2020年新疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測(cè)與分析

王紫陽(yáng) 屈勇剛* 孫瓊飛 黨瑞瑩 周海琴 張小玉 張家瑞 常軍帥 李 巖

（1石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆烏魯木齊 830063）

豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine Reporductive and Respiratory Syndrome,PRRS），俗稱藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）引起的高度接觸性傳染病，主要表現(xiàn)為以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸系統(tǒng)疾病為主要特征的病毒性疾病[1]。PRRS被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必報(bào)傳染病，我國(guó)將其列為二類動(dòng)物傳染病，在2008年我國(guó)規(guī)定其為強(qiáng)制免疫病種[3]。此病1987年在美國(guó)的中西部首次被發(fā)現(xiàn)，隨后在加拿大、德國(guó)、法國(guó)、荷蘭等國(guó)家相繼出現(xiàn)，此后該病在世界各國(guó)相繼發(fā)生和流行，給養(yǎng)豬企業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。1996年豬繁殖與呼吸障礙綜合征在我國(guó)大陸地區(qū)的豬場(chǎng)發(fā)生并趨于流行，2006年該病毒出現(xiàn)變異，引起成年豬出現(xiàn)發(fā)熱、呼吸障礙以及大量急性死亡，被稱為“高致病性藍(lán)耳病”[2]。目前，我國(guó)所有豬群幾乎存在此病，是威脅養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的最嚴(yán)重的疫病之一。此病沒(méi)有非常有效的治療方法，豬群免疫效果的評(píng)價(jià)以及補(bǔ)免工作的開(kāi)展在PRRS防控中起到了積極的作用[4,5]。

為進(jìn)一步了解新疆部分地區(qū)PRRS的免疫抗體水平，本試驗(yàn)從新疆6個(gè)地區(qū)（石河子、奎屯、阿克蘇、巴州、塔城、伊寧）的10個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)采集血液樣品1 218份。用豬繁殖與呼吸障礙綜合征ELISA抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)和結(jié)果分析，以期為豬場(chǎng)的免疫效果提供參考，為后續(xù)制定或調(diào)整免疫程序提供可靠依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

2020年1月至12月期間從新疆6個(gè)地區(qū)（石河子、奎屯、阿克蘇、巴州、塔城、伊寧）的10個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)采集血液樣品1 218份。其中包括不同類型的豬群（保育豬139份、哺乳仔豬165份、育肥豬161份、后備豬223份、種公豬200份、繁殖母豬330份）。

1.2 材料與儀器

PRRSV的ELISA試劑盒（北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司），自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司生產(chǎn)），一次性5 mL獸用采血針（武漢民生醫(yī)用器械有限公司生產(chǎn)），微量移液器（Eppendorf）。

1.3 方法

1.3.1 血液樣品的處理

用一次性獸用采血器從待檢豬只的前腔靜脈一次性采血（3～5 mL/頭），在室溫下靜置待血清析出，將析出的血清收集于EP管內(nèi)放在4℃冰箱，作為待檢血清。

1.3.2 間接ELISA檢測(cè)法

試驗(yàn)嚴(yán)格按照PRRSV的抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，使用前將所有試劑恢復(fù)至18～26℃。使用前先將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水10倍稀釋，用樣品稀釋液40倍稀釋待檢樣品。取出抗原包被板，將100 μL沒(méi)有稀釋的陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照加入孔內(nèi)，各加2孔。在相應(yīng)的孔中加入100 μL已稀釋好的樣品，于18～26℃條件下孵育30 min。用洗滌液洗滌3～5次后，每孔加入100 μL酶標(biāo)抗體，在18～26℃條件下再次孵育30 min，洗滌3～5次，拍干各孔內(nèi)殘留的洗滌液。每孔加入100 μL TMB底物液，孵育15 min，每孔加入100 μL終止液，終止反應(yīng)，置于酶標(biāo)儀中，測(cè)定OD650nm值，記錄并保存數(shù)據(jù)。

1.3.3 結(jié)果判定

本試驗(yàn)成立必須滿足2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照的平均OD650nm值與2個(gè)陰性對(duì)照的平均OD650nm值的差≥0.150，且陰性對(duì)照的平均 OD650nm值≤0.150。S/P≥0.40為陽(yáng)性，S/P＜0.40為陰性。（其中S＝樣品OD650nm值－陰性對(duì)照OD650nm平均值；P＝陽(yáng)性對(duì)照OD650nm－陰性對(duì)照OD650nm平均值）。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)結(jié)果

使用SPSS軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算PRRSV抗體的S/P平均值、陽(yáng)性率、陰性率、標(biāo)準(zhǔn)差以及各類別豬群抗體的離散度（離散度用變異系數(shù)表示，變異系數(shù)＝（標(biāo)準(zhǔn)差÷S/P平均值）×100%）[6]。

2 結(jié)果

2.1 各豬場(chǎng)PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果

由表1可知，10個(gè)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)（用A～J表示）的1 218份血液樣品中，有956份血清呈PRRSV抗體陽(yáng)性，平均陽(yáng)性率為78.49%，S/P的平均值是（1.22±0.84），變異系數(shù)為69.45%。除C場(chǎng)以外，其余9個(gè)豬場(chǎng)抗體陽(yáng)性率均高于70.00%，其中G場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率最高，達(dá)到了95.38%。在A～J豬場(chǎng)中，變異系數(shù)最高的C場(chǎng)達(dá)到了134.85%，最低的是I場(chǎng)，其變異系數(shù)為47.36%。A場(chǎng)與B、C、D、F、G、H、I、J場(chǎng)，存在顯著差異（P＜0.05），B場(chǎng)與D、F2個(gè)場(chǎng)差異不顯著（P＞0.05）。

