貴州省民族藥飛龍掌血根質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

陳鳳 程韜 王影超 鄒轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 舒柯

【摘 要】 目的：研究不同產(chǎn)地飛龍掌血根中白屈菜紅堿的含量，為控制飛龍掌血根藥材的質(zhì)量提供理論依據(jù)。方法：采用高效液相色譜法測定飛龍掌血根中白屈菜紅堿含量。色譜柱：Waters Xbridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相為乙腈-1%三乙胺（磷酸調(diào) pH 值 至3）（28∶ 72），柱溫30 ℃，流速：1.0 mL/min，檢測波長：269 nm。結(jié)果：高效液相色譜測定白屈菜紅堿對(duì)照品在0.0598276～0.598276 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=1.0000），平均回收率為99.42%，RSD=1.63%（n=6）;結(jié)論：本研究方法準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，可用于飛龍掌血根質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 飛龍掌血根;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);白屈菜紅堿;含量測定;高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R284.1 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號(hào)】1007-8517（2021）12-0051-03

Abstract：Objective To study the content of chelerythrine in Sanguisorba asiatica from different producing areas，and to provide theoretical basis for the quality control of Radix Scutellariae. Methods The content of chelerythrine was determined by HPLC. The chromatographic column was waters XBridge C18 column （250 mm × 4.6 mm，5 μ m）; the mobile phase was acetonitrile-1% triethylamine （adjusted to pH 3 by phosphoric acid） （28∶ 72）; the column temperature was 30 ℃，the flow rate was 1.0ml/min，and the detection wavelength was 269 nm. Results The linear range of chelerythrine was 0.0598276～0.598276 μg by HPLC （r=1.0000），the average recovery was 99.42%，RSD=1.63%（n=6）.Conclusion The method is accurate，reliable and reproducible，and can be used for the quality control of feilongzhang blood.

Keywords：Toddalia asiatica; Quality Standard; Chelerythrine; Content Determination; HPLC

本品為蕓香科植物飛龍掌血屬Toddalia asiatica（L.）Lam.的飛龍掌血根，全株用作草藥，多用其根，具有活血散瘀、祛風(fēng)除濕、消腫止痛之功效，治療感冒風(fēng)寒、胃痛、肋間神經(jīng)痛、風(fēng)濕骨痛、跌打損傷、咯血等[1]。目前已知飛龍掌血中化學(xué)成分包括呋喃香豆素類、毗喃香豆素類、生物堿類等及其他化學(xué)成分[2]。其中白屈菜紅堿具有具有抗菌、抑菌，清熱解毒、抗菌消炎的作用[3-4]與飛龍掌血根的臨床療效具有相關(guān)性。目前貴州省收載于2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中[5]，僅用其根皮。但是若僅僅使用根皮而不使用根，不僅是對(duì)中藥資源的一種巨大浪費(fèi)，也不利于中藥材的可持續(xù)發(fā)展。因此采用高效液相色譜對(duì)飛龍掌血根中白屈菜紅堿進(jìn)行含量測定，以達(dá)到完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及用藥安全有效，質(zhì)量可控穩(wěn)定，為生產(chǎn)、使用、流通等提供科學(xué)合理數(shù)據(jù)參考。飛龍掌血根生境及性狀如圖1所示。

1 材料與儀器

1.1 儀器 Waters 2695-2998高效液相色譜儀（美國），KQ-500DA超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司），MS204TS型（萬分之一）電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、XP26型（百萬分之一）電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試劑與試藥 乙腈為色譜純，分析甲醇、分析三乙胺、分析磷酸，水為超純水。飛龍掌血根12批樣品;白屈菜紅堿（批號(hào)：111718-201402，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：80.5%）中國食品藥品檢定研究院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相為乙腈—1%三乙胺（磷酸調(diào) pH 值至 3）（28∶ 72）;檢測波長為269 nm;柱溫：30℃;流速：1.0 mL/min;進(jìn)樣量10 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取白屈菜紅堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取飛龍掌血根藥材，粉碎，過三號(hào)篩，混勻，取粉末約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)充減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液，照“色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果供試品與對(duì)照品在相應(yīng)的位置出現(xiàn)色譜峰，色譜圖如圖2所示。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液2 μL、5 μL、8 μL、10 μL、15 μL、20 μL注入高效液相色譜儀器，測定峰面積。計(jì)算回歸方程：y=248，901.4450 x - 5，802.7829，r=1.0000（n=6），表明白屈菜紅堿在0.059828～0.598276 μg的進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10 μL，測定白屈菜紅堿的峰面積，計(jì)算其RSD%為0.66%，結(jié)果表明，儀器精密度好。

