胃癌患者血清β-肌動蛋白和G 蛋白偶聯受體-4 的表達及臨床意義

王春梅 王彩生

1.呼和浩特市第二醫院檢驗科，內蒙古呼和浩特 010010；2.內蒙古錫林郭勒盟中心醫院感染性疾病科，內蒙古錫林浩特 010010

胃癌是消化系統常見的惡性腫瘤之一，具有惡性度高、治愈率低及預后差等特點。胃癌早期臨床癥狀無明顯特異性，主要有惡心、嘔吐等，晚期可出現上腹部不適、進食后飽脹、嘔血、黑便等，嚴重可導致死亡[1-2]。大部分胃癌患者確診時往往是中晚期，治療效果較差。因此，探索胃癌發生的生物學機制，盡早診斷與治療對延長胃癌患者的生存時間及預后具有至關重要的意義。G 蛋白偶聯受體-4（LGR4）稱為富含亮氨酸重復序列的GPCR4 或GPCR48，是G 蛋白偶聯受體家族成員之一，也是重要的細胞膜受體之一，由18個外顯子和17個內含子組成，在胚胎和成人各種組織中均廣泛表達[3]，其具有多種生物學功能，如介導細胞信號傳導與激活、促進器官發育，在卵巢癌的發生發展過程中起到促癌作用[4]。β-肌動蛋白（β-actin）是一種細胞骨架蛋白，與E-鈣黏蛋白（E-cadherin）形成復合體，具有維持同型細胞的黏附、防止細胞移動的作用。當細胞質中存在過量的β-catenin 時，β-catenin便轉移到細胞核中，充當細胞增殖分化過程的轉錄因子[5-6]。有研究顯示，β-catenin 可通過調節Wnt 信號通路的表達，參與結腸癌的發生發展[7]。因此，本研究通過檢測胃癌患者β-actin 與LGR4 的表達水平，初步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年2 月—2020 年6 月于呼和浩特市第二醫院以下簡稱“我院”住院治療的胃癌患者103 例（觀察組），納入標準：①經胃鏡活檢確診為胃癌；②均首次診斷為胃癌；③臨床病理資料完整。排除標準：①患有其他消化系統疾病，如十二指腸潰瘍、胃潰瘍等；②患有其他惡性腫瘤，如肺癌、骨髓瘤等；③患有免疫系統疾病；④接受過抗腫瘤治療。觀察組男59 例，女44 例；年齡45～71 歲，平均（55.2±6.3）歲；≥55 歲55 例，＜55 歲48 例；根據胃癌病理組織分化結果，中低分化51 例，高分化52 例；TNM 分期：Ⅰ期64 例，Ⅱ期27 例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期4 例；有淋巴結轉移40 例；腫瘤 直 徑＜2.5 cm 65 例，≥2.5 cm 38 例；TNM 分期及病理分化程度參考第8 版美國癌癥聯合會標準[8]。另選同期我院住院的胃良性腫瘤患者52 例為對照組，①經術后病理檢查明確診斷為胃良性腫瘤。②首次診斷胃良性腫瘤。③患者臨床病理資料完整。排除標準：①患有其他消化系統疾病，如胃炎、慢性腸炎等。②患有心、腦系統疾病。③患有免疫功能缺陷疾病。對照組男30 例，女22 例；年齡47～68 歲，平均（54.7±2.1）歲。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究患者均自愿參與，獲醫院醫學倫理協會審核通過。

1.2 研究方法

所有受試者晨起空腹抽取靜脈血約4 mL，加入到肝素促凝血管中，3000 r/min 離心15 min，離心半徑12.5 cm，分離血清進行實驗。采用ELISA 法檢測各組患者血清中LGR4 與β-actin 的濃度（試劑盒購于上海生工生物工程有限公司，批號：20180115），操作步驟按照試劑盒的說明書逐步進行。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（）表示，組間比較采用t 檢驗；計數資料以例數表示，采用χ2檢驗；應用ROC 曲線評價LGR4 與β-actin 的表達在胃癌中的診斷能力。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組β-actin 與LGR4 表達水平比較

觀察組患者血漿中β-actin 與LGR4 表達均高于對照組（P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組β-actin 與LGR4 表達水平比較（pg/mL，）

表1 兩組β-actin 與LGR4 表達水平比較（pg/mL，）

注：β-actin：β-肌動蛋白；LGR4：G 蛋白偶聯受體-4

2.2 觀察組患者血清中β-actin 與LGR4 的表達水平與臨床病理特征的關系

血清β-actin、LGR4 在低～中分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期及無淋巴結轉移胃癌患者的表達高于高分化、Ⅰ～Ⅱ分期和有淋巴結轉移患者（P ＜0.05），而在患者不同年齡、性別及腫瘤直徑中表達比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）。見表2。

