雙環磺草酮水解產物的反相液相色譜分析方法

饒鐳，羅娟，李保同

(江西農業大學 農學院，江西 南昌 330045)

雙環磺草酮(BZB)屬三酮類除草劑[1]，已于2018年在中國正式登記[2]，被廣泛用于控制一年生雜草、莎草、禾本科雜草和闊葉雜草[3-8]，需在淹水的稻田中施用，并迅速水解形成具有除草活性的雙環磺草酮水解產物(BH)[9]。BH具有較高的水解穩定性，且在水中的溶解度隨pH的升高而增大[9-10]。目前有關BZB原藥和制劑的分析方法已有研究報道[11-12]，而有關其水解產物的常量分析方法還未見報道。本文建立了一種測定BH中有效成分含量的分析方法，使用便捷，檢測效果好，可用于BH的定量分析。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

BH標準品(≥98%)、BH原藥(80.2%)均由江西農業大學理學院提供；甲醇、磷酸均為色譜純；超純水。

Agilent 1260高效液相色譜儀；InfinityLab Poroshell 120 EC-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，4 μm)；Eppendorf紫外分光光度計；ATX224萬分之一天平；FST-JY超純水機；KQ2200E超聲波清洗器；0.22 μm 有機濾膜。

1.2 溶液配制

1.2.1 BH標準溶液的配制 用天平準確稱取BH 0.050 0 g(精確至0.000 1 g)標準品，加入 50 mL 的容量瓶中，用甲醇溶解，超聲水浴助溶，至BH完全溶解，在室溫下冷卻，用甲醇定容后搖勻，得到BH(1 000 mg/L)標準母液，冰箱冷藏備用。色譜測定前將BH母液稀釋成50 mg/L的標準品溶液。

1.2.2 BH試樣溶液的配制 準確稱取BH 0.062 0 g(精確至0.000 1 g)原藥樣品，溶液配制方法同BH標準母液的配制。

1.3 液相檢測條件

流動相使用體積比為55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)體系，流動速度0.83 mL/min，色譜柱溫度為40 ℃，每針進樣體積為10 μL，檢測波長286 nm，BH標準品的相對保留時間為5.423 min。

1.4 色譜測定

用2.5 mL一次性注射器將BH標準品和試樣溶液(均為50 mg/L)通過0.22 μm有機濾膜注入到進樣瓶中，待G1311C四元泵的壓力穩定和G1315D全波長紫外檢測器的基線平穩后，在液相色譜檢測條件下，對同一BH標準品溶液連續多次進樣，至相鄰兩次進樣BH峰面積的變化值在1.5%內時，采用外標定量法，根據BH標樣→BH試樣→BH標樣→BH試樣的進樣順序對BH進行分離檢測，BH的色譜圖見圖1。

圖1 BH色譜圖Fig.1 BH chromatogram

使用HPLC對BH標準品和試樣溶液進行多次檢測，峰面積取平均值，試樣溶液中BH的質量分數W2(%)按照如下公式計算：

式中A1和A2——分別為HPLC檢測的BH標樣和試樣的均值峰面積；

M1和M2——分別為稱量的BH標準品和原藥的質量，g；

W1——BH標準品的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

將BH的標準母液使用甲醇稀釋成1 mg/L標樣溶液，在紫外分光光度計上進行全波長掃描，得到BH的吸收光譜圖，見圖2。

圖2 BH紫外吸收譜圖Fig.2 BH UV absorption spectrum

由圖2可知，在286 nm處BH有最大吸收。在此波長下對BH進行色譜分析，發現標樣和試樣中的雜質不影響BH的測定。因此，選定286 nm作為檢測BH的波長。

2.2 色譜條件的優化

首先，對乙腈-水和甲醇-水體系作為流動相進行測試，發現使用乙腈-水體系為BH的流動相時，存在溶劑效應，BH色譜峰前沿嚴重；采用甲醇-水體系作流動相時溶劑效應較小，但色譜峰的相對保留時間在2 min之內，峰形不勻稱。因此，反復測試不同體積比的甲醇-甲酸水和甲醇-磷酸水作為流動相以及調節流速對保留時間和色譜峰峰形的影響，發現當流動相使用體積比為55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)體系、流動的速度為0.83 mL/min，色譜柱的檢出溫度為40 ℃時，BH的保留時間適中，峰形對稱，雜質干擾較小。因此，確定此條件作為BH檢測的色譜條件。

2.3 線性相關性和檢出限的測定

BH標準溶液用甲醇進行逐步稀釋，配制成0.01～50 mg/L的系列標準溶液，定量分析采用1.3節中的色譜條件，用Excel 2013對所測得數據進行線性擬合，結果見圖3。得到BH的線性回歸方程為y=23.423x+0.785 9，R2=1，說明BH在質量范圍濃度在0.01～50 mg/L內的線性相關性良好。

圖3 BH標準曲線Fig.3 BH standard curve

根據液相檢測器產生的響應信號是噪聲值的3倍 值(即S/N=3)來估算BH的最小檢出限(LOQ)，得到BH的LOQ為4 μg/L。

2.4 方法精密度的測定

BH原藥樣品稱量5份，配制BH的試樣溶液，并將BH的質量濃度稀釋至線性范圍內，定量分析按照1.3節中的色譜條件進行，結果見表1。

表1 BH精密度測定結果Table 1 BH precision measurement results

由表1可知，計算后得到BH的平均質量分數為80.224%，標準偏差為0.139，變異系數為0.173%，小于CIPAC中規定的標準。

2.5 方法準確度的測定

方法準確度采用加標回收率進行評價，分別稱取5份已知質量的BH原藥樣品于50 mL容量瓶中，每個容量瓶中分別添加一定質量的BH標準品，色譜純甲醇溶解、定容，并將BH的質量濃度稀釋至線性范圍內，定量分析按照1.3節中的色譜條件進行，結果見表2。

表2 BH準確度測定結果Table 2 BH accuracy measurement results

由表2可知，BH的加標回收率為99.44%～101.20%。BH平均加標回收率值為100.35%。

3 結論

建立了一種利用高效液相色譜檢測BH原藥的定量分析方法。色譜柱溫度為40 ℃，流動相使用體積比為55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)體系，流動的速度為0.83 mL/min，檢測波長286 nm。在此色譜條件下，建立的BH分析方法具有使用便捷、保留時間適中、峰形對稱，且方法的精密度及準確度高，可用于BH原藥的質量檢測。