甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變的關系

劉平賢，張浩，李偉漢，陸佳團

（南陽市中心醫院乳腺甲狀腺外科，河南 南陽 473009）

甲狀腺功能減退是指因甲狀腺激素合成、分泌減少以及生理效應不足致使機體代謝降低的疾病[1,2]，臨床根據促甲狀激素（TSH）將其分為臨床甲減和亞臨床甲減。相關報道顯示女性發病率高于男性，且年齡越大發病率越高[3]。鋅指蛋白A20也稱腫瘤壞死因子α誘導蛋白3，是指具有特征性鋅指結構的一類蛋白，有關研究顯示鋅指蛋白A20可參與炎癥反應并對細胞凋亡具有抑制作用，在免疫調節中具有重要作用[4,5,6]。甲狀腺激素對心血管功能具有調節作用，可影響心肌細胞、傳導系統以及周圍血管疾病發展，隨著心血管疾病發病率不斷上升，探究心血管疾病與甲狀腺功能之間相關性成為臨床研究熱點。本研究旨在探討甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變的關系，以期為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月-2020年1月本院收治的35例甲狀腺功能減退患者為研究組，納入標準:⑴符合甲狀腺功能減退診斷標準[7,8];⑵TSH＞5.4mIU/L，FT3、FT4均有不同程度降低表現；⑶臨床資料完整；⑷依從性較高者；⑸自愿參與并簽署研究知情同意書。排除標準：⑴合并精神系統疾病者；⑵合并原發性高血壓、糖尿病、高脂血癥、動脈粥樣硬化者；⑶心、肝、腎等重要器官功能代謝障礙者；⑷有血液系統、免疫系統疾病者；⑸合并惡性腫瘤者；⑹妊娠期或哺乳期者；⑺近一個月內服用甲狀腺、糖皮質激素類藥物者；⑻拒絕參加此次研究者。研究組男21例，女14例；年齡25～60歲，平均年齡38.18±3.45歲；體重50～70kg，平均體重60.38±4.71kg，體質指數22.54±0.76kg/m2；同期28例健康體檢者為對照組，其中男20例，女8例；年齡26～62歲，平均年齡38.65±3.29歲；體重50～70kg，平均體重61.15±3.94kg，體質指數22.28±0.91kg/m2。兩組一般資料比較無顯著差異（P＞0.05），可比較。本研究經院倫理委員會審核并一致通過。

1.2 方法 抽取晨起空腹患者靜脈血8ml，3ml靜脈血離心后留取血清置于-20℃冰箱待檢，采用電化學發光法（選用羅氏Cobas8000c701全自動生化儀）對促甲狀腺激素（TSH）、游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）進行檢測；剩余5ml肝素抗凝留取血漿采用密度梯度離心法將外周血單個核細胞分離出置于37℃二氧化碳溫箱培養4h，然后將上清液去除獲得貼壁單核細胞加入培養液進行培養，提取上清液后利用4%多聚甲醛固定30min，采用免疫組織化學法檢測單核細胞鋅指A20蛋白水平：⑴0.01MPBS洗滌2次，時間每次3min，再加入打孔液在室溫下靜置10min；⑵0.01MPBS洗滌2次，時間每次3min，再加3%過氧化氫于室溫下處理15min；⑶0.01MPBS洗滌2次，時間每次3min，再加血清封阻于室溫下15min；⑷加1:50兔抗人A20多克隆抗體，以0.01MPBS代替陰性對照，并于4℃下過夜；⑸0.01MPBS洗滌3次，時間每次3min，加入生物素標記山羊抗小鼠IgG，37℃下孵育20min；⑹0.01MPBS洗滌3次，時間每次3min，滴加辣根過氧化物酶標記鏈酶卵白素工作液，室溫孵育15min；⑺0.01MPBS洗滌2次，時間每次3min；⑻DAB顯色，蘇木素染核，脫水、透明、封固鏡檢。采用酶偶聯比色法檢測總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。采用酶聯免疫吸附法（儀器及試劑由北京福瑞生物工程公司提供）檢測高敏-C反應蛋白（hs-CRP）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）水平。