表2 胃癌組患者血清中β-actin 與LGR4 的表達與臨床病理特征的關系（pg/mL，）

表2 胃癌組患者血清中β-actin 與LGR4 的表達與臨床病理特征的關系（pg/mL，）

注：β-actin：β-肌動蛋白；LGR4：G 蛋白偶聯受體-4

2.3 胃癌患者血清中β-actin 與LGR4 的表達對胃癌的診斷價值

繪制ROC 曲線結果顯示：β-actin、LGR4 對胃癌均有較好的診斷能效，最佳截斷值分別為3.21、47.62 pg/mL，ROC-AUC 分別為0.747（95%CI：0.726，0.785，P ＜0.001）、0.782（95%CI：0.751，0.803，P ＜0.001）。血清中β-actin 與LGR4 聯合檢測胃癌的ROC-AUC為0.869（95%CI：0.837，0.914，P ＜0.001），聯 合檢測的ROC-AUC 高于β-actin、LGR4 單一檢查，差異有統計學意義（Z=2.153、2.365，P=0.005、0.003）。見圖1。

圖1 β-actin 聯合LGR4 檢測診斷胃癌的ROC 曲線

3 討論

胃癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，好發年齡在50 歲以上，男女發病率比例約為2∶1。相關文獻顯示，胃癌是世界范圍內癌癥相關死亡原因的第五大原因[9-10]，且發病率居高不下，惡性度和死亡率高。盡管現代社會的醫學檢查及治療方法都取得了較大進步，但全世界內胃癌的死亡率并未明顯降低，確診病例數仍在持續增加，嚴重威脅著人們的身心健康。因此，探尋靈敏的胃癌生物標志物，對于胃癌患者的早診斷早治療、提高患者的生存時間有著重要的意義。

LGR4 是G 蛋白偶聯受體家族的重要成員之一，其染色體位置為11 號染色體長臂，分子質量約為104 000，并在人體多種組織中均有表達，如胰腺、腎臟及心臟組織等[11]。研究顯示，LGR4 可介導多種細胞信號的轉導過程，如參與免疫反應及自主神經的調節等[12]；同時，LGR4 亦參與多種病理過程，如LGR4 通過調節細胞代謝使得白色脂肪組織增多、棕色脂肪組織減少，進而導致肥胖的發生[13-14]，同時還可通過促進Snail 蛋白、下調E-鈣黏蛋白的表達水平，進而促進了上皮-間質轉化（EMT），參與前列腺癌的發生發展過程[15-16]。本研究發現胃癌患者血清中LGR4 的水平升高，并且與胃癌患者的TNM 分期、細胞分化程度及淋巴轉移相關，提示LGR4 可能參與了胃癌的發生發展過程。相關文獻顯示，LGR4 是R-spongdin 蛋白的受體，具有較高的親和力，當LGR4 與R-spongdin 蛋白結合后，激活Wnt/β 聯蛋白信號通路，上調β 聯蛋白的表達水平，高表達的β 聯蛋白進入細胞核內，進而促進了基因的轉錄及翻譯，加速了腫瘤細胞的生長周期，抑制腫瘤細胞的凋亡，進一步促進腫瘤細胞的增殖及分化，提高腫瘤細胞的惡性程度，進而影響胃癌的進展[17]；此外，LGR4 還可促進Wnt/β 聯蛋白信號通路中的下游靶基因Dickkopf 相關蛋白1（DKK1）的表達，過表達的DKK1 分泌到細胞外，為腫瘤細胞的生長及分化提供了良好的微環境，促進了腫瘤細胞的生長、并向周圍組織浸潤，進一步提高腫瘤細胞的惡性程度[18-21]。

肌動蛋白是一種分子質量約為42 kDa 的多功能蛋白，是組成微絲的主要成分，肌動蛋白參與很多重要的細胞生物學過程，如肌肉的收縮、細胞分裂、細胞信號轉導等[22-23]。肌動蛋白有3種亞型，分別為α-肌動蛋白、β-肌動蛋白及γ-肌動蛋白。β-肌動蛋白是細胞骨架的組成成分，在大多數的細胞中均有表達，在細胞器的細胞內轉運、肌肉收縮及細胞遷移的過程中發揮了重要的作用[24]。有研究顯示，β-actin 在肝癌組織中呈高表達現象，與病情的嚴重程度呈正相關，為肝癌的臨床研究提供了新的靶點[25]。本研究發現胃癌患者血清中β-actin 的表達水平升高，并與胃癌患者的TNM 分期、細胞分化程度及淋巴轉移相關，提示β-actin 亦可能參與了胃癌的發生發展過程。有研究顯示，β-actin 單體有3個結合位點，一個是ATP 的結合位點，其余兩個是肌動蛋白的結合位點[26]。當微絲成熟后，與β-actin 結合的ATP 水解并釋放出大量的能量，為細胞的生長提供了有利的環境，促進了腫瘤細胞的增殖及分化，在腫瘤細胞的發生發展過程中發揮了重要作用。水解后的ATP 形成ADP-F-肌動蛋白，并經過一系列細胞過程再次形成ATP-肌動蛋白單體，而后ATP 水解釋放能量，這種循環被稱為“踏車運動”，可促進腫瘤細胞的遷移及轉移過程[27]。ROC 分析顯示，胃癌患者血清中β-actin 與LGR4 對胃癌具有一定的診斷價值，ROC-AUC 均＞0.7。二者聯合應用時ROC-AUC 為0.869，高于兩指標的單獨診斷效能，提示二者聯合使用時對胃癌的診斷具有更高的臨床價值。

綜上所述，胃癌患者患者血清中β-actin 與LGR4的表達水平均升高，且在低～中分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期及無淋巴結轉移患者中高表達，二者聯合檢測有可能作為診斷胃癌的分子標志物。