海拔高度對蒙古黃芪主要藥效成分積累及其關鍵酶基因表達量影響研究

吳 培，孫 卓, 2*，楊利民, 2*，韓 梅, 2

海拔高度對蒙古黃芪主要藥效成分積累及其關鍵酶基因表達量影響研究

吳 培1，孫 卓1, 2*，楊利民1, 2*，韓 梅1, 2

1. 吉林農業大學 中藥材學院，吉林 長春 130118 2. 省部共建生態恢復與生態系統管理國家重點實驗室，吉林 長春 130118

研究不同海拔高度與蒙古黃芪var.主要藥效成分含量及其關鍵酶基因表達量之間的關系。采用HPLC法檢測黃芪根中黃芪甲苷與毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量，采用實時熒光定量PCR法檢測黃芪甲苷生物合成過程中關鍵酶基因乙酰輔酶A乙?；D移酶[AACT,acetoacetyl-co zyme A (CoA) thiolase]、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶（HMG-CoA synthase，HMGS）、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶[3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reductase，HMGR]、異戊二烯焦磷酸異構酶（iso-pentenyl diphosphate isomerase，IDI）、法尼基焦磷酸合酶（farnesyl diphosphate synthase，FPS）、鯊烯合酶（squalene synthase，SS）、鯊烯環氧酶（squalene epoxidase，SE）、環阿爾庭烷合酶（cycloartenol synthase，CAS）基因的表達量。4個樣地中樣地HQ-2（內蒙呼和浩特可可以力更鎮）中黃芪甲苷含量、毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量及總皂苷含量普遍高于其他樣地；相關性分析表明，海拔高度對黃芪總皂苷合成的影響較大，、和基因在黃芪總皂苷的合成過程中起主要作用，海拔高度有利于、和基因的表達，海拔高度對黃芪皂苷合成途徑中關鍵酶基因具有一定的調控作用。在處于海拔1730 m左右的地區種植蒙古黃芪有利于其藥效成分的積累。

蒙古黃芪；基因表達；總皂苷；海拔高度

蒙古黃芪(Fisch.) Bunge var.(Bge.) Hsiao.為豆科多年生草本植物，屬藥食兼用資源種，其主產區為我國山西、甘肅、內蒙古等地[1]。隨著人民生活水平的改善和醫療保健水平的提高，黃芪的市場需求量持續增加，野生資源無法滿足市場需求，因此自20世紀70年代中后期，黃芪藥材主要來源于人工栽培[2]。但目前蒙古黃芪的人工栽培普遍存在質量不穩，產量偏低等問題，嚴重制約了黃芪產業的可持續健康發展。

生態因素是影響藥材質量形成的關鍵因素之一，包括氣候、土壤、海拔等生態因子[3]。其中，海拔高度對道地藥材的成分積累存在一定影響[4]。研究發現，隨栽培地海拔的升高，同一生長年限的黃芩中黃酮類成分含量呈現明顯的上升趨勢，且有顯著性差異[5]。王寅秀等[6]研究發現，海拔100～800 m內的人參多糖含量與海拔高度呈正相關，海拔950～1450 m人參多糖含量與海拔高度呈負相關；胡明勛等[7]研究發現海拔影響恒山野生蒙古黃芪藥材黃酮成分含量。目前，關于不同海拔高度與蒙古黃芪皂苷類、黃酮類成分含量及其關鍵酶基因表達量之間的關系鮮有報道，因此，本研究從質量和分子層面探究海拔與蒙古黃芪之間的關系，旨在確定蒙古黃芪的適宜栽培區域，為提高黃芪品質提供科學依據和理論參考。

1 自然概況與材料

1.1 自然概況

內蒙古呼和浩特地區平均海拔1050 m，屬西北大陸性氣候。四季分明，晝夜溫差較大，夏無酷暑，冬無嚴寒，全年平均氣溫在8 ℃左右。最冷月氣溫?12.7～?16.1 ℃；最熱月平均氣溫17～22.9 ℃。平均年較差為34.4～35.7 ℃，平均日較差為13.5～13.7 ℃。極端最高氣溫38.5 ℃，最低?41.5 ℃。日照時間年均1 600 h。土壤以沙壤土為主。

