脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液氨基酸注射液中吲哚-3-甲醛的測定

王靜，姜凌娟

分析檢測

脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液氨基酸注射液中吲哚-3-甲醛的測定

王靜，姜凌娟

（遼寧海思科制藥有限公司沈陽分公司，遼寧 沈陽 110179）

目的：建立脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液中氨基酸注射液吲哚-3-甲醛的測定方法。方法：采用HPLC法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸二氫鈉緩沖液（取磷酸二氫鈉約3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加2.9 g·L-1磷酸溶液約700 mL并以此磷酸溶液調pH值至2.3）-乙腈（88.5∶11.5）為流動相A，以磷酸二氫鈉緩沖液（pH2.3）-乙腈（65∶35）為流動相B，柱溫40 ℃，采用梯度洗脫，檢測波長298 nm。結果：在5.079 99～1 472.460 00 ng·mL-1范圍內，吲哚-3-甲醛的濃度與峰面積之間線性關系良好；該方法的重復性和準確度的 RSD 值分別為0%、0.70%。結論：該方法專屬性、重現性、準確度良好，可用于脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液中氨基酸注射液吲哚-3-甲醛的測定。

吲哚-3-甲醛；HPLC法；氨基酸注射液

腸外營養支持是維持因各種原因不能進食或經腸道攝入能量不足患者生命需要的必要手段。脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液主要用于不能或功能不全或被禁忌經口/腸道攝取營養的成人患者，可提供營養支持，以維持機體氮平衡所需的氮量，碳水化合物和必需脂肪酸[1]，是臨床廣泛應用的靜脈營養復合制劑。

脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液處方組成復雜，含有包括色氨酸在內的17種氨基酸等。色氨酸屬于必需氨基酸，參與人體各項生理過程，調節機體的神經系統及免疫功能[2-7]。在貯藏過程中，色氨酸會氧化降解產生吲哚-3-甲醛，攝入體內的色氨酸也會沿吲哚丙酮酸代謝通路代謝為吲哚-3-甲醛、吲哚乙酸等，對人體健康至關重要[8]。對吲哚甲醛的檢測目前報道較少，主要是液質聯用法。通過對比美國藥典、歐洲藥典、英國藥典等收載的各種氨基酸原料的檢測方法，歐洲藥典對色氨酸雜質的檢測相對完整，其收錄的色氨酸原料的雜質從合成過程中引入的雜質和降解雜質共有12個，并對其中的雜質A采用HPLC法檢測[9-12]。在參考文獻的基礎上[13-14]，本研究進一步優化色譜條件，建立了一種專屬性更強的方法檢測制劑中色氨酸的降解雜質吲哚-3-甲醛，為類似的制劑產品開發提供了一種有效的質量控制和評價手段。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀（Agilent）、PB-10 pH計（Sartorius）、SQP電子天平（Sartorius）、吲哚-3-甲醛對照品（Sigma，批號：STBH5988）、磷酸二氫鈉、乙腈。

1.2 供試品

脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液氨基酸腔袋藥液（費森尤斯卡比華瑞制藥有限公司，批號：80ND320）。

1.3 實驗方法

1.3.1 操作步驟

精密量取本品2 mL，置10 mL量瓶中，以10%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取吲哚-3-甲醛對照品約12.5 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，精密量取上述溶液3 mL，置50 mL量瓶中，以10%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，作為吲哚-3-甲醛對照品貯備液；精密量取上述對照品貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，以10%乙腈溶液稀釋至刻度，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（中國藥典2020年版四部通則0512）測定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（例如Inertsil ODS-3 4.6×250 mm，5 μm或效能相當的色譜柱）；以磷酸二氫鈉緩沖液（取磷酸二氫鈉約3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加2.9 g·L-1磷酸溶液約700 mL并以此磷酸溶液調pH值至2.3）-乙腈（88.5∶11.5）為流動相A，以磷酸二氫鈉緩沖液（pH2.3）-乙腈（65∶35）為流動相B，按下表進行梯度洗脫；流速為每分鐘0.7 mL；檢測波長為298 nm，柱溫40 ℃。

