2020年新疆地區規模化豬場豬PCV2抗體檢測與分析

黨瑞瑩 張小玉 王紫陽 孫瓊飛 常軍帥 屈勇剛*李 巖

（1石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；2動物疾病防控兵團重點實驗室，新疆石河子 832003；3新疆生產建設兵團畜牧獸醫工作總站，新疆烏魯木齊 830063）

豬圓環病毒屬于圓環病毒科、圓環病毒屬的DNA病毒，本病最早發現于20世紀70年代。迄今為止，豬圓環病毒共有3種血清型，為PCV1、PCV2、PCV3[1]。PCV1無致病性，PCV2有著強致病性[2]。PCV3主要侵害幼齡豬，臨床表現呈多樣性。PCV2是圓環病毒科一種無包膜、共價閉合、呈環狀排列的單鏈DNA病毒，直徑為14～25 nm，是已知的最小的動物病毒之一[3]。PCV2可致不同生長階段的豬只發病，會嚴重損害豬的免疫系統，引起豬的免疫抑制。嚴重影響豬群的生長繁殖，且易繼發多種豬傳染病，包括豬呼吸道病綜合征（PRDC）、豬增生性和壞死性肺炎（PNP）、豬多系統衰竭綜合征（PMWS）、豬呼吸道病和母豬繁殖障礙等[4]。疫苗接種是本病預防控制的主要措施之一，抗體檢測是保障疫苗免疫效果的關鍵。為了解2020年新疆地區規模化豬場PCV2免疫抗體水平，本試驗選擇新疆地區6個規模化豬場，針對不同日齡段的豬采集血清樣品，采用PCV2 ELISA抗體檢測方法進行抗體檢測分析，以期為該地區PCV2的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

試驗樣品來自新疆地區6個規模化豬場（A、B、C、D、E、F）不同日齡段的豬，共采集血清樣品333份。其中，哺乳仔豬血清80份，保育豬血清49份、育肥豬血清39份，后備豬血清34份，經產母豬血清104份，種公豬血清27份。

1.2 材料和儀器

豬圓環病毒Ⅱ型抗體酶免檢測試劑盒（哈爾濱元亨生物藥業有限公司）、自動酶標儀（美國 Bio Tek）、微量移液槍（Eppendorf公司）、一次性獸用采血器（5 mL）、恒溫培養箱等。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品采集

每頭豬用5 mL的一次性獸用采血器一次性從豬的前腔靜脈采血3～5 mL，分組做好標記。室溫下靜置待血液凝固后，放置有冰袋的采樣箱里，帶回實驗室進行血清分離。

1.3.2 檢測方法

將濃縮的洗滌液恢復至室溫并搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。在抗原反應板的待檢樣品孔中直接加入80 μL樣品稀釋液后再加入20 μL的待檢樣品。陰陽對照原液不稀釋直接加100 μL于待檢孔中。微量振蕩器上充分混勻5～10 s后，貼上封板膜，置恒溫箱中37℃孵育30 min，重復洗滌 5次后，加入酶結合物 100 μL，貼上封板膜，置37℃孵育30 min，洗滌5次。隨即加入底物液A 50 μL，再加入底物液B 50μL，輕輕震蕩混勻，置37℃避光顯色15 min。加入終止液50 μL，輕輕震蕩混勻，置酶標儀450 nm波長處測定各孔OD450值。

1.3.3 試驗結果判定

試驗結果同時符合陰性對照OD450值≤0.15，陽性對照OD450值≥0.60。計算臨界值：陽性對照OD450值×0.25。當被檢樣品OD450值小于臨界值時，為PCV2抗體陰性，大于或等于臨界值時為PCV2抗體陽性。

1.3.4 試驗結果分析

用SPSS 20.0統計分析軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 不同地區豬場豬圓環病毒2型抗體檢測結果

