QuEChERS-GC-MS/MS測定化橘紅65種農藥殘留△

熊穎，李純，侯惠嬋，顧利紅，栗建明，王艷慧

1.廣州市藥品檢驗所/國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，廣東 廣州 510160； 2.廣州市香雪制藥股份有限公司，廣東 廣州 510663

化橘紅為蕓香科植物化州柚Citrusgrandis′Tomentosa′或柚C.grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮，理氣寬中、燥濕化痰，用于咳嗽痰多、食積傷酒、嘔惡疲悶[1]。前者習稱“毛橘紅”，后者習稱“光橘紅”“光七爪”“光五爪”。化橘紅藥用歷史悠久，已有1500多年的種植歷史。化州柚是廣東省化州市特有樹種，其未成熟果外果皮即作為化橘紅入藥，習稱化橘紅，作為“中國四大南藥”及“十大廣藥”之一，曾被列為皇室專用祛痰圣藥[2-3]。近年來，化橘紅越來越受到中醫藥界的重視。隨著化橘紅需求的增加、種植面積的擴大，病蟲害問題日益突出，農藥使用和農藥殘留的問題也日益凸顯[4-5]。為調查化橘紅農藥使用和農藥殘留的狀況，本研究采用固相分散萃取-氣相色譜-三重四極桿串聯質譜法(QuEChERS-GC-MS/MS)對27批化橘紅中65種農藥殘留進行了檢測，以期為道地藥材化橘紅農藥殘留限度標準的制定提供參考。

1 材料

1.1 儀器

7890A型氣相色譜-7000B型三重四極桿串聯質譜儀(美國Agilent公司)；AG245型電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)；T18型勻漿儀(德國IKA公司)；ST16型高速離心機(美國Thermo公司)；N1000S-WA型旋轉薄膜蒸發器(日本EYELA公司)。

1.2 試藥

65種農藥對照品均購于上海安譜科技公司，純度均大于99.0%；乙腈(農殘級，批號：152667，美國賽默飛公司)；丙酮(農殘級，批號：150835，美國賽默飛公司)；氯化鈉(農殘級，批號U5780025)、內標物磷酸三苯酯(TPP，批號：U900921)均購于上海安譜公司；QuEChERS凈化管[無水硫酸鎂1200 mg、N-丙基乙二胺(PSA)300 mg、十八烷基硅烷鍵合硅膠100 mg，批號：9301826，北京迪馬科技公司]。

27批化橘紅樣品經廣州市藥品檢驗所侯惠嬋主任中藥師鑒定，H1～H17為化州柚Citrusgrandis′Tomentosa′的未成熟或近成熟的干燥外層果皮、H18～H27為柚C.grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮，樣品信息見表1。空白樣品采用未檢出待測65種農藥殘留的化橘紅。

表1 化橘紅樣品信息

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent DB-17MS毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；載氣為氦氣(純度：99.999%)；恒壓模式，壓力146 kPa；進樣口溫度為250 ℃；進樣量為1 μL；不分流進樣；程序升溫(0～1 min，60 ℃；以30 ℃·min-1升至120 ℃；以10 ℃·min-1升至160 ℃；以2 ℃·min-1升至230℃；以15 ℃·min-1升至300 ℃，保持6 min；升至310 ℃，保持5 min)；傳輸接口溫度為280 ℃。質譜離子源溫度為280 ℃；電離模式為電子轟擊離子源(EI)；轟擊能量為70 eV；碰撞氣氮氣(純度：99.999%)；溶劑延遲時間為3.75 min；質譜監測模式為多反應監測(MRM)。優化后的各離子對質譜參數見表2。

表2 65種農藥殘留QuEChERS-GC-MS/MS分析參數

續表2

2.2 對照品溶液及內標溶液的制備

2.2.1混合對照品溶液的制備 根據對照品質譜上的響應豐度值確定其在混合對照品溶液中的濃度，乙腈定容，貯藏在-30 ℃冰箱中備用。

2.2.2內標溶液的制備 取TPP適量，精密稱定，乙腈配制成0.2 μg·mL-1的溶液，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1提取 取化橘紅樣品粉碎，過三號篩，取粉末約5 g，精密稱定，置50 mL聚苯乙烯具塞離心管中，加入氯化鈉1 g、乙腈30 mL，勻漿提取，12 000 r·min-1離心3 min(離心半徑為7 cm)，提取2次，合并上清液，40 ℃水浴旋蒸濃縮，殘渣用乙腈洗滌，定量轉移至10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品提取液。

2.3.2凈化 精密量取供試品提取液5 mL，置QuEChERS凈化管中，渦旋使充分混勻，再置振蕩器上劇烈振蕩(500次/min)5 min使凈化完全，4000 r·min-1離心5 min(離心半徑為7 cm)，取上清液，即得。

2.4 空白基質溶液的制備

取空白樣品粉末約10 g，精密稱定，置50 mL聚苯乙烯具塞離心管中，按2.3項下方法制備空白基質溶液。

2.5 基質混合標準溶液的制備

精密吸取混合對照品溶液適量，加空白基質溶液，配制成梯度濃度的基質混合標準溶液(現配現用)。

2.6 樣品測定

分別精密量取各濃度基質混合標準溶液及供試品溶液各1.0 mL，精密加入內標溶液0.2 mL，混勻，0.22 μm微孔濾膜過濾，注入氣相色譜儀，測得峰面積，代入隨行標準曲線，用內標法計算。

