正交試驗(yàn)優(yōu)選制洋金花的炮制工藝研究

夏永嚴(yán) 李婭 秦昆明 楊超 蔡寶昌 金俊杰

【摘 要】 目的：對(duì)制洋金花的炮制工藝進(jìn)行優(yōu)化。方法：以東莨菪堿含量和水分含量的綜合評(píng)分為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)考察生姜打汁后加水量（A）、悶潤(rùn)時(shí)間（B）、炒制溫度（C）、炒制時(shí)間（D）4項(xiàng)指標(biāo)，確定制洋金花的最佳炮制工藝。結(jié)果：篩選出制洋金花的最佳工藝參數(shù)為生姜打汁后加水量（A）3倍，悶潤(rùn)時(shí)間（B）40 min，炒制溫度（C）270～300 ℃、炒制時(shí)間（D）5 min，炮制后的制洋金花有酒香氣和微姜味。結(jié)論：優(yōu)選得到的制洋金花炮制工藝穩(wěn)定可行，為更好地控制制洋金花的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 制洋金花;炮制工藝;東莨菪堿;正交試驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R283 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號(hào)】1007-8517（2021）09-0058-05

Abstract：Objective To study the processing technology of Fried Daturae Flos by orthogonal experiment. Methods Taking scopolamine and water content as the evaluation indexes， the effects of ginger water added（A）， wetting time（B）， frying temperature（C） and frying time（D） on the processing technology were investigated by orthogonal experiment. Finally determine the best processing technology for Fried Daturae Flos. Results The optimum technological parameters for fried Daturae Flos are 3 times of ginger water added（A）， 40 min of wetting time（B）， 270～300 ℃ of frying temperature（C） and 5 min of frying time（D）. The processed Daturae Flos smell has aroma of wine and slight ginger. Conclusion The optimal process of fried Daturae Flos is stable and feasible， which can provide scientific basis for better control of its quality.

Keywords：Fried Daturae flos; Processing Technology; Scopolamine; Orthogonal Experiment

洋金花Daturae flos為茄科植物白花曼陀羅Datura metel L.干燥花，性味辛溫、有毒[1]。研究表明洋金花具有麻醉人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用，伍玉哲等[2]對(duì)87例臨床患者進(jìn)行鎮(zhèn)痛研究表明洋金花制劑鎮(zhèn)痛明顯，故洋金花以“中藥麻醉”臨床功效而被廣泛使用[3]。洋金花具有毒性，內(nèi)服急性中毒報(bào)道6例[4]，多由誤服或用量過度所導(dǎo)致，在內(nèi)服用量上需謹(jǐn)慎[5]。對(duì)于洋金花在臨床使用有明顯鎮(zhèn)痛效果，表明其具有臨床使用價(jià)值，但因其本身具有毒性或臨床使用量不精確，臨床上解決方法：一方面可以通過控制臨床用量，減少其毒性反應(yīng)出現(xiàn)，另一方面對(duì)洋金花進(jìn)行炮制，達(dá)到減毒增效和提高其內(nèi)在質(zhì)量穩(wěn)定性的效果。對(duì)制洋金花的炮制工藝進(jìn)行研究，獲得穩(wěn)定的炮制工藝參數(shù)，形成質(zhì)量均一穩(wěn)定的制洋金花，有助于制洋金花的臨床使用安全有效。

制洋金花只有《上海市中藥飲片炮制規(guī)范》[6]收載：將生洋金花用生姜汁拌勻，待吸透，略潤(rùn)，切成1～2 mm細(xì)絲，置鍋內(nèi)，炒干，趁熱噴灑白酒，拌勻，稍悶，晾干（每生洋金花100 kg，用生姜25 kg打汁，60°白酒12.5 kg）。目前，《藥典》規(guī)定洋金花含量測(cè)定成分為東莨菪堿[1]，未有相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)制洋金花的炮制工藝優(yōu)化報(bào)道，對(duì)于炮制工藝中“將生洋金花用生姜汁拌勻”中生姜汁加水量及之后進(jìn)行的悶潤(rùn)時(shí)間和“置鍋內(nèi)，炒干”中的炒制溫度和炒制時(shí)間未有明確的參數(shù)，為將其更好地用于臨床，本課題組對(duì)其進(jìn)行最佳炮制工藝探索。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-20AT型高效液相色譜儀（SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器）（日本島津公司）、BP211D型萬(wàn)分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、FN1004N型十萬(wàn)分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、PHS-3C精密數(shù)顯臺(tái)式酸度計(jì)PH計(jì)（上海雷磁儀器有限公司）、RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（BUCHI）、KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、XL-10B型500g密封型搖擺式高速粉碎機(jī)（廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司）、SHZ-D（III）型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）、榨汁機(jī)JYZ-D57（九陽(yáng)）。

