑制自由基的氧化反應的物質，機體在產生自由基的同時，也產生著抵抗自由基的抗氧化物質。超氧化物歧化酶（SOD）是調節機體自由基代謝的重要酶。丙二醛（MDA）含量可衡量機體內自由基的代謝情況[4]。本試驗以甘孜州藏豬脾臟為原料，提取藏豬脾臟TF，給小鼠注射后測定其心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟中SOD和MDA含量，檢測其抗氧化能力，以為藏豬脾臟TF的進一步利用提供一定的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料 藏豬脾臟采集于四川省甘孜州姑咱鎮屠宰場。

1.1.2 試驗動物 昆明系小鼠20只（雌雄各半），體重為18～22 g。由成都達碩實驗動物有限公司提供。

1.1.3 主要試劑 SOD試劑盒、MDA試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 TF的制備 采用冷凍-透析法制備TF，-20 ℃保存備用。

1.2.2 動物分組及處理 適應性飼養3 d后將20只健康小鼠隨機等分為藥物組和對照組。在無菌條件下分別注射TF和無菌生理鹽水，即藥物組小鼠每天腹腔注射TF 0.2 mL，對照組小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.2 mL，持續15 d。

1.2.3 組織勻漿的制備 注射15 d后脫頸椎處死小鼠，取小鼠心、肝、脾、肺、腎各0.1 g，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去皮下脂肪和其他結締組織，濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍質量預冷的生理鹽水，玻璃勻漿器充分研碎，即得組織勻漿，勻漿后3 500 r/min離心12 min，取上清液備用。

1.2.4 組織勻漿中各物質含量的測定 按照相應試劑盒說明書分別測定小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟中SOD和MDA含量。

（1）SOD活力測定。使用黃嘌呤氧化酶法。

[SOD活力（U/mg）=對照OD450 nm-測定OD450 nm對照OD450 nm]

÷50%×反應體系稀釋倍數[0.24 mL0.02 mL]÷待測樣本蛋白濃度（mg/mL）

（2）MDA活力測定。采用TBA法。

組織中MDA含量（nmol/mgprot）=

[測定OD532 nm-對照OD532 nm標準OD532 nm-空白OD532 nm]×標準品濃度[（10 nmol/mL）÷待測樣本蛋白濃度（mgprot/mL）]

1.2.5 數據的統計分析

采用SPSS軟件進行統計分析，結果以平均值±標準差表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果與分析

2.1 藏豬脾臟TF對小鼠組織中SOD活性的影響

由表1可知，藥物組小鼠脾臟SOD活性較對照組顯著降低（P<0.05），小鼠其他組織中SOD活性兩組差異不顯著（P>0.05）。

2.2 藏豬脾臟TF對小鼠組織中MDA含量的影響

由表2可知，藥物組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟MDA含量顯著低于對照組（P<0.05），腎臟MDA含量兩組差異不顯著（P>0.05）。

3 小結與討論

制備非特異性TF應選用成年或細胞免疫功能正常或較強的畜禽作供體[5]。本試驗以甘孜州特有物種藏豬脾臟為原料，經勻漿、凍融、透析獲得藏豬脾臟中的TF，程序簡單，可以將藏豬脾臟變廢為寶，為動物抗病力及疫病防治工作提供新的途徑和工具。

TF作為一種特定的淋巴細胞因子，參與機體的免疫功能。TF通過活化巨噬細胞，能特異性和非特異性地增強機體免疫功能。它能使正常的未致敏的T淋巴細胞轉化為致敏的T淋巴細胞。因此TF可以增強細胞的免疫應答，增強機體的抗病能力和促使自身免疫病的康復。常建軍等[6]研究表明，牦牛轉移因子有增加其細胞免疫的作用。蔣小武等[7]研究表明，鵝脾臟轉移因子粗提液對增強機體的免疫力具有一定作用。

SOD是生命機體中存在的一種活性酶，是機體內清除自由基的重要物質。MDA產生的量與機體內自由基的水平有關，機體受自由基攻擊的程度越嚴重即MDA的含量越高。本試驗結果表明，藥物組小鼠脾臟SOD活性顯著降低（P<0.05），小鼠其他組織中SOD活性差異不顯著（P>0.05）。藥物組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺臟MDA含量顯著低于對照組（P<0.05），腎臟MDA含量差異不顯著（P>0.05）。MDA含量的顯著降低反映機體受自由基攻擊的程度下降，表明藏豬脾臟TF能增強機體清除自由基的能力。

參考文獻：

[1] LAWRENCE H S. The transfer in humans of delayed skin sensitivity to streptococcal M substance and to tuberculin with disrupted leucoeytes[J]. Clin Invest，1955，34（2）：219-230.

[2] 郭成留，程會昌.動物轉移因子及其研究進展[J].河南農業科學，2003（6）：46-48.

[3] 葉兵兵，李富桂.雞轉移因子脂質體對小鼠巨噬細胞吞噬功能及腸絨毛長度的影響[J].中國畜牧獸醫，2013，41（1）：130-132.

[4] 寧 鵬，張 壽，尚海忠，等.牦牛胎盤抗氧化作用的研究[J].安徽農業科學，2009.37（18）：8501-8502.

[5] 張 玲，胡庭俊，陳炳全.馬尾藻多糖對雞脾臟淋巴細胞增殖及氧化應激影響的實驗觀察[J]，西南農業學報2011，24（5）：1967-1971.

[6] 常建軍，文 英，李 莉，等.牦牛脾臟轉移因子對小鼠淋巴細胞轉化增殖的影響[J].中國農學通報，2014，30（5）：38-40.

[7] 蔣小武，曾楊梅，朱樂欣，等.鵝脾臟非特異性轉移因子的粗提取與活性鑒定[J].安徽農業科學，2012，40（5）：2710-2712.