通山縣某豬場豬鏈球菌分離株毒力特征及耐藥性研究

吳三南

摘要：對通山縣某豬場豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）病料進(jìn)行了毒力特征及耐藥性研究。結(jié)果獲得血清1型1株，血清2型12株，血清7型2株，血清9型3株。PCR檢測epf、mrp和sly，結(jié)果顯示epf+/mrp+/sly+型有7株，epf-/mrp+/sly+型有5株，epf-/mrp-/sly-型有6株。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示其對頭孢喹肟、青霉素和氨芐西林敏感，對其他類型抗生素均高度耐藥。

關(guān)鍵詞：豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）;血清型;毒力基因;耐藥性

中圖分類號：S858.28? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2021）04-0012-0

豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）主要引起豬敗血癥、腦膜炎、肺炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性漿膜炎，在世界范圍內(nèi)影響巨大。當(dāng)前主流趨勢將其分成29 個血清型，其中SS2 型流行最廣。豬鏈球菌的epf、mrp、sly是目前研究較多的主要毒力基因[1]。

近年來，豬鏈球菌病在不同地區(qū)均呈上升趨勢，且經(jīng)常與主要病毒性疾病豬圓環(huán)病毒病、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、豬偽狂犬病等混合感染，更不利于豬的疾病診斷及防控，同時也造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過收集通山縣某豬場30份臨床疑似豬鏈球菌病病料，對其毒力因子及其耐藥性進(jìn)行了研究。旨在揭示該豬場豬鏈球菌流行菌株優(yōu)勢血清型及其毒力因子特征和耐藥性特征，為該豬場防控豬鏈球菌病提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料

采集臨床瀕死期哺乳仔豬病料10份、保育豬病料20份（腦組織病料與關(guān)節(jié)液病料混合均勻后分離鑒定）。

1.2 病原的分離純化

將采集的腦組織和關(guān)節(jié)液分別劃線接種于含5%的新生牛血清TSA平板，置于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，挑選可疑單個菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，隨后進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。

1.3 分離菌株的血清型鑒定

主要采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）方法進(jìn)行鑒定。參照文獻(xiàn)[2]設(shè)計合成鑒定引物。

1.4 毒力基因檢測

參照文獻(xiàn)[2]合成SS 的3 種主要毒力基因epf、mrp、sly 的引物。取凍干保存的18株SS接種于含5 %小牛血清TSB 液體培養(yǎng)基中，37 ℃ 培養(yǎng)18 h后提取其基因組DNA作為模板，用于PCR 擴(kuò)增SS 的epf、mrp、sly毒力基因。

1.5 藥物敏感性試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)采用紙片擴(kuò)散法[3]。5大類8種抗生素包括頭孢喹肟、青霉素、氨芐西林、卡那霉素、替米考星、四環(huán)素、土霉素、恩諾沙星等。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌血清型鑒定

本試驗(yàn)共獲得18株豬鏈球菌，其中豬鏈球菌血清1型有1株，占5.6%;血清2型有12株，占66.7%;血清7型有2株，占11.1%;血清9型有3株，占16.7%。血清2型為當(dāng)前該豬場流行優(yōu)勢菌株（圖1）。

2.2 分離菌株3種毒力基因檢測結(jié)果

PCR共檢測出3種毒力基因類型，epf+/mrp+/sly+型有7株，占38.9%;epf-/mrp+/sly+型有5株，占27.8%，epf-/mrp-/sly-型有6株，占33.3%（表1）。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)結(jié)果（表2）表明，18株鏈球菌對頭孢喹肟、青霉素和氨芐西林敏感性較高（敏感性分別為83.3%、77.8%、72.2%），對氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類藥物均表現(xiàn)出較高的臨床耐藥性。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)對通山縣某豬場疑似豬鏈球菌病例進(jìn)行分離鑒定及血清型分型，發(fā)現(xiàn)血清2型為當(dāng)前該豬場流行優(yōu)勢菌株。與國內(nèi)其他地方報道較為一致[4]。

epf、mrp和sly與豬鏈球菌致病性強(qiáng)弱有關(guān)，epf+/mrp+/sly+被認(rèn)為與高致病性菌株相關(guān)。本試驗(yàn)共檢測出3種毒力基因類型，epf+/mrp+/sly+型占38.9%，占比最高，表明該豬場豬鏈球菌臨床流行菌株以epf+/mrp+/sly+毒力類型為主。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示只有頭孢喹肟、青霉素和氨芐西林敏感性較高，在70%以上;其他5種抗生素均表現(xiàn)出了高度的耐藥性。本試驗(yàn)對該豬場豬鏈球菌病流行菌株優(yōu)勢血清型及其毒力特征和耐藥性特征的研究結(jié)果，可為該豬場針對豬鏈球菌病的防控提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 宦海霞，黃莉莉，張 科.豬鏈球菌多樣性及其致病因子研究進(jìn)展[J].中國畜牧獸醫(yī)，2014，41（2）：218-223.

[2] 許大文. 致病性豬鏈球菌安徽分離株的生物學(xué)特性研究[D]. 合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2012.

[3] 劉志科，張秋雨，陳創(chuàng)夫，等.豬鏈球菌病原的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)[J].養(yǎng)豬，2017（2）：105-108.

[4] 劉 琪，王 娟，周如月，等.豬鏈球菌2、7、9型多重PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J].中國動物傳染病學(xué)報，2016，24（3）：35-40.