1.2 試藥 洋金花（產(chǎn)地安徽）和生姜（產(chǎn)地山東），購(gòu)自南京海源中藥飲片公司，并經(jīng)南京海源中藥飲片有限公司首席質(zhì)量官執(zhí)業(yè)中藥師丁斐鑒定，洋金花Daturae flos為茄科植物白花曼陀羅Datura metel L.干燥花。氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品（成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號(hào)18113008，純度≥98%）。磷酸鈉、十二烷基硫酸鈉、磷酸、鹽酸、濃氨水、三氯甲烷均為分析純，乙腈為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 制洋金花中東莨菪堿含量測(cè)定方法的建立[1]

2.1.1 色譜條件 YMC-Pack ODS-A色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈-0.07 mol/L磷酸鈉溶液（含0.0175 mol/L十二烷基硫酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.0）（50∶[KG-*3/5]100）為流動(dòng)相;流速：1 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)為216 nm;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：10 μL。氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品和供試品的HPLC圖譜如圖1所示。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取氫溴酸東莨菪堿對(duì)照品適量，精密稱定，加“2.1.1項(xiàng)下”流動(dòng)相制成每1 mL含0.679 mg的溶液，即得（東莨菪堿重量=氫溴酸東莨菪堿重量/1.445）。

2.1.3 供試品溶液的制備 取制洋金花樣品粉末（過三號(hào)篩）約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，加入2 mol/L鹽酸溶液10 mL，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，濾過，濾渣和濾器用2 mol/L鹽酸溶液10 mL分?jǐn)?shù)次洗滌，合并濾液和洗液，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9，用三氯甲烷振搖提取4次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加“2.1.1項(xiàng)下”流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL各置于1 mL容量瓶中，加“2.1.1項(xiàng)下”流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，制得13.58、27.16、40.74、54.32、67.90 μg/mL。分別吸取對(duì)照品溶液各10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積值。將所得峰面積（Y）與對(duì)照品的濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得氫溴酸東莨菪堿回歸方程、相關(guān)系數(shù)（R）及線性范圍為Y=12071X+148，R=0.9999，135.8～679 μg/mL。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 取“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄氫溴酸東莨菪堿峰面積和保留時(shí)間值，并計(jì)算RSD值，面積和保留時(shí)間RSD值分別為1.18%、0.66%，說(shuō)明該方法精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 于0、2、4、8、12、24 h精密吸取按“2.1.3”項(xiàng)下制備的供試品溶液10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄氫溴酸東莨菪堿峰面積和保留時(shí)間值，計(jì)算 RSD值，面積和保留時(shí)間RSD值分別為1.77%、1.00%，說(shuō)明供試品溶液在24 h內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 制洋金花樣品粉末混合均勻分成6份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備得供試品溶液，分別吸取10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄氫溴酸東莨菪堿含量和保留時(shí)間值，并計(jì)算RSD值，氫溴酸東莨菪堿平均含量0.15%，含量和保留時(shí)間RSD值分別為1.35%、0.72%，說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 制洋金花樣品粉末9份，每份0.5 g，各加入對(duì)照品溶液0.9、0.9、0.9、1.1、1.1、1.1、1.3、1.3、1.3 mL，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在三氯甲烷溶解蒸干后的殘?jiān)杏昧鲃?dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加“2.1.1項(xiàng)下”流動(dòng)相至刻度。按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積值，計(jì)算回收率以及RSD值，氫溴酸東莨菪堿平均回收率為103.76%，RSD為1.40%，說(shuō)明該方法具有良好的準(zhǔn)確度，具體見表1。