1.2 材料

1.2.1 樣品的采集與處理 于2018年10月21日在內蒙古呼和浩特地區4個樣地采集同一生育時期蒙古黃芪樣品116份。采用五點采樣法采集黃芪樣品，將樣品低溫條件下運輸，帶回實驗室后小心清洗，冷凍保存。將剩余樣品烘干至恒定質量，粉碎并過100目篩，以便后續實驗。所有樣品由吉林農業大學楊利民教授鑒定為蒙古黃芪(Fisch.) Bunge var.(Bge.) Hsiao.，樣地信息見表1。

表1 樣地信息

1.2.2 試劑 百泰克植物多糖多酚總RNA提取試劑盒，百泰克反轉錄試劑盒（北京百泰克生物有限公司），SYBR Premix Ex Taq TM II試劑盒（DRR081A）（日本TaKaRa有限公司），黃芪甲苷對照品購于上海源葉生物科技有限公司，質量分數＞98%；毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（質量分數＞98%，批號20633-67-4）購于大北京索萊寶公司，乙腈，甲醇為色譜純，乙醇以及其他試劑均為分析純，蒸餾水。

1.2.3 儀器 AUY220電子天平；GZX-9070MBE電熱鼓風干燥箱；DL-820E智能超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司）；Agilent1260高效液相色譜儀（Agilent，美國）；依利特ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；ProFlex?梯度PCR擴增儀（Applied Biosystems，美國）；Mx3000P實時熒光定量PCR儀（Agilent公司，美國）；NanoDrop 2000核酸/蛋白定量儀（Thermo公司，美國）；DYY-8C型電泳儀（北京六一電泳廠）；Tanon Gis-2010凝膠成像系統［天能科技（上海）有限公司］；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫療儀器有限公司）；高速離心機（美國Thermo公司）；高速萬能打粉機（天津泰斯特儀器有限公司）。

2 方法

2.1 蒙古黃芪黃芪甲苷含量的測定

2.1.1 對照品溶液的制備 精確稱量黃芪甲苷對照品2.46 mg置于10 mL量瓶中，加少量甲醇溶解，定容，搖勻，即得對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 精確稱量蒙古黃芪根部樣品1.00 g，加入15 mL甲醇超聲提取30 min，提取3次，合并濾液，用蒸發皿在水浴鍋中65 ℃下蒸發溶劑，加入甲醇溶解，隨后將提取物離心，定容至1 mL，選擇0.22 μm微孔濾膜濾過上清液。

2.1.3 色譜條件[8]Agilent 1260型高效液相色譜儀UV檢測器；色譜柱：依利特Hypersil ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）柱；乙腈-水（32∶64）等度洗脫；體積流量1.0 mL/min；檢測波長203 nm；柱溫30 ℃；進樣量10 μL；檢測時間30 min。

2.1.4 標準曲線繪制 精密吸取黃芪甲苷對照品溶液 1、2、4、6、8、10 μL 注入液相色譜儀，按照“2.1.3”項下色譜條件進行測定，以黃芪甲苷峰面積為橫坐標（），質量分數為縱坐標（），繪制線性回歸方程，＝449.1－1.001 2，2＝0.994。記錄色譜圖（圖1），并計算黃芪甲苷質量分數。

圖1 黃芪甲苷對照品 (A) 和蒙古黃芪(B) 樣品的高效液相色譜圖

2.1.5 精密度試驗 吸取黃芪甲苷對照品溶液，在“2.1.3”項色譜條件下重復進樣6次，每次進樣10 μL，計算黃芪甲苷峰面積的RSD值為1.72%，說明實驗儀器的精密度較好。

2.1.6 重復性試驗 取蒙古黃芪粉（HQ-1）1.0 g，按照“2.1.2”項平行制備6份供試品溶液，在“2.1.3”項色譜條件下進行分析，計算黃芪甲苷質量分數的RSD值為1.94%，說明本實驗的重復性較好。

