育齡婦女不同同型半胱氨酸水平及葉酸服用對預防胎兒出生缺陷的影響

梁文

(西安市北車醫院婦產科，陜西 西安 710086)

出生缺陷通常是指胎兒在子宮內部出現結構或者染色體異常現象，其發生率約占活產兒的3%左右，不僅影響胎兒的正常生長發育，同時降低我國人口的出生質量。而同型半胱氨酸(HCY)屬于蛋氨酸與半胱氨酸代謝期間的中間產物，其水平在妊娠結局、血管內皮損傷、胎兒出生缺陷上具有重要意義[1]。而葉酸能夠為HCY的代謝提供甲基，并成為治療同型半胱氨酸血癥的重要藥物。目前臨床已有文獻[2]證實，血清HCY水平與葉酸代謝相關基因多態性息息相關，且不同基因型患者的HCY水平存在較大差異。另有報道[3]指出，妊娠前3個月，積極補充葉酸可有效改善孕婦機體HCY水平，從而防止胎兒出生缺陷的出現。但臨床缺少關于HCY水平與葉酸服用的相關性報道，由此本文展開實驗，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月至2020年1月我院納入的92例孕婦，年齡23～36歲，平均(30.59±1.41)歲；體質量20～27 kg/m2，平均(24.23±1.05)kg/m2。納入標準[4]：均屬于健康孕婦，并在我院進行常規產檢；無產科并發癥或者不良孕產史；基礎信息完整，中途未退出；孕婦與家屬知曉同意。剔除標準：實驗前使用影響維生素B12或者葉酸吸收的藥物；具備惡性腫瘤、肝腎疾病、自身免疫性疾病、嚴重并發癥者；存在妊娠神經管缺陷。

1.2方法 收集所有孕婦的外周血標本，通過離心抽取中間單個核細胞層，轉移至存放紅細胞裂解液的試管內，依據說明書要求檢測MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G基因多態性，并依照每個基因位點的具體狀況，判斷葉酸的服用能力，結果0級無風險，葉酸使用能力正常；1～2級低風險；3～5級中等風險；6～8級高風險。將其中0～2級孕婦納入甲組，提供400 μg/d的葉酸；而3～8級納入乙組，提供800 μg/d的葉酸，期間可依照HCY水平來調整劑量，給藥至孕3個月。抽取所有孕婦的血液樣品，12 000 r/min離心15 min，并保存上層清液至EP管，加入等體積的異丙醇，搖晃均勻后冷凍保存10 min；將樣品以12 000 r/min離心15 min，去除上層清液，管內白色沉淀物即為DNA，選擇75%酒精對沉淀物進行洗滌；將樣品以12 000 r/min離心10 min，去除上層清液，管內白色沉淀物即為RNA，室溫放置5 min；選擇30 μL的DEPC水溶解沉淀物，并選擇超微量分光光度技術對DNA含量進行檢測，選擇2 μL緩沖液與DNA混合物，放入1.5%瓊脂糖凝膠，調整電壓120 V，執行電泳操作，時間150 min，使凝膠在紫外凝膠分析儀中曝光，檢查RNA條帶，評價RNA降解情況，選擇熒光實時定量PCR儀器，對MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G的DNA水平進行檢測，遵照連接酶檢測反應實施分型，并選擇相應軟件實施基因分型。葉酸服用前、孕早期、孕中期，均收集孕婦的靜脈血，3 000 r/min離心10 min，保留上層清液，置于-80℃條件下待檢，最后按照酶聯免疫法及試劑盒說明書要求檢測血清HCY。

1.3觀察指標 分析所有孕婦的基因分型結果，并對比不同基因型孕婦的HCY水平，記錄葉酸服用前、孕早期、中期的HCY水平，并記錄兩組胎兒出生缺陷的發生率。

2 結 果

2.1所有孕婦的不同基因的分型 經檢查發現，MTHFRA1298C基因型是AA 47例(51.09%)、CC 12例(13.04%)、AC 33例(35.87%)，MTHFRC677T是CC 7例(7.61%)、TT 51例(55.43%)、CT 34例(36.96%)，MTRRA66G是AA 52例(56.52%)、GG 35例(38.04%)、AG 5例(5.43%)。

