深圳市龍華區地中海貧血基因分型情況分析

吳文欽，熊戌霞，蔡夢珊

（中山大學孫逸仙紀念醫院檢驗科，廣東 廣州 510000）

地中海貧血（thalassemia）是常見的單基因遺傳性、一組常染色體不完全顯性遺傳性疾病[1]，是由珠蛋白基因缺失或突變引起的珠蛋白肽鏈合成失平衡，導致血紅蛋白中至少有一種珠蛋白合成缺乏或不足，引起貧血或溶血性疾病。依據珠蛋白鏈缺乏的種類進行命名和分類，將其分為α、β、δ、γ、δβ、γδβ 等6 種類型，以α-地中海貧血和β-地中海貧血分布最廣同時也最為常見[2，3]。按珠蛋白鏈減少的程度分為完全無生成的α0、β0珠蛋白生成障礙性貧血，部分生成的α+、β+珠蛋白生成障礙性貧血。目前可通過加強孕前篩查和產前診斷等相關手段來防止重癥地中海貧血患兒的出生，但醫學上還沒有理想的治愈方法，所以加強地中海貧血相關知識的宣傳，加強育齡人群開展地中海貧血篩查和產前診斷尤為重要[4]。據報告[5]，地中海貧血在我國南方各省是高發地區，尤其是兩廣地區以及海南省發病率最高。深圳作為全國性經濟中心和國際化城市，人口流動性大，外來人口占絕大多數，不同人群之間通婚導致該地區地中海貧血基因類型逐漸多元化。本研究通過對深圳市龍華區地區α 與β 地中海貧血基因突變類型基因分型情況的分析討論，從而為本地區地中海貧血宣傳、遺傳咨詢、孕前篩查以及產前診斷提供理論依據和相關指導，報道如下。

1 資料與辦法

1.1 一般資料 收集2017 年1 月～2019 年12 月到深圳市龍華區人民醫院進行地中海貧血篩查人群共12,898 例，其中男性5982 例，女性6916 例，年齡19～40 歲，平均年齡（27.47±6.54）歲。

1.2 方法

1.2.1 血細胞分析 采用日本希森美康（SYSMEX）XS-1000i 血液分析儀檢測血常規參數，MCV＜80 fl和/或MCH＜27 pg，為地中海貧初篩陽性指標。

1.2.2 血紅蛋白電泳分析 采用法國西比亞（SEBIA）高壓液相毛細血管電泳儀進行血紅蛋白電泳分析，HbA2≤2.5%，懷疑為α-地中海貧血基因攜帶者，進行α-地中海貧血基因診斷；HbA2≥3.5%，HbF 正常或者增高，懷疑為β-地中海貧血基因攜帶者，進行β-地中海貧血基因診斷。

1.2.3 初步篩查地中海貧血陽性判斷標準 對MCV＜80 fl 和/或MCH＜27 pg 的標本進行地中海貧血初篩，若HbA2 和HbF 結果中有一項或兩項異常者均判為地中海貧血初篩陽性。

1.2.4 地中海貧血基因診斷 分為檢測缺失型α-地中海貧血和突變β-地中海貧血基因型的方法。α-地中海貧血采用跨越斷裂點技術（Gap-PCR），檢測中國人群已知的三種α-地中海貧血常見缺失型突變：--SEA、-α4.2、-α3.7。采用PCR-膜反向點雜交技術（RDB-PCR）檢測β-地中海貧血常見17 種基因位點突變，即CD41-42、IVS-II-654、CD71-72、-28、CD17、βE、CD31、CD43、-32、-29、-30、CD27/28、IVS1-1、CD14-15、IVS1-5、CAP、lnt。所有表型陽性標本均送至廣州金域檢驗醫學中心檢測完成，并對地中海貧血基因分型情況進行回顧性分析。

1.3 統計學方法 采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血液篩查結果 12,898 例篩查對象經血液學常規初篩疑似地中海貧血3126 例，初篩陽性率為24.23%（3126/12,898），經地中海貧血基因確診905例，地中海貧血基因檢出率為7.02%（905/12,898），其中α-地中海貧血547 例，檢出率為4.24%（547/12,898），β-地中海貧血324 例，檢出率為2.51%（324/12,898），αβ 復合型地中海貧血34 例，檢出率為0.26%（34/12,898）。

2.2 地中海貧血基因診斷結果

2.2.1 α-地中海貧血基因突變類型分析 α-地中海貧血檢出7 種基因型，包括--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA、-α3.7/-α4.2和-α3.7/-α3.7，其中--SEA/αα 所占比例最高，其次為-α3.7/αα 和-α4.2/αα，且--SEA/αα 基因型陽性率高于其它基因突變型，不同基因缺失型構成比間比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 α-地中海貧血基因突變類型及其構成比（n，%）