2.1.7 穩定性試驗 取同一份藥材樣品（HQ-1），按照“2.1.2”項的方法制備供試品溶液，在室溫下分別于 0、2、4、6、8、12、24 h內進行測定，以峰面積為指標計算黃芪甲苷的RSD值為1.88%，說明供試品溶液能在24 h內保持穩定。

2.1.8 加樣回收率試驗 取同一批（HQ-1）黃芪樣品6份，每份樣品1.0 g，加入黃芪甲苷對照品甲醇溶液1 mL，室溫揮干，按照“2.1.2”項制備供試品溶液，測定，加樣回收率為97.6%，RSD值小于3%。

2.2 蒙古黃芪毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精確稱量毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品2.37 mg，置于10 mL量瓶中，加少量甲醇溶解，定容，搖勻，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 以“2.1.2”項中提取的濾液為供試品。

2.2.3 色譜條件 色譜條件為安捷倫Agilent（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；流動相為乙腈和0.2%甲酸；體積流量1.0 mL/min；檢測波長260 nm；進樣量10 μL[10]。

2.2.4 標準曲線繪制 精密吸取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品溶液 1、2、4、6、8、10 μL 注入液相色譜儀，按照“2.2.3”項色譜條件進行測定，以峰面積為縱坐標（），質量濃度為橫坐標（），繪制標準曲線，根據標準曲線方程＝25.712－3.297 2，2＝0.999 6，記錄色譜圖（圖2），計算毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量。

圖2 毛瑞異黃酮對照品(A) 和黃芪樣品(B) 的高效液相色譜圖

2.2.5 精密度試驗 吸取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品溶液，在“2.2.3”項色譜條件下重復進樣6次，每次進樣10 μL，計算黃芪甲苷峰面積的RSD值為1.72%。

2.2.6 重復性試驗 取蒙古黃芪粉（HQ-1）1.0 g，按照“2.1.2”項平行制備6份供試品溶液，在“2.2.3”項色譜條件下進行分析，計算毛蕊異黃酮葡萄糖苷質量分數的RSD值為1.94%。

2.2.7 穩定性試驗 取同一份藥材樣品（HQ-1），按照“2.1.2”項的方法制備供試品溶液，在室溫下分別于 0、2、4、6、8、12、24 h內進行測定，以峰面積為指標計算毛蕊異黃酮葡萄糖苷的RSD值為1.88%。

2.2.8 加樣回收率試驗 取同一批（HQ-1）黃芪樣品6份，每份樣品1.0 g，加入毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品甲醇溶液1 mL，室溫揮干，按照“2.1.2”項制備供試品溶液，測定，加樣回收率為99.6%，RSD值小于3%。

2.3 蒙古黃芪總皂苷含量的測定

2.3.1 供試品溶液的制備 精確稱量不同產地蒙古黃芪樣品1.00 g，加入15 mL 80%乙醇超聲提取30 min，提取3次，合并濾液。用蒸發皿在水浴鍋中65 ℃下蒸發溶劑，加入80%甲醇溶解，隨后將提取物離心，揮干溶液，定容至5 mL，即得供試品溶液。

2.3.2 對照品溶液制備 精密稱取黃芪甲苷對照品5mg，置于10 mL量瓶中，加少量甲醇溶解，定容，搖勻，即得對照品溶液。

2.3.3 測定波長的選擇 取對照品溶液、供試品溶液適量，加入5%香草醛-冰醋酸試液0.2 mL，高氯酸溶液0.8 mL，充分振搖混勻后置于60 ℃恒溫水浴上加熱20 min，立即用冰水冷卻至室溫，再加入5 mL冰醋酸溶液，搖勻。以試劑作空白，采用紫外分光光度法在200～700 nm進行掃描，于570 nm波長處有最大吸收。

2.3.4 線性方程的繪制以吸光度（）為縱坐標、濃度（）為橫坐標，繪制標準曲線，根據標準曲線方程：= 4.368 7－0.041 4，2= 0.997，計算總皂苷含量。