2.2 制洋金花炮制工藝單因素考察

2.2.1 生姜加水量考察 取50 g洋金花樣品，生姜用量12.5 g，榨汁機(jī)打汁后得到生姜汁10 mL，加水量見生姜打汁后加水量考察表，25 ℃下悶潤(rùn)30 min后切碎，炒制溫度190～220 ℃（500 W），炒制時(shí)間5 min，樣品的溫度降到29～30 ℃時(shí)，噴灑60°白酒6.25 g，25 ℃下悶潤(rùn)30 min后晾干。按“2.1”項(xiàng)測(cè)定東莨菪堿含量。生姜打汁后加水量考察見表2。由表2可知，生姜打汁后加水量為2倍生姜汁體積的水（20 mL）、3倍生姜汁體積的水（30 mL）、4倍生姜汁體積的水（40 mL）時(shí)，東莨菪堿含量較高。

2.2.2 悶潤(rùn)時(shí)間考察 取50 g洋金花樣品，生姜用量12.5 g，榨汁機(jī)打汁后得到生姜汁10 mL，加3倍生姜汁體積的水（30 mL），25 ℃下悶潤(rùn)后切碎，悶潤(rùn)時(shí)間見悶潤(rùn)時(shí)間考察表，炒制溫度190～220 ℃（500 W），炒制時(shí)間5 min，樣品的溫度降到29～30 ℃時(shí)，噴灑60°白酒6.25 g，25 ℃下悶潤(rùn)30 min后晾干。按“2.1”項(xiàng)測(cè)定東莨菪堿含量。悶潤(rùn)時(shí)間考察見表3。由表3可知，悶潤(rùn)時(shí)間為30 min、40 min、50 min時(shí)，東莨菪堿含量較高。

2.2.3 炒制溫度考察 取50 g洋金花樣品，生姜用量12.5 g，榨汁機(jī)打汁后得到生姜汁10 mL，加3倍生姜汁體積的水（30 mL），25 ℃下悶潤(rùn)30 min后切碎，炒制溫度見炒制溫度考察表，炒制時(shí)間5 min，樣品的溫度降到29～30 ℃時(shí)，噴灑60°白酒6.25 g，25 ℃下悶潤(rùn)30 min后晾干。按“2.1”項(xiàng)測(cè)定東莨菪堿含量。炒制溫度考察見表4。由表4可知，炒制溫度為100～130 ℃、190～220 ℃、270～300 ℃時(shí)，東莨菪堿含量較高。[KH*1]

2.2.4 炒制時(shí)間的考察 取50 g洋金花樣品，生姜用量12.5 g，榨汁機(jī)打汁后得到生姜汁10 mL，加3倍生姜汁體積的水（30 mL），25 ℃下悶潤(rùn)30 min后切碎，炒制溫度190～220 ℃（500 W），炒制時(shí)間見炒制時(shí)間考察表，樣品的溫度降到29～30 ℃時(shí)，噴灑60°白酒6.25 g，25 ℃下悶潤(rùn)30 min后晾干。按“2.1”項(xiàng)測(cè)定東莨菪堿含量。炒制時(shí)間考察見表5。由表5可知，炒制時(shí)間為5 min、6 min、7 min時(shí)，東莨菪堿含量較高。

2.3 制洋金花炮制工藝正交試驗(yàn)

2.3.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果，取洋金花樣品選擇生姜打汁后加水量（A）、悶潤(rùn)時(shí)間（B）、炒制溫度（C）、炒制時(shí)間（D）為考察因素，以東莨菪堿含量和水分含量評(píng)價(jià)為指標(biāo)，進(jìn)行正交設(shè)計(jì)安排實(shí)驗(yàn)，因素水平見表6。

2.3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果 采用L9（34 ）表安排試驗(yàn)，以東莨菪堿含量和水分含量評(píng)價(jià)為指標(biāo)，制洋金花中水分測(cè)定方法見2015版《中國(guó)藥典》通則0832第二法[7]。以綜合加權(quán)評(píng)分法來(lái)評(píng)價(jià)，評(píng)分方法為東莨菪堿含量占80%，水分含量占20%。東莨菪堿含量和水分含量的滿分均為10分，綜合評(píng)價(jià)=東莨菪堿含量/最大的東莨菪堿含量×10×80%+水分含量評(píng)價(jià)/最大的水分含量評(píng)價(jià)×10×20%。水分含量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如表7，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表8，方差分析見表9。

