絲線結(jié)扎誘導(dǎo)種植體周圍黏膜炎的實(shí)驗(yàn)研究

蔡榕 王新革 王金 雷家琪 張照欣 李德華

種植術(shù)后并發(fā)癥是種植失敗的一個(gè)主要原因，分為種植體周圍黏膜炎和種植體周圍炎。種植體周圍黏膜炎的病變局限于黏膜，不伴隨進(jìn)行性邊緣骨吸收［1］，患病率約為 43%～50%［1－2］。種植體周圍炎的病變突破軟組織封閉，伴隨邊緣骨吸收［3］，患病率約為12%～40%［1］。種植體周圍黏膜炎不治療可能發(fā)展成種植體周圍炎，治療則可能恢復(fù)健康［4］。由于種植體周圍炎缺乏有效的治療方法，所以早期診斷、治療種植體周圍黏膜炎，防止其進(jìn)一步發(fā)展至關(guān)重要［5］。

在動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)種植體周圍黏膜炎是研究其防治的基礎(chǔ)，主要方法為菌斑自然堆積法和絲線結(jié)扎輔助菌斑堆積法。Martins等［4］發(fā)現(xiàn)菌斑自然堆積6周后比格犬出現(xiàn)種植體周圍黏膜炎，17周后出現(xiàn)種植體周圍炎；Berglundh等［6］通過(guò)菌斑堆積3周在比格犬口內(nèi)誘導(dǎo)了種植體周圍黏膜炎，在作者的另一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，菌斑堆積90 d后種植體周圍黏膜炎狀態(tài)仍然持續(xù)［7］?？梢?jiàn)菌斑自然堆積法誘導(dǎo)種植體周圍黏膜炎的時(shí)效性不佳，且誘導(dǎo)時(shí)間不易控。

Trejo等［8］通過(guò)絲線結(jié)扎輔助菌斑堆積法在恒河猴口內(nèi)誘導(dǎo)了種植體周圍黏膜炎，作者用絲線在種植體周圍結(jié)扎1周后取出，待菌斑自然堆積2周后再用絲線結(jié)扎3周，但未說(shuō)明絲線結(jié)扎的位置，若絲線結(jié)扎在齦溝內(nèi)，則可能破壞種植體周圍軟組織封閉，引發(fā)異物反應(yīng)，誘導(dǎo)種植體周圍炎，且多次操作增加了動(dòng)物麻醉的風(fēng)險(xiǎn)。Schou等［9］通過(guò)齦緣絲線結(jié)扎3周在食蟹猴口內(nèi)誘導(dǎo)了種植體周圍黏膜炎，但缺乏對(duì)結(jié)果的全面評(píng)估。

本實(shí)驗(yàn)擬采用頸緣絲線結(jié)扎輔助菌斑堆積法誘導(dǎo)種植體周圍黏膜炎，并通過(guò)口內(nèi)檢查、探診、齦溝液檢測(cè)、影像學(xué)檢查證明其可靠性，為種植體周圍黏膜炎的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 基本材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 12月齡雄性比格犬3只，體重13 kg左右（成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司）。本實(shí)驗(yàn)已通過(guò)第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審批。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 速眠新 II（吉林圣達(dá)動(dòng)物藥品有限公司）；戊巴比妥鈉（第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心）；復(fù)方鹽酸阿替卡因注射液（碧蘭公司，法國(guó)）；種植體（TL，LN，3.3 mm×8 mm，江蘇創(chuàng)英醫(yī)療器械有限公司）；愈合帽（1.5 mm，江蘇創(chuàng)英醫(yī)療器械有限公司）；種植機(jī)（西諾普公司，瑞士）；0.25 N壓力敏感探針（科爾公司，瑞士）；30號(hào)吸潮紙尖（北京達(dá)雅鼎醫(yī)療器械有限公司）；3－0絲線（上海金環(huán)醫(yī)療用品股份有限公司）；數(shù)字化牙片機(jī)（西諾德有限公司，德國(guó)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 牙拔除術(shù) 比格犬術(shù)前8～12 h禁食禁水，于臀大肌注射速眠新 II（0.1 mL/kg）與 2.5%戊巴比妥鈉溶液（0.5 mL/kg）進(jìn)行麻醉。用1%碘伏進(jìn)行口內(nèi)消毒，碧蘭麻進(jìn)行局部浸潤(rùn)麻醉，微創(chuàng)拔除比格犬下頜第二至四前磨牙，間斷縫合。術(shù)后3 d皮下注射安痛定（0.2 mL/kg，1次/d），術(shù)后 1周皮下注射青霉素（10 000 U/kg，1次/d）。