2.4 蒙古黃芪根組織總RNA的提取

將保存在?80 ℃的蒙古黃芪根組織樣品在液氮中充分研磨至粉末狀，利用多糖多酚植物總RNA提取試劑盒提取總RNA，研磨樣品約30 min，在研磨過程中，注意試驗環境的衛生狀況以免樣品感染，最好選擇在冰上操作，以加大提取總RNA試驗的成功率。利用NanoDrop 2000檢測儀測定蒙古黃芪根組織中RNA濃度，并對提取得到的總RNA進行完整性檢測。選用M-MuLV第一鏈cDNA合成試劑盒，按試劑盒中提供的操作步驟將總RNA逆轉錄合成cDNA，并于?20 ℃保存備用。

2.5 引物設計

根據GenBank數據庫中已經公布的黃芪乙酰輔酶A乙?；D移酶[acetoacetyl-co zyme A (CoA) thiolase ，AACT]、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶（HMG-CoA synthase，HMGS）、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶[3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reductase，HMGR]、異戊二烯焦磷酸異構酶（iso-pentenyl diphosphate isomerase，IDI）、法尼基焦磷酸合酶（farnesyl diphosphate synthase，FPS）、鯊烯合酶（squalene synthase，SS）、鯊烯環氧酶（squalene epoxidase，SE）、環阿爾庭烷合酶（cycloartenol synthase，CAS），以18S RNA為內參基因，上海生物工程技術有限公司，引物序列見表2。

表2 基因序列引物

2.6 關鍵酶基因表達量的測定

以各樣地地蒙古黃芪根組織的cDNA為模板，18S RNA為內參基因，根據表2中各基因的引物序列，分別對、、、、、、和基因進行RT-PCR擴增，重復3次，采用2?ΔΔCt法分析結果。PCR反應體系為：滅菌水7.4 μL，SYBR? Premix Ex TaqTM 10 μL，正反引物各0.8 μL，cDNA模板1.0 μL，共20 μL的反應體系。RT-PCR反應程序：95 ℃預變性3 min，95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，反應40個循環。

2.7 數據分析

實驗所得數據采用Excel 2010、SPSS和GraphPad Prism6等軟件進行處理。

3 結果與分析

3.1 不同產地蒙古黃芪黃芪甲苷含量

內蒙古呼和浩特地區蒙古黃芪黃芪甲苷含量見圖3，各樣地蒙古黃芪中黃芪甲苷含量差異較大，其中HQ-4樣地的蒙古黃芪黃芪甲苷含量最高為0.066%，HQ-3蒙古黃芪黃芪甲苷含量最低為0.024%，二者相差2.73倍。《中國藥典》2015年版規定黃芪甲苷的含量為不小于0.04%，樣地HQ-1、HQ-2及HQ-4黃芪中黃芪甲苷含量達到國家藥典水平，樣地HQ-3黃芪未達到藥典規定。呼和浩特地區蒙古黃芪中黃芪甲苷含量的排序由高到低依次為土默特左旗＞可可以力更鎮＞武川縣＞賽罕區。

圖3 不同樣地黃芪甲苷含量

3.2 不同產地蒙古黃芪毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量

內蒙古呼和浩特地區蒙古黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量結果見圖4，HQ-2的蒙古黃芪毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量最高為0.409%，在HQ-1樣地蒙古黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷最低為0.085%；《中國藥典》2015年版規定黃芪甲苷的含量為不小于0.02%，均達到了藥典要求，其中樣地HQ-2黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量約為藥典規定的20倍。呼和浩特地區蒙古黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的排序由高到低依次為可可以力更鎮＞土默特左旗＞賽罕區＞武川縣。

圖4 不同樣地毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量

3.3 不同產地蒙古黃芪總皂苷含量

內蒙古呼和浩特地區蒙古黃芪中總皂苷含量結果見圖5，HQ-2的蒙古黃芪總皂苷含量最高為11.064%，在HQ-4樣地蒙古黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷最低為1.591%。由圖可知，樣地HQ-1與HQ-2黃芪中總皂苷含量顯著高于樣地HQ-3與HQ-4。呼和浩特地區蒙古黃芪中總皂苷含量的排序由高到低依次為可可以力更鎮＞武川縣＞賽罕區＞土默特左旗。