2.2.2 β-地中海貧血基因突變類型分析 β-地中海貧血共檢出12 種突變，13 種基因型，均為雜合子，突變類型主要以CD41-42 單突變雜合子為主，其次為IVS-II-654 雜合子，CD41-42 基因突變檢出率高于其它基因突變型，不同基因突變類型檢出率比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 β-地中海貧血基因突變類型及其構成比（n，%）

2.2.3 αβ 復合型地中海貧血基因突變類型分析 αβ復合型地中海貧血共檢出17 種基因型，以--SEA/αα/CD41-42、--SEA/αα/IVS-II-654 聯合突變為主，另外還檢出兩種罕見型--SEA/αα/βE、--SEA/αα/βE，CD41-42，αβ 復合型地中海貧血基因突變類型及其構成比見表3。

表3 αβ 復合型地中海貧血基因突變類型及其構成比（n，%）

3 討論

根據α 珠蛋白的異常情況，臨床上可分為四種類型：1 個α 基因異常，稱為α-地中海貧血靜止型，基因型為αα/α-，患者平時無癥狀，無異常血象的改變；2 個α 基因異常，稱為α-地中海貧血標準型，基因型為α-/α-，患者平常無明顯癥狀或輕度貧血，血象為紅細胞呈低色素小細胞；3 個α 基因異常，基因型為α-/--，稱為HbH 病，患者表現有代償性溶血性貧血癥狀，血象呈現小細胞低色素改變，血紅蛋白電泳出現HbH 和Barts 帶，大部分細胞中出現HbH包涵體；4 個α 基因異常，基因型為--/--，稱為胎兒水腫綜合征（hydrops fetalis syndrome），亦稱Hb Barts 病，此類胎兒多死于宮內，或出生后數小時內死亡。α-地中海貧血缺失型是我國主要類型，東南亞缺失型（--SEA）、左側缺失（-α4.2）和右側缺失（-α3.7）是我國最常見的α-地中海貧血缺失類型[6]。本研究共檢出疑是地中海貧血3126 例，地中海貧血基因確診905 例，地中海貧血篩查陽性率為24.23%，基因診斷地中海貧血攜帶率為7.02%。在905 例地中海貧血患者中，α-地中海貧血547 例，α-地中海貧血攜帶率為4.24%，其中東南亞缺失型（--SEA）353 例，右側缺失（-α3.7）112 例，左側缺失（-α4.2）45 例，缺失型HbH 病（--SEA/α3.7）18 例，缺失型HbH 病（--SEA/α4.2）9 例，右、左側缺失α 雙雜合子（-α3.7/-α4.2）6 例，右側缺失α 純合子4 例。表明該地區α-地中海貧血人群中以東南亞缺失型為主，占α-地中海貧血的64.53%，因而該地區育齡人群在進行相關婚前檢查、孕前篩查以及產前診斷時，可將α-地中海貧血的東南亞缺失型（--SEA/αα）作為孕檢、產檢等優生優育措施的重點監控對象。

β-地中海貧血患兒出生時一般無明顯癥狀，多在嬰兒時期發病，依據珠蛋白鏈合成受抑制情況，臨床上可分四型：重型、中間型、輕型和遺傳性胎兒Hb持續增多癥。重型患者往往是β 地中海貧血基因純合子或雙重雜合子，即兩個β 基因都發生突變。本研究共檢出β-地中海貧血324 例，β 地中海貧血攜帶率為2.51%，共檢出12 種突變，13 種基因型，CD41-42 雜合子115 例、IVS-II-654 雜合子80 例、-28 雜合子49 例、CD17 雜合子25 例，共占β-地中海貧血的83.02%。因而可將CD41-42 突變、IVS-II-654 突變、CD17 突變、-28 突變這4 種突變類型作為該地區育齡人群β-地中海貧血孕前篩查和產前診斷的重點監控對象。目前在醫學上，地中海貧血尚無理想的治愈性手段，提倡育齡夫婦把地中海貧血作為孕前常規檢測以主動發現陽性病例，防止純合子患兒出生。另外，本研究還發現少數αβ 復合型地中海貧血34 例，檢出率為0.26%，占地中海貧血的3.76%，共檢出17 種基因型，以--SEA/αα/CD41-42、--SEA/αα/IVS-Ⅱ-654 聯合突變為主。這表明在深圳市龍華區地中海貧血有一定的發病率，地中海貧血基因突變類型多樣且復雜，應加強孕前檢查以及產前診斷，做到優生優育。

綜上所述，深圳市龍華區α、β 地中海貧血基因構成基本符合廣東省地中海貧血基因分布特點，應對該地區育齡人群開展地中海貧血相關知識宣傳、加強孕前篩查以及產前診斷，促進優生優育。