1.2.2 種植體植入術(shù) 愈合3個(gè)月后行種植體植入術(shù)，麻醉及用藥同前。翻開(kāi)黏骨膜瓣，平整骨面，逐級(jí)備洞，下頜每側(cè)植入3顆種植體，植入扭矩為35 N·cm，種植體的粗糙面上緣與骨面齊平，種植體之間和與牙之間距離7 mm，安裝愈合帽，間斷縫合。術(shù)后軟食喂養(yǎng)，種植體和其余牙每周刷3次。

1.2.3 分組 使用SPSS 22.0軟件生成隨機(jī)數(shù)組，將每只比格犬的左右側(cè)隨機(jī)分為健康組（PH）和黏膜炎組（PM）。每組種植體數(shù)為9顆。

1.2.4 絲線結(jié)扎 于比格犬臀大肌注射速眠新II（0.03 mL/kg）與 2.5%戊巴比妥鈉溶液（0.2 mL/kg）進(jìn)行麻醉。黏膜炎組種植體在植入后第8～11周結(jié)扎3－0絲線，絲線結(jié)扎位置為愈合帽－種植體連接處，位于齦緣上，結(jié)扎期間停止種植體周圍衛(wèi)生維護(hù)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 口內(nèi)檢查 檢查每個(gè)愈合帽的近中頰面、正中頰面、遠(yuǎn)中頰面以及舌面，按下述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行記分：

牙齦指數(shù)（GI）：0，牙齦健康；1，牙齦輕度炎癥：牙齦的顏色有輕度改變并輕度水腫；2，牙齦中度炎癥：牙齦色紅，水腫光亮；3，牙齦重度炎癥：牙齦明顯紅腫或有潰瘍，并有自動(dòng)出血傾向。

菌斑指數(shù)（PI）：0，齦緣區(qū)無(wú)菌斑；1，齦緣區(qū)愈合帽表面有薄的菌斑，但視診不可見(jiàn)，若用探針尖刮可見(jiàn)牙菌斑；2，可見(jiàn)中等量菌斑；3，大量軟垢；每顆種植體的記分為記分之和除以4，每組記分為種植體記分之和除以數(shù)目。

取出黏膜炎組的絲線，所有種植體更換新愈合帽，每顆種植體探診頰舌側(cè)兩個(gè)位點(diǎn)，記錄探診出血指數(shù)（BOP）、探診深度（PD）。

1.3.2 齦溝液檢測(cè) 剪去吸潮紙尖尖端5 mm，6根一組置于Ep管中，電子天平稱重。棉卷隔濕，氣槍輕吹種植體及周圍牙齦，2 min后將吸潮紙尖插入種植體頰、舌側(cè)的近中、正中、遠(yuǎn)中齦緣下1 mm，30 s后取出，若紙尖沾有血液和唾液，則棄去該管，間隔2 min重復(fù)取樣，然后將吸潮紙尖放回原Ep管稱重，按1 g/mL換算成齦溝液體積。剪除吸潮紙尖干燥段，保留濕潤(rùn)段，加入200μL PBS緩沖液，混勻5 min，離心5 min（4℃、3 000 r/min），置于 －80℃冰箱保存。檢測(cè)前將齦溝液標(biāo)本恢復(fù)至室溫，混勻2 min，用酶聯(lián)免疫反應(yīng)（ELISA）測(cè)定 IL-1β、IL-6、TNF-α含量。

1.3.3 影像學(xué)檢查 兩組在第 8周與11周拍攝X線片，以種植體的直徑為參照，測(cè)量種植體近遠(yuǎn)中兩側(cè)骨結(jié)合頂點(diǎn)（BCI）到種植體肩臺(tái)（IS）處的距離。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果用±s表示，P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康，種植體骨結(jié)合良好，未出現(xiàn)松動(dòng)、脫落。