由方差分析可知，生姜加水量對(duì)于制洋金花的炮制工藝具有顯著性影響，其影響因素重要性為：生姜打汁后加水量>炒制時(shí)間>炒制溫度>悶潤(rùn)時(shí)間。根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，第5組實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)價(jià)最高，其中東莨菪堿含量和水分含量評(píng)價(jià)均為最高值，所以選擇第5組實(shí)驗(yàn)方法為最優(yōu)炮制工藝，即取50 g洋金花樣品，用生姜12.5 g打汁后加3倍生姜汁體積的水（30 mL），25 ℃下悶潤(rùn)40 min后切碎，在270～300 ℃下炒制5 min，29～30 ℃下噴灑6.25 g的60°白酒后，25 ℃下悶30 min，晾干。

2.3.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 采用確定的最優(yōu)炮制工藝條件，取洋金花樣品進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，計(jì)算東莨菪堿含量和水分，3次測(cè)定結(jié)果均優(yōu)于正交試驗(yàn)各工藝結(jié)果，說(shuō)明制洋金花的炮制工藝合理可行，結(jié)果見表10。

3 討論

生姜加水量范圍選擇，潤(rùn)透洋金花藥材考察得出，低于2倍生姜汁體積的水（20 mL），洋金花藥材沒有潤(rùn)濕完全，高于5倍生姜汁體積的水（50 mL），洋金花藥材過于潤(rùn)濕，有滴水現(xiàn)象。對(duì)炮制工藝中的噴灑60°白酒進(jìn)行考察，選取藥材溫度和噴灑60°白酒后的藥材悶潤(rùn)時(shí)間進(jìn)行考察，藥材溫度過高時(shí)噴灑過白酒的藥材進(jìn)行悶潤(rùn)，白酒揮發(fā)快，本項(xiàng)炮制工藝消耗時(shí)間短，結(jié)果酒味淡;藥材溫度過低時(shí)噴灑過白酒藥材悶潤(rùn)后，白酒揮發(fā)慢，本項(xiàng)炮制工藝消耗時(shí)間長(zhǎng)，結(jié)果酒味濃。本項(xiàng)炮制工藝優(yōu)選藥材溫度降到29～30 ℃時(shí)，噴灑60°白酒，25 ℃下悶潤(rùn)30 min后晾干，使炮制后的飲片有酒香氣，同時(shí)本項(xiàng)炮制工藝用時(shí)短，展示出本項(xiàng)炮制工藝效率。

在制洋金花的單因素考察中選取東莨菪堿含量為指標(biāo)，但在炮制過程中發(fā)現(xiàn)雖然水分在上海市中藥飲片炮制規(guī)范[6]中沒有明確規(guī)定，但其會(huì)影響貯藏時(shí)間、外觀等方面，在正交試驗(yàn)中以水分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以2015版《中國(guó)藥典》對(duì)洋金花水分[1]規(guī)定的不超過11%為上限，下限不低于5%，制洋金花炒制后表面太干燥，水分含量太少，外觀變形難識(shí)別，造成其性狀鑒別難度。

洋金花作為一種毒性藥材，臨床上多有不良反應(yīng)報(bào)道，本項(xiàng)研究對(duì)制洋金花進(jìn)行炮制工藝研究，運(yùn)用正交試驗(yàn)對(duì)制洋金花的炮制工藝研究，為其他研究工作者提供制洋金花的炮制工藝參考，提高制洋金花的內(nèi)在質(zhì)量穩(wěn)定性，同時(shí)在建立藥材內(nèi)在質(zhì)量穩(wěn)定性的情況下，才有藥材功效和毒性的穩(wěn)定性。優(yōu)化制洋金花的炮制工藝有利于其質(zhì)量控制和臨床用藥安全，下一步將開展制洋金花的毒性試驗(yàn)研究，同時(shí)查找出制洋金花中的毒性標(biāo)記物成分。

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（收稿日期：2020-10-19 編輯：程鵬飛）