2.7 方法學考察

2.7.1精密度試驗 取10 ng·mL-1基質混合標準溶液，連續進樣6次，計算精密度，結果RSD均小于10%(表3)，符合痕量分析要求。

表3 化橘紅65種農藥線性范圍、LOQ、加樣回收率及精密度

續表3

2.7.2標準曲線與檢出限(LOQ) 取不同質量濃度的基質混合標準溶液，注入儀器，繪制標準曲線。結果表明，對照品線性關系良好，相關系數(r)均大于0.995。取標準曲線最低點計算LOQ，LOQ為0.002～0.010 mg·kg-1(表3)。

2.7.3加樣回收率試驗 取化橘紅空白樣品粉末5 g，加入不同量的混合對照品溶液，按2.3、2.6項下方法制備供試品溶液并測定。如表3所示，添加水平為0.01 mg·kg-1時平均加樣回收率為70.63%～127.65%，RSD為0.97%～8.85%；添加水平為0.01 mg·kg-1時平均加樣回收率為67.05%～130.26%，RSD為0.52%～5.27%，符合痕量分析要求。

2.8 樣品測定

對樣品進行測定，檢出禁用農藥3種，分別為氟蟲腈(H25號樣品0.010 0 mg·kg-1)、氟蟲腈亞砜(H25號樣品0.016 9 mg·kg-1)、甲基異柳磷(H26號樣品0.004 2 mg·kg-1)。檢出常用限用農藥10種，分別為甲氰菊酯(H6號樣品2.283 5 mg·kg-1；H7號樣品2.627 5 mg·kg-1；H8號樣品0.799 8 mg·kg-1；H9號樣品2.010 8 mg·kg-1；H10號樣品1.248 2 mg·kg-1；H11號樣品0.702 1 mg·kg-1；H12號樣品0.524 6 mg·kg-1；H13號樣品0.359 4 mg·kg-1；H14號樣品1.109 7 mg·kg-1；H15號樣品0.620 7 mg·kg-1；H16號樣品0.601 3 mg·kg-1；H17號樣品0.623 3 mg·kg-1；H18號樣品0.031 5 mg·kg-1；H22號樣品0.012 3 mg·kg-1；H23號樣品0.012 9 mg·kg-1；H26號樣品0.015 3 mg·kg-1；H27號樣品0.016 1 mg·kg-1)、毒死蜱(H24號樣品0.012 4 mg·kg-1；H25號樣品0.020 5 mg·kg-1；H26號樣品0.290 7 mg·kg-1)、氯氰菊酯(H25號樣品0.115 3 mg·kg-1；H26號樣品0.100 1 mg·kg-1)、反式氯丹(H17號樣品0.009 2 mg·kg-1)、順式氯丹(H17號樣品0.009 0 mg·kg-1)、三唑酮(H26號樣品0.005 4 mg·kg-1)、丙溴磷(H26號樣品0.013 8 mg·kg-1)、三唑醇(H26號樣品0.017 8 mg·kg-1)、三唑磷(H26號樣品0.012 1 mg·kg-1)、三氟氯氰菊酯(H26號樣品0.017 2 mg·kg-1)。

3 討論

中藥提取物成分復雜，為了降低色譜柱、離子源等污染，提高儀器靈敏度和穩定性等性能，有必要對提取液進行凈化。農藥殘留檢測的常用凈化方式有QuEChERS、固相萃取、液液萃取、凝膠滲透色譜、磺化法等[6-17]。課題組前期已用固相萃取(SPE)法對另20批化橘紅進行了農藥殘留檢測[6]，本實驗采用QuEChERS凈化管(無水硫酸鎂1200 mg、N-丙基乙二胺300 mg、十八烷基硅烷鍵合硅膠100 mg)凈化。

液相質譜基質效應的主要原因是待測組分與樣品中的基質成分在霧滴表面離子化過程的競爭；氣相色譜中基質效應在于活性位點樣品中的基質組分與目標分析物分子競爭，競爭結果會讓目標離子的生產效率以及離子強度出現降低或者增加，這會使最終測定結果的精密度以及準確度受到影響[18-19]。基質效應在痕量質譜分析中廣泛存在，為提高分析結果的準確性，要考慮基質效應。改善基質效應方法有空白基質匹配標準溶液、樣品凈化、同位素內標、分析保護劑、優化色譜和質譜條件、樣品加標回收校正等[20]。化橘紅中含有黃酮類、香豆素類和揮發油等多種成分，基質增強效應明顯，本實驗采用空白基質匹配標準溶液、樣品QuEChERS凈化和優化色譜、質譜條件改善基質效應。

樣品測定結果分析，2批光橘紅檢出禁用農藥3種，毛橘紅未檢出禁用農藥。1批毛橘紅檢出氯丹，光橘紅檢出常用限用農藥較多。毛橘紅的農藥殘留情況稍好。總體來看，本次27批化橘紅檢出的農藥用途均為殺蟲、殺菌。甲氰菊酯使用率較高。除個別批次外，樣品中農藥檢出品種不多，部分樣品檢出禁用農藥和常用限用農藥，其種植過程中農藥使用情況要注意。為保證化橘紅品質，建議有關部門加強化橘紅種植過程中的科學引導，完善化橘紅種植規范，加強外源性風險管控力度，合理使用低毒農藥，避免禁、限用農藥污染風險。