表1 新疆地區(qū)10個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同類別豬群PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)不同類別豬群PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)：哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、種公豬、繁殖母豬的抗體陽(yáng)性率分別為72.73%、87.77%、78.88%、59.19%、91.50%、80.61%。除后備豬外，其余類別豬群抗體陽(yáng)性率均達(dá)到70.00%以上，其中種公豬的抗體陽(yáng)性率最高，其次是保育豬群，抗體陽(yáng)性率最低的為后備豬群，僅有59.19%。不同類別豬群之間PRRSV平均抗體水平存在一定差異，種公豬與哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、繁殖母豬之間存在顯著差異（P＜0.05），保育豬、育肥豬和繁殖母豬之間差異不顯著（P＞0.05） （表 2）。

3 結(jié)果與討論

3.1 各豬場(chǎng)PRRSV免疫效果評(píng)價(jià)

通過(guò)對(duì)新疆地區(qū)10個(gè)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)1 218份血清樣品進(jìn)行豬繁殖與呼吸障礙綜合征ELISA檢測(cè)得知，有956份血清樣品檢測(cè)呈陽(yáng)性，平均抗體陽(yáng)性率為78.94%，高于國(guó)家規(guī)定的70%抗體水平標(biāo)準(zhǔn)[7]。其中G場(chǎng)和H場(chǎng)抗體合格率達(dá)90%以上，達(dá)到了規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)控制PRRS疫情的水平[8]。與2019年常軍帥等[6]檢測(cè)到新疆部分地區(qū)豬場(chǎng)PRRSV平均抗體陽(yáng)性率92.82%相比，2020年抗體陽(yáng)性率出現(xiàn)下降。C場(chǎng)豬群的抗體檢測(cè)陽(yáng)性率僅為31.30%，未能達(dá)到國(guó)家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)。以上結(jié)果都應(yīng)該引起豬場(chǎng)管理人員的重視，及時(shí)對(duì)陰性豬只進(jìn)行疫苗補(bǔ)免，1月后再次采血檢測(cè)抗體，若仍為陰性，則進(jìn)行淘汰，以免造成更大的損失[9]。同時(shí)，應(yīng)根據(jù)抗體檢測(cè)結(jié)果對(duì)豬群已有的免疫程序進(jìn)行優(yōu)化，及時(shí)找出抗體陽(yáng)性率不高的內(nèi)在原因，如果是疫苗問(wèn)題，應(yīng)嚴(yán)格對(duì)豬場(chǎng)疫苗進(jìn)行把關(guān)，掌握正確的疫苗儲(chǔ)存方式，對(duì)疫苗的注射劑量進(jìn)行嚴(yán)格的把控，對(duì)參與免疫操作的相關(guān)人員進(jìn)行培訓(xùn)，找出原因及時(shí)解決。以保障豬群的健康發(fā)展，獲得更大的養(yǎng)殖效益。

3.2 不同類別豬群PRRSV免疫抗體的差異

通過(guò)對(duì)不同類別豬群PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果分析得知，各類別豬群的抗體水平存在一定差異。種公豬的抗體陽(yáng)性率最高，高達(dá)91.50%；后備豬群的抗體陽(yáng)性率最低，接近于59.19%，后備豬群作為養(yǎng)殖場(chǎng)未來(lái)的繁育母豬，做好疫苗免疫以及抗體水平的監(jiān)測(cè)至關(guān)重要，后備豬群的優(yōu)劣，直接關(guān)系到豬群的繁育效果，只有養(yǎng)出健康的后備豬，才能繁育出健康的仔豬[10]。對(duì)不同類別豬群的變異系數(shù)觀察得知，其變異系數(shù)均高于國(guó)家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于陽(yáng)性抗體變異系數(shù)小于40%之規(guī)定[7]，說(shuō)明這些類別的豬群PRRSV免疫抗體水平整齊度不高，需對(duì)免疫程序進(jìn)行優(yōu)化，為豬群的健康打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

北部區(qū)8省 （區(qū)、市）印發(fā)分區(qū)防控實(shí)施方案

據(jù)哈爾濱新聞網(wǎng)2021年6月5日?qǐng)?bào)道，遼寧、北京、天津、河北、山西、內(nèi)蒙古、吉林、黑龍江8省（區(qū)、市）聯(lián)合印發(fā)了《北部區(qū)非洲豬瘟等重大動(dòng)物疫病分區(qū)防控實(shí)施方案（試行）》 （以下簡(jiǎn)稱《方案》），北部區(qū)8省（區(qū)、市）分區(qū)防控框架合作協(xié)議同時(shí)生效。經(jīng)協(xié)商，遼寧省為北部區(qū)首輪牽頭省份。根據(jù)《方案》規(guī)定，北部區(qū)將建立分區(qū)防控聯(lián)席會(huì)議制度，統(tǒng)籌推進(jìn)北部區(qū)非洲豬瘟等重大動(dòng)物疫病分區(qū)防控工作。聯(lián)席會(huì)議由北部區(qū)8省（區(qū)、市）政府分管負(fù)責(zé)同志作為成員，牽頭省份政府分管負(fù)責(zé)同志擔(dān)任召集人。分區(qū)防控聯(lián)席會(huì)議辦公室設(shè)在輪值省份農(nóng)業(yè)農(nóng)村（畜牧獸醫(yī)）部門(mén)，該部門(mén)主要負(fù)責(zé)同志為主任，成員由大區(qū)內(nèi)各省級(jí)農(nóng)業(yè)農(nóng)村（畜牧獸醫(yī)）部門(mén)分管負(fù)責(zé)同志等組成。