2.7 耐用性試驗(yàn) 取同一樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備1份供試品溶液，分別于0、2 h、6 h、10 h、14 h、18 h、24 h各進(jìn)樣10 μL，測定白屈菜紅堿的峰面積，計(jì)算RSD為0.49%，結(jié)果表明，供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣量10μL，測定白屈菜紅堿的峰面積，平均含量0.7987 mg/g，計(jì)算RSD為0.18%，表明該方法重復(fù)性好。

2.9 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取已測定含量的飛龍掌血根藥材樣品（平均含量0.7987 mg/g）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入白屈菜紅堿對(duì)照品（0.016261 mg，具體見表1）20 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并計(jì)算白屈菜紅堿的平均回收率99.42%，RSD為1.63%。見表1。

2.10 不同色譜柱的考察 取同一樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備1份供試品溶液，分別以不同品牌C18色譜柱（Waters Xbridge 、Thermo Fisher、Agilent XDB）各進(jìn)樣10 μL，測定白屈菜紅堿的峰面積，計(jì)算含量，RSD%為0.88%，結(jié)果表明不同品牌十八烷基硅膠膠合硅膠為填充劑的色譜柱對(duì)含量測定無顯著差異。

2.11 樣品含量測定 按上述色譜條件，取不同產(chǎn)地飛龍掌血根“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定白屈菜紅堿的含量，結(jié)果見表2。12批飛龍掌血根藥材中白屈菜紅堿含量測定結(jié)果為0.3274～1.5771 mg/g。

3 討論

通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同產(chǎn)地的飛龍掌血根中白屈菜紅堿的含量存在著明顯的差異，其次即使是同一產(chǎn)地不同采收季節(jié)的含量之間也存在著較大的差異。本實(shí)驗(yàn)建立的方法可以進(jìn)一步對(duì)飛龍掌血根藥材的研究開發(fā)及臨床合理使用，提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。因此在藥用的時(shí)候，應(yīng)該根據(jù)其產(chǎn)地及采收季節(jié)來確定其劑量，以免因其量過多或者過少而影響治療效果。

本次實(shí)驗(yàn)還對(duì)飛龍掌血根莖藥材和飛龍掌血根皮藥材進(jìn)行定位對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們都含有白屈菜紅堿、血根堿、氯化兩面針堿、茵芋堿和茴芹香豆素、異茴芹香豆素，從實(shí)驗(yàn)來看飛龍掌血根和根皮之間的成分差異并不大，但是由于實(shí)驗(yàn)材料采集局限性，無法更加全面系統(tǒng)的對(duì)二者進(jìn)行完整的對(duì)比。在本次實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，下一步將研究飛龍掌血根莖及根皮中有效成分的含量。

本次實(shí)驗(yàn)考察白屈菜紅堿吸收波長，取白屈菜紅堿對(duì)照溶液在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，經(jīng)試驗(yàn)摸索，以269 nm作為檢測波長時(shí)以獲得較高的靈敏度和良好的選擇。故確定白屈菜紅堿的檢測波長為269 nm。研究比較不同流動(dòng)相的洗脫效果，用乙腈-1%三乙胺（磷酸調(diào)pH值至3）（28∶ 72）[6]作為流動(dòng)相。對(duì)不同濃度的甲醇進(jìn)行超聲及回流提取對(duì)比研究，結(jié)果表明，本法選擇甲醇回流加熱30 min效果最好。本實(shí)驗(yàn)對(duì)飛龍掌血根中白屈菜紅堿的含量測定的研究，方法準(zhǔn)確可靠、簡便易行，可用于飛龍掌血根質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2020-11-19 編輯：程鵬飛）