禽致病性大腸桿菌clpV基因缺失株的構(gòu)建及其對Ⅰ型菌毛主要基因表達(dá)的影響

鐘昊然，王培莉，陳艷飛，孟 霞，朱國強(qiáng)，李建基，崔璐瑩，董俊升，王 亨*

(1.揚(yáng)州大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院，江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 揚(yáng)州 225009；2.教育部農(nóng)業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品安全國際合作聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，江蘇 揚(yáng)州 225009)

禽致病性大腸桿菌(avian pathogenicEscherichiacoli,APEC)是我國禽大腸桿菌病的主要感染病原之一，至今尚無科學(xué)有效的防治措施[1]。APEC與新生兒腦膜炎大腸桿菌(neonatal meningitisE.coli,NMEC)的毒力基因存在高度同源性，且已有APEC TW-XM菌株能引起禽腦膜炎的報(bào)道[2-3]。隨著集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，APEC已成為一種潛在的人獸共患病原菌，有使嬰兒感染新生兒腦膜炎的潛在風(fēng)險(xiǎn)，具有重要的公共衛(wèi)生意義[4]。大腸桿菌作為革蘭陰性菌，可釋放一種多功能殺傷性武器T6SS(type Ⅵ secretion system,T6SS)，它能通過分泌效應(yīng)蛋白作為武器攻擊靶細(xì)胞從而參與致病過程[5]。ClpV是一種拆解T6SS的元件，可允許細(xì)胞在ATP的驅(qū)動下完成T6SS的回收和組裝[6]。研究證實(shí)ClpV在假單胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)[7]的致病性方面有著重要作用，但ClpV在APEC腦膜炎的致病過程中發(fā)揮何種功能卻鮮有研究。

Ⅰ型菌毛是眾多革蘭陰性致病菌的表面附屬結(jié)構(gòu)，是主要的黏附因子，在細(xì)菌侵入機(jī)體的過程中扮演著重要角色[8-9]。已有研究表明，在E.coliK1所引起的新生兒腦膜炎中，Ⅰ型菌毛的黏附起決定性作用[10]。雖然T6SS與Ⅰ型菌毛均參與新生兒腦膜炎的致病過程，但兩者之間的聯(lián)系還有待進(jìn)一步詮釋。本研究利用Red同源重組系統(tǒng)，成功構(gòu)建了TW-XM菌株T6SS中的clpV基因缺失株與回補(bǔ)株，進(jìn)一步探究了clpV基因?qū)Β裥途铣傻挠绊懀瑸楹罄m(xù)研究APEC致腦膜炎的機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。……