6家豬場共333份豬血清，有258份呈PCV2抗體陽性，平均陽性率為77.78%，OD450平均值為1.07。具體見表1。規模化豬場A、B、C、D、E、F的PCV2抗體陽性率分別為100.00%、53.13%、48.78%、85.71%、96.43%、72.50%。其中，A場的抗體陽性率最高為100.00%，但OD450平均值最高的是E場，為1.43。C場抗體陽性率最低為48.78%。A～F豬場檢測的 OD450平均值分別為：1.40、0.82、0.79、1.09、1.43、0.71。使用SPSS軟件進行單因素分析的結果表明A場和E場與B、C、D、F等4個場的抗體水平差異顯著（P＜0.05）。F場與A、D、E等3個場的抗體水平差異顯著（P＜0.05）。

表1 新疆地區6個規模化豬場PCV2抗體檢測結果

2.2 試驗豬場不同類別豬群的PCV2抗體水平

不同類別豬群的PCV2抗體水平見表2。哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經產母豬、種公豬的PCV2抗體陽性率分別為67.5%、48.98%、89.74%、88.24%、86.54%、96.30%。其中，種公豬的抗體陽性率最高（96.30%），保育豬的抗體陽性率最低（47.92%）。哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經產母豬、種公豬的PCV2抗體OD450平均值分別為：0.91、0.65、1.44、0.84、1.21、1.55。使用SPSS軟件進行單因素分析的結果表明：種公豬與哺乳仔豬、保育豬、后備母豬和經產母豬的抗體水平差異顯著（P＜0.05）。經產母豬與哺乳仔豬、保育豬、后備母豬、種公豬抗體水平差異顯著（P＜0.05）。

表2 新疆地區6個規模化豬場不同日齡豬PCV2抗體檢測結果

3 討論

3.1 整體豬群的PCV2抗體水平分析

試驗共采集333份血清樣本，陽性樣品為258份，陽性率為77.78%。張家瑞等[5]在2019年對新疆部分地區5家規模化豬場檢測PCV2抗體，其平均陽性率為70.71%；劉秀清等[6]對西寧市部分規模化豬場檢測PCV2抗體，平均陽性率為71.23%。馬超峰等[7]對信陽部分規模化豬場檢測PCV2抗體，平均陽性率為75.7%。顧紹鋒等[8]對云南富源縣部分規模化豬場進行PCV2抗體檢測，平均陽性率為88.21%。以上結果表明，2020年新疆地區PCV2抗體水平與2019年相比有所提高，與大部分地區的抗體水平相當，較少地區的免疫抗體水平較低。在試驗中，6家規模化豬場中有4家豬場的PCV2抗體陽性率在國家規定標準（70%）以上，只有2個豬場抗體陽性率低于國家標準。A場的抗體陽性率最高為100.00%，C場抗體陽性率最低為48.78%。其中A、D、E、F等4個PCV2抗體陽性率均高于國家規定水平（＞70%），但B場和C場PCV2型抗體平均陽性率（53.13%、48.78%）均低于國家規定水平，且差異較大。PCV2的免疫效果受諸多因素干擾，飼養管理水平、疫苗效力、免疫時間等都會影響抗體陽性率。因此，對于免疫效果不理想的豬場，需查明原因，優化免疫程序的同時提高飼養管理水平，加強生物安全措施。

3.2 不同類別豬的PCV2抗體水平分析

此次檢測發現保育豬的抗體水平最低，同時保育仔豬階段也是PCV2的高發期，所以需優化免疫程序，確保該階段仔豬的抗體維持在有效保護水平。種公豬的PCV2抗體水平高達100.00%，有的可能是野毒感染或者反復免疫的結果，建議通過病原學檢測排出野毒感染的可能。哺乳仔豬的PCV2抗體陽性率僅為67.50%，未達到70.00%的標準，該日齡段仔豬本身攜帶母源抗體，但相對日齡大一些的哺乳仔豬母源抗體水平比較薄弱，所以抗體水平不高，可在這一階段根據豬場不同情況選取較合適的免疫日齡來改進；亦可通過懷孕母豬的加強免疫提高母源抗體的水平和維持時間。

4 小結

豬圓環病毒病在我國養豬場普遍流行，很難凈化。因此，做好預防接種極為重要，要加強飼養管理，根據各豬場情況建立完善的免疫接種計劃，及時對抗體水平進行檢測評估，對免疫水平不達標的，及時進行補免以維持在有效保護水平。