圖5 不同樣地總皂苷含量

3.4 蒙古黃芪根組織總RNA提取結果

將提取得到的不同產地蒙古黃芪根組織中總RNA進行質量濃度和純度檢測260/280和260/230值，260/280和260/230值可表明RNA的純度，260/280應在2.0～2.2，若小于2.0說明存在蛋白或有機物污染，若大于2.2說明RNA已水解為單核苷酸。260/230應在2.0～2.4，若小于 2.0說明存在乙醇、異硫氰酸胍等殘留，若大于2.4說明需用乙醇、乙酸鹽沉淀RNA。結果見表3，蒙古黃芪根組織中總RNA的質量濃度和純度均較高，可用于下一步試驗。

表3 不同樣地蒙古黃芪根部總RNA的檢測結果

3.5 關鍵酶基因表達量的測定

利用實時熒光定量PCR方法，以18S RNA作為內參基因，檢測呼和浩特地區蒙古黃芪根組織中、、、、、、、基因的表達量，結果見圖6。HQ-1樣品中基因表達量最高為1.54，HQ-2樣品基因表達量最低為0.461，兩者相差3.35倍?；蚋鳟a地表達量相差不大，HQ-3樣品中基因相對表達量最低。、和基因在呼和浩特地區黃芪根組織表達趨勢基本一致，均是HQ-2樣地顯著高于其他省份黃芪?；虮磉_量最高是HQ-2，是表達量最低的HQ-3的4.6 倍左右?；騂Q-1與HQ-2中相對表達量普遍高于HQ-3與HQ-4相對表達量。HQ-1樣地基因相對表達量顯著高于其他樣地為2.63。

圖6 不同樣地黃芪根中關鍵酶基因熒光定量PCR表達分析

3.6 海拔高度與黃芪活性成分的相關性分析

海拔高度在1000～1732 m，黃芪總皂苷含量與海拔高度呈顯著正相關（＜0.05），隨海拔高度的升高而增加，但海拔過高，反而不利于黃芪總皂苷的合成，在2427 m海拔時，黃芪中總皂苷含量最低；海拔高度在1056 m黃芪甲苷含量最低，其他海拔高度所采集蒙古黃芪黃芪甲苷含量差異不明顯；海拔高度在1732 m毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量最高，其他海拔高度所采集蒙古黃芪黃芪甲苷含量差異不明顯。

3.7 黃芪活性成分與關鍵酶基因表達量的相關性分析

黃芪皂苷和關鍵酶基因表達量的相關性分析，見表5，、和基因與黃芪總皂苷含量呈顯著正相關（＜0.05），說明、和基因在黃芪總皂苷的合成過程中起主要作用；基因表達量與黃芪甲苷和黃芪中皂苷含量呈負相關，但是沒有達到顯著作用，說明基因對黃芪皂苷的合成具有一定的抑制作用，但是作用不明顯；關鍵酶之間存在一定的相關性，說明關鍵酶之間相互協調，共同調節黃芪皂苷的合成。

3.8 海拔高度與關鍵酶基因表達量的相關性分析

海拔高度與和基因表達量呈極顯著正相關（＜0.01），與基因呈顯著正相關（＜0.05），與其他基因沒有明顯的相關性，說明、和基因表達量隨著海拔的升高而增加，海拔有利于、和基因的表達。

4 討論

藥用植物次生代謝產物的合成、積累與外部環境關系密切，直接影響藥用植物的質量形成[11-13]。而次生代謝產物則源自于植物體內本身的生理生化代謝活動，為了在生產中獲得穩定的藥材質量，需要對植物次生代謝活動的途徑、規律及其影響因素進行系統研究。