精密量取本品2 mL，置10 mL量瓶中，加入吲哚-3-甲醛對照品貯備液1 mL，以10%乙腈溶液稀釋至刻度，作為系統適用性溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，吲哚-3-甲醛峰與相鄰色譜峰的分離度應大于1.0。精密量取對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如有與吲哚-3-甲醛峰保留時間一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算吲哚-3-甲醛含量。

1.3.2 方法學考察

1.3.2.1 專屬性

按處方配制除色氨酸以外的陰性樣品，取樣品和陰性樣品分別于酸、堿、氧化、高溫、光照條件下破壞，按照1.3.1中色譜條件與測定法測定。

1.3.2.2 線性

取吲哚-3-甲醛對照品適量，用乙腈溶解，以10%乙腈溶液稀釋制成含吲哚-3-甲醛約為

7.5 μg·mL-1的對照貯備液，分別量取對照品貯備液適量，以10%乙腈溶液分別稀釋成含吲哚-3-甲醛約為0.15、0.375、0.75、1.125、1.5 μg·mL-1的線性溶液，此5溶液及定量限濃度溶液，組成有關線性的6個濃度點，分別精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算標準曲線方程。

1.3.2.3 溶液穩定性

按照1.3.1中操作步驟，制備對照品溶液和供試品溶液。取對照品溶液分別于0、4、7、10、13、16、19、25、31 h取樣20 μL檢測；取供試品溶液分別于0、3、6、9、12、15、21、27、30 h取樣

20 μL檢測，記錄色譜圖，計算峰面積RSD，考察對照溶液和供試液的穩定性。

1.3.2.4 重復性試驗

按照1.3.1中操作步驟，制備對照品貯備液和對照品溶液。精密量取本品2 mL，置10 mL量瓶中，加入對照品貯備液，用10%乙腈溶液稀釋成含吲哚-3-甲醛約為0.75 μg·mL-1的溶液，作為加標供試品溶液，平行配制6份。精密量取對照品溶液、加標供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算6份加標供試品中吲哚-3-甲醛含量的相對標準偏差（RSD%）。

1.3.2.5 準確度試驗

按照1.3.1中操作步驟，制備對照品貯備液和對照品溶液。精密量取本品2 mL，分別置9個10 mL量瓶中，分別加入對照品貯備液0.5、1、1.5 mL，以10%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。每個濃度平行配制3份。精密量取對照品溶液、加標供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算9份回收率和其相對標準偏差（RSD）。

2 結果與分析

2.1 專屬性

按處方配制除色氨酸以外的陰性樣品，取樣品和陰性樣品分別于酸、堿、氧化、高溫、光照條件下破壞，按照1.3.1中色譜條件與測定法測定。由圖1-圖12可見，本品在酸、堿、氧化、高溫和光照條件下，破壞后產生的降解產物均對吲哚-3-甲醛的測定無干擾。

圖1 未破壞陰性樣品

圖2 酸破壞陰性樣品

圖3 堿破壞陰性樣品

圖4 氧化破壞陰性樣品

圖5 高溫破壞陰性樣品

圖6 光照破壞陰性樣品

圖7 未破壞樣品

圖8 酸破壞樣品

圖9 堿破壞樣品

圖10 氧化破壞樣品

圖12 光照破壞樣品

2.2 線性

取吲哚-3-甲醛對照品適量，用乙腈溶解，以10%乙腈溶液稀釋制成含吲哚-3-甲醛約為7.5 μg·mL-1的對照貯備液，分別量取對照品貯備液適量，以10%乙腈溶液分別稀釋成含吲哚-3-甲醛約為0.15、0.375、0.75、1.125、1.5 μg·mL-1的線性溶液，此5溶液及定量限濃度溶液，組成有關線性的6個濃度點，分別精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算標準曲線方程。結果表明，吲哚-3-甲醛進樣濃度在5.079 99～1 472.460 00 ng·mL-1范圍內，吲哚-3-甲醛濃度與峰面積呈良好的線性關系，其線性方程為= 0.148 54-0.064 52，=0.999 9。