1.3 觀察指標 ⑴甲狀腺功能：TSH、FT3、FT4水平；⑵血脂、炎性因子水平：TC、TG、HDL-C、LDLC、hs-CRP、TNF-α、IL-6水平；⑶外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平；⑷心血管病變：冠心病、高血壓、心絞痛、心力衰竭等發生情況；⑸外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變相關性。

1.4 統計學處理SPSS20.0統計學軟件分析和處理，計數資料采取率（%）表示，行χ2檢驗，計量資料采取()表示,行t檢驗,相關性分析采用Spearman相關性分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 兩組甲狀腺功能比較 研究組TSH水平高于對照組（P＜0.05），研究組FT3、FT4水平低于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組甲狀腺功能比較（）

表1 兩組甲狀腺功能比較（）

組別 n研究組對照組35 28 t P TSH（mIU/L）FT3（pmol/L）10.89±3.26 1.73±0.50 28.894 0.000 4.13±1.22 4.54±0.58 3.188 0.002 FT4（pmol/L）13.84±4.10 15.29±3.01 3.024 0.003

2.2 兩組炎性因子水平、外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平比較 研究組TC、TG、HDL-C、LDL-C、hs-CRP、TNF-α、IL-6水平高于對照組（P＜0.05）,研究組外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平低于對照組（P＜0.05），見表2。

表2 兩組血脂水平、炎性因子水平、外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平比較

2.3 兩組心血管病變發生情況比較 研究組冠心病、高血壓、心絞痛、心力衰竭發生率均高于對照組（P＜0.05），見表3。

表3 兩組心血管病變發生情況比較

2.4 甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變相關性 外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平與hs-CRP、TNF-α、IL-6呈正相關，見表4。

表4 甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變相關性

3 討論

隨著環境變化、生活節奏加快，甲狀腺功能減退發病率逐年上升并有年輕化趨勢[9]。TSH由垂體前葉分泌，主要作用為促進甲狀腺激素合成、分泌,甲狀腺激素升高或降低其TSH會出現相反變化，二者之間形成負反饋調節機制。FT3、FT4是T3、T4的生理活性形式，與T3、T4比較靈敏度更高，可真實反饋甲狀腺代謝狀態。本研究結果顯示研究組TSH水平高于對照組，FT3、FT4水平低于對照組，與指南甲狀腺功能減退指標變化一致。

本研究中研究組TC、TG、HDL-C、LDL-C水平高于對照組，且研究組心血管病變發生率高于對照組，提示甲狀腺功能減退患者其心血管病變可能性更高。分析原因可能是甲狀腺功能減退患者其甲狀腺激素合成、分泌減少，同時脂肪降解也減少，脂肪從膽汁排泄速度下降，從而導致血脂水平異常。另外患者發生甲狀腺功能減退時可造成高凝狀態，對纖維蛋白分解造成損害從而導致血小板、血管內皮功能紊亂引發心血管疾病。甲狀腺激素升高可增加心排出量、心肌耗氧量，引發心動過速，還對LDL-C氧化產生的自由基代謝具有促進作用啊，致使內皮功能發生紊亂引發心絞痛。本研究還顯示甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細胞鋅指蛋白A20水平與hs-CRP、TNF-α、IL-6呈正相關，提示鋅指蛋白A20與炎性因子水平密切相關。在hs-CRP、TNF-α、IL-6等炎癥因子刺激下激活NF-κB信號通路A20水平迅速上升，高水平狀態下A20對NF-κB信號通路進行負性調控從而對依賴NF-κB的炎癥因子進行干預達到抗炎、抗凋亡雙重保護作用[10-12]。Longo[13]等、盧珊[14]等的研究中指出鋅指蛋白A20過表達時可下調IκBα從而對CD40配體所誘導的NF-κB激活進行阻斷使炎癥因子細胞間黏附分子-1、血管細胞黏附分子1、E選擇素的表達下調達到保護血管內膜，降低血管損傷目的；還可對氧化低密度脂蛋白誘導的細胞毒性、細胞凋亡進行阻斷從而抑制炎癥反應改善動脈粥樣硬化，綜上原因當鋅指蛋白A20水平明顯下降時可能增加心血管病變發生率。

綜上所述，甲狀腺功能減退癥患者炎癥反應明顯且心血管病變率高，鋅指蛋白A20與hs-CRP、TNF-α、IL-6存在相關性，提示鋅指蛋白A20可作為心血管事件發生的預測指標。