表5 黃芪皂苷與關鍵酶基因表達量的相關性分析

環境因子是影響藥用植物活性成分的主要因素，環境因子主要包括土壤、氣候、海拔等[14]；本實驗主要研究了海拔因子對黃芪質量的影響，胡明勛等[7]對山西恒山野生蒙古黃芪質量的環境因素研究，發現海拔對蒙古黃芪皂苷含量影響不大，本研究發現海拔高度在1000～1732 m，黃芪總皂苷含量與海拔高度呈顯著正相關（＜0.05），隨海拔高度的升高而增加，但海拔過高，反而不利于黃芪總皂苷的合成，在2427 m海拔時，黃芪中總皂苷含量最低；海拔高度在1056 m黃芪甲苷含量最低，其他海拔高度所采集蒙古黃芪黃芪甲苷含量差異不明顯；海拔高度在1732 m毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量最高，其他海拔高度所采集蒙古黃芪黃芪甲苷含量差異不明顯；內蒙古呼和浩特地區4個樣地中樣地HQ-2（內蒙呼和浩特可可以力更鎮）中黃芪甲苷含量、毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量及總皂苷含量普遍高于其他樣地，可推斷出樣地HQ-2的海拔高度是最適海拔高度為1730 m左右。

中藥材次生代謝產物的合成過程中關鍵酶基因的表達量具有主要作用，且受環境因子影響較大[15-16]；本研究分別選取上游、、基因，中游、、、基因，下游基因黃芪甲苷與及海拔高度進行相關性研究，發現黃芪總皂苷與及基因均表現顯著正相關，這與韋赫等[16]研究結果相似。海拔高度與、及基因均有顯著關系，其中海拔高度與基因呈極顯著正相關，海拔高度與基因呈顯著正相關。因此，在分子層面上，闡述海拔高度有助于黃芪總皂苷積累的原因，選擇高海拔高度的樣地栽培黃芪能夠促進、及基因的表達，從而提高蒙古黃芪中總皂苷的含量。

尋找到海拔高度與黃芪皂苷生物合成相關基因之間的聯系，有望找到海拔高度影響黃芪皂苷類成分的根本原因，明確黃芪所處環境中，海拔高度對黃芪皂苷類成分合成過程中起到的重要作用。本研究針對不同海拔高度黃芪制定更加科學合理的質量標準，為實現中藥材質量的可控性提供理論依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on effect of altitude on accumulation of main active components and expression of key enzyme genes of

WU Pei1, SUN Zhuo1, 2, YANG Li-min1, 2, HAN Mei1, 2

1. College of Traditional Chinese Medicine, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China 2. State Key Laboratory of Ecological Restoration and Ecosystem Management, Changchun 130118, China

was used as the experimental material to study the relationship between different altitude and the content of main effective components and the expression of key enzyme genes of.The content of astragaloside and genistein glucoside inroot was detected by HPLC, and the expression of key enzyme genes (AACT, HMGR, CAS, FPS, HMGs, IDI, SE, SS) in astragaloside biosynthesis was detected by qRT-PCR.The contents of astragaloside a, isoflavone glucoside, and total saponin in HQ-2 of four plots in Huhhot were higher than those in other plots. The correlation analysis showed that the altitude had a great influence on the synthesis of astragalus total saponins, and the genes of,andplayed a major role in the synthesis of astragalus total saponins. Altitude was favorable for the expression of,andgenes, and it also had a certain regulatory effect on key enzyme genes in astragaloside synthesis pathway.Plantingat an altitude of 1730 meters is beneficial to the accumulation of its active components.

(Fisch.) Bunge var.(Bge.) Hsiao.; gene expression;total saponins; altitude

R282.12

A

0253 - 2670(2021)13 - 4031 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.13.026

2020-11-09

國家中藥材產業技術體系項目（CARS-21）

吳 培，碩士研究生，主要從事生態學研究。Tel: 17390928256 E-mail: 1561485694@qq.com

孫 卓，博士，主要從事藥用植物病害防治及土壤微生態。Tel: 17390901105 E-mail: 329575068@163.com

楊利民，教授，博士生導師，主要從事中藥資源生態與藥材質量調控。Tel: 13384309292 E-mail: ylmh777@126.com

[責任編輯 時圣明]