牛黃體細胞與卵泡顆粒細胞差異基因的篩選

孟金柱，吳震洋，安清明，趙園園

(銅仁學院，貴州 銅仁 554300)

雌性動物卵泡顆粒細胞(GCs)通過特異表達細胞色素P450芳構化酶(CYP19A1)，將膜細胞(TCs)分泌的雄激素轉化為雌激素(E2)，從而促進優勢卵泡發育成為排卵卵泡[1]。排卵卵泡在促黃體素(LH)峰的作用下發生破裂，卵丘-卵母細胞復合體得以釋放，而卵泡壁上的GCs和TCs分別分化成為大黃體細胞(LLCs，直徑大于25 μm)和小黃體細胞(SLCs，直徑12～25 μm)[2]。在牛和羊卵巢上，LLCs和SLCs都可以分泌孕激素(P4)，但LLCs由于對LH有一定的類固醇生成反應，因此其分泌P4的能力是SLCs的20倍[3-4]。

通過高通量測序技術對牛不同大小卵泡中GCs和TCs進行基因表達譜分析，發現GLDC、MGARP、GPX3、CHST8等細胞外基質基因是GCs的潛在標記物[5]。對不同品種的牛在不同溫度應激下的卵母細胞和卵丘細胞進行高通量測序表明，不同牛品種的卵母細胞在組織和細胞死亡方面存在很大差異；在卵丘細胞中，品種和溫度都會影響mRNA的豐度，涉及細胞組織和氧化應激[6]。目前，有文獻報道了牛GCs和TCs在黃體生成素(LH)峰和卵泡內前列腺素峰出現時的短期變化[7]，但從卵泡到黃體的轉變機制尚不明晰。本研究通過篩選GEO數據庫GSE83524 RNA-seq表達譜中LLCs和GCs之間的差異表達基因，應用生物信息學分析結合實時熒光定量PCR驗證，為詳述這2種細胞在卵巢生理學中的功能、深入研究細胞特異性及GCs細胞向LLCs的分化機制奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料在貴州省銅仁市萬山區肉牛屠宰場選取10頭健康思南黃牛，屠宰后摘除卵巢，迅速置于4℃滅菌杜氏磷酸緩沖液(DPBS)中并運回實驗室?！?br>