2.1 口內(nèi)檢查

健康組愈合帽表面無(wú)明顯軟垢，種植體周圍牙齦色澤、質(zhì)地正常；黏膜炎組9個(gè)愈合帽在絲線結(jié)扎3周后表面均覆蓋大量軟垢、菌斑，牙齦出現(xiàn)紅腫（圖1），且 GI、PI明顯上升（P＜0.001）（表 1）。

圖1 口內(nèi)觀察Fig 1 Intraoral observation

黏膜炎組種植體在絲線結(jié)扎3周后BOP顯著高于健康組（P＜0.001），2組PD無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）（表 1）。

表1 口內(nèi)檢查結(jié)果Tab1 Intraoral examination results

2.2 齦溝液檢測(cè)

2組種植體在第11周時(shí)齦溝液重量和IL-1β、IL-6、TNF-α含量存在顯著差異（P＜0.05）（表 2）。

表2 齦溝液量及其中炎癥因子含量Tab 2 Volume of gingival fluid and inflammatory factor content

2.3 影像學(xué)檢查

2組在第8與11周時(shí)IS-BCI的長(zhǎng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），即邊緣骨水平穩(wěn)定（圖 2）。

圖2 影像學(xué)檢查Fig 2 Radiographic examination

3 討 論

3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以及種植體植入術(shù)要點(diǎn)

表3 影像學(xué)檢查結(jié)果 （mm）Tab 3 Radiographic examination results （mm）

研究種植體周圍黏膜炎的動(dòng)物包括犬、靈長(zhǎng)類動(dòng)物、小型豬。犬具有操作方便、易于維護(hù)衛(wèi)生的優(yōu)點(diǎn)，且骨骼微觀特點(diǎn)與人類相近，拔牙創(chuàng)愈合周期、骨愈合周期與人類相似，因此應(yīng)用最為廣泛［10］。靈長(zhǎng)類動(dòng)物下頜骨的解剖學(xué)特征要求植入減徑種植體，且動(dòng)物購(gòu)買和飼養(yǎng)價(jià)格昂貴，在種植體周圍黏膜炎研究中很少使用［10］。小型豬的骨愈合周期等還需要更多的研究［11］。因此本實(shí)驗(yàn)選用比格犬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

比格犬下頜第一前磨牙位于尖牙牙根上方，且距離頦孔較近，因此通常在第二前磨牙至第一磨牙區(qū)域植入種植體。種植體直徑宜選“窄”（3.0～3.75 mm）或“超窄”（＜3.0 mm），種植體長(zhǎng)度宜選“短”（6～10 mm）或“超短”（≤6 mm）［12］。

比格犬邊緣骨水平在種植體植入術(shù)后3～5周穩(wěn)定［13］，骨結(jié)合率在第4周穩(wěn)定［14］，結(jié)合上皮寬度在第6周穩(wěn)定，軟組織屏障在第6～8周成熟［15］，因此本實(shí)驗(yàn)的絲線結(jié)扎起始時(shí)間為種植體植入術(shù)后第8周。

比格犬的牙齦厚度約（1.723±0.281）mm，齦溝深度約1 mm［16］，使用軟組織水平種植體能排除二期手術(shù)對(duì)黏膜的影響，1.8 mm穿黏膜高度也使愈合帽－種植體界面結(jié)扎的絲線位于齦緣，不進(jìn)入齦溝內(nèi)，排除了絲線對(duì)軟組織封閉的影響。

3.2 誘導(dǎo)種植體周圍黏膜炎的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

黏膜炎組種植體周圍組織均出現(xiàn)炎癥表現(xiàn)，牙齦指數(shù)、菌斑指數(shù)、探診出血指數(shù)、齦溝液體積和IL-1β、IL-6、TNF-α含量顯著高于健康組，兩組探診深度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，兩組邊緣骨水平均穩(wěn)定。上述結(jié)果表明齦緣絲線結(jié)扎3周可以誘導(dǎo)比格犬種植體周圍黏膜炎。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)改良了絲線結(jié)扎誘導(dǎo)比格犬種植體周圍黏膜炎的方法。結(jié)果表明，齦緣絲線結(jié)扎3周可以誘導(dǎo)比格犬種植體周圍黏膜炎，為種植體周圍黏膜炎的研究提供了參考，而結(jié)扎時(shí)間及材料對(duì)炎癥的影響還需進(jìn)一步研究。