圖13 吲哚-3-甲醛標準曲線

2.3 溶液穩定性

取對照品溶液分別于0、4、7、10、13、16、19、25、31 h取樣20 μL檢測；取供試品溶液分別于0、3、6、9、12、15、21、27、30 h取樣20 μL檢測，記錄色譜圖，計算峰面積RSD，對照品溶液峰面積RSD為1.20%，供試品溶液峰面積RSD為0。表明對照品溶液在31 h內、供試品溶液在30 h內穩定。

表1 溶液穩定性試驗結果

2.4 重復性

按照1.3.1中操作步驟，平行制備6份加標供試品溶液，分別測定，計算供試品中吲哚-3-甲醛含量并計算RSD值，結果表明，該方法重復性良好。具體結果見表2。

表2 重復性試驗結果

2.5 準確度

按照1.3.1中操作步驟，制備對照品貯備液和對照品溶液。精密量取本品2 mL，分別置9個10 mL量瓶中，分別加入對照品貯備液0.5、1、1.5 mL，以10%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。每個濃度平行配制3份。精密量取對照品溶液、加標供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算9份回收率和其相對標準偏差（RSD）。結果表明，該方法回收率高，滿足分析測定的要求。具體結果見表3。

表3 回收率試驗結果

3 結論

根據色氨酸的降解雜質吲哚-3-甲醛結構特征并參考色氨酸其他類似雜質的檢測條件，優選十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，磷酸鹽乙腈緩沖系統為色譜條件，建立了建立脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液中氨基酸注射液吲哚-3-甲醛的測定方法。

試驗結果表明，在酸、堿、氧化、高溫和光照條件下，破壞后產生的降解產物均對脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液中氨基酸注射液吲哚-3-甲醛的測定無干擾，方法專屬性良好。同時方法線性范圍廣、回收率高且重現性好。該方法樣品前處理程序簡單，操作便捷，可用于脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液中氨基酸注射液吲哚-3-甲醛的測定。同樣也為復方氨基酸注射液中色氨酸雜質研究提供了參考。

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Determination of Indole-3-carboxaldehyde in Amino Acid Injection of Fat Emulsion, Amino Acids(17)and Glucose(11%) Injection

,

（Liaoning Haisco Pharmaceutical Co., Ltd., Shenyang Branch, Shenyang Liaoning 110179, China）

In order to establish a method for determination of indole-3-carboxaldehyde in fat emulsion,amino acid(17) and glucose(11%)injection, HPLC was used to determine the sample by using octadecysilyl silica gel as column, sodium dihydrogen phosphate buffer（pH=2.3）and acetonitrile (volume ratio 88.5∶11.5) as mobile phase A, sodium dihydrogen phosphate buffer（pH=2.3）and acetonitrile (volume ratio 65∶35) as mobile phase B, column temperature 40 ℃,gradient elution, detection wavelength 298 nm. The results showed that the method was a good linear between the mass concentration of indole-3- carboxaldehyde and peak area at the range of 5.079 99～1 472.460 00 ng·mL-1.The RSD values of the reproducibility test and the recovery rate test were 0, 0.70%, respectively. The method has good specificity, reproducibility and accuracy, and can be used to determine the indole-3-carboxaldehyde in aminic acid injectionc of fat emulsion, amino acids(17)and glucose(11%) injection.

Indole-3-carboxaldehyde; HPLC; Aminic acid injection

2021-04-27

王靜（1982-），女，遼寧省沈陽市人，工程師（藥學），碩士，2009年沈陽藥科大學藥劑學專業，研究方向：藥品研發、生產。

TQ46

A

1004-0935（2021）06-0907-05