2.2不同基因分型的HCY水平比較 不同基因分型上的HCY水平差異顯著(P<0.05)。見表1。

表1 不同基因分型的HCY水平比較

2.3兩組孕婦不同時間點的HCY水平比較 甲組在葉酸服用前的HCY上與乙組對比差異顯著(t=10.875，P<0.05)，但兩組孕早期、中期的HCY水平相比無差異(t=0.503、0.441，P>0.05)。見表2。

表2 兩組不同時間點的HCY水平比較

2.4兩組胎兒出生缺陷的發生率比較 甲組無先天性心臟病、神經管畸形、唐氏綜合征、四肢畸形、唇腭裂等缺陷發生，乙組先天性心臟病、神經管畸形、唐氏綜合征、四肢畸形、唇腭裂各有1例，兩組胎兒出生缺陷的發生率比較差異無統計學意義(χ2=3.033，P>0.05)。

3 討 論

臨床研究[5]指出，隨著HCY水平的不斷增加，胎兒出生缺陷的風險隨之升高，其中HCY存在一定毒性能力，當機體中HCY水平升高后，可直接牽連血管內皮細胞受損，并對血小板進行刺激，使其出現增殖現象，并形成血栓，可造成胎盤栓塞，并切斷機體吸收營養物質，同時還可阻礙代謝物質排出，對胎兒新陳代謝造成極大影響。另外，HCY水平升高后，可妨礙S腺苷蛋氨酸產生，造成DNA甲基化，使染色體分裂，進一步增加胎兒出生缺陷的發生率，受到臨床重點關注[6]。臨床經研究[7]發現孕婦機體中HCY水平容易受到葉酸服用度的影響，而葉酸服用度與葉酸代謝相關基因關鍵酶調控存在關聯，其中葉酸代謝相關基因關鍵酶以MTHFRA1298C、MTHFRC677T、MTRRA66G較為常見，一旦上述三類出現基因多態性后，極易減低孕婦機體中酶的活性能力，從而使大量HCY堆積在血液，進而提升同型半胱氨酸血癥發生的風險。雖然臨床已有文獻[8]證明，妊娠前、孕后3個月服用葉酸至關重要，能夠減低胎兒出生缺陷的發生率，但不同地區孕婦在服用葉酸預防胎兒出生缺陷上存在一定差異。

本文結果顯示，MTHFRA1298C基因型是AA、CC、AC，MTHFRC677T是CC、TT、CT，MTRRA66G是AA、GG、AG。甲組在葉酸服用前的HCY上與乙組對比差異顯著(P<0.05)，但兩組孕早期、中期的HCY水平相比無差異(P>0.05)。兩組在各類胎兒出生缺陷的發生率上相比無差異(P>0.05)，證實葉酸代謝關鍵酶的基因型可直接影響HCY水平，同時在胎兒出生缺陷上具有重要意義。曾有報道[9]顯示，同型半胱氨酸血癥經過葉酸治療后，雖然能夠改善其HCY水平，但可能提升排卵次數，增加多胎妊娠的幾率，加上大量服用葉酸后，可造成孕婦脂類代謝異常，并造成血糖水平波動，導致心血管疾病產生。本文經過研究，使孕婦經過個體化用藥指導，來調整葉酸的使用度，可有效保障孕婦安全，同時預防胎兒出生缺陷的發生率，值得推廣。

綜上所述，育齡婦女的HCY水平與其葉酸代謝關鍵酶的基因多態性存在一定關聯，能夠幫助不同基因型孕婦的葉酸服用情況提供指導價值，同時可減低胎兒出生缺陷的發生率。