牛奶淀粉樣蛋白A的原核表達(dá)及單克隆抗體制備

張正榮，郭晨瑤，陳詩(shī)勝，趙亞男，任建鸞，湯 芳，薛 峰*，戴建君,2

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物健康與食品安全國(guó)際合作實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京210095；2.中國(guó)藥科大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 南京 211198)

奶牛乳腺炎(bovine mastitis)又稱為奶牛乳房炎，是一種影響奶牛健康的主要疾病，乳腺炎導(dǎo)致牛奶產(chǎn)量減少、治療開支負(fù)擔(dān)加重，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致奶牛被淘汰，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)、乳品業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1-3]。乳腺炎通常通過諸如加利福尼亞乳腺炎測(cè)試(CMT)、對(duì)體細(xì)胞計(jì)數(shù)(SCC)的實(shí)驗(yàn)室分析或乳汁病原微生物檢測(cè)法來診斷[4-5]。乳汁病原微生物檢測(cè)法是目前對(duì)于奶牛乳房炎檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，缺點(diǎn)在于該方法較為復(fù)雜繁瑣、耗時(shí)較長(zhǎng)、成本較高,急需研究和開發(fā)更加靈敏可靠的奶牛乳腺炎預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物。目前，乳汁急性期蛋白、乳酶、乳成分等指標(biāo)，以及血常規(guī)指標(biāo)已經(jīng)成為這方面的研究熱點(diǎn)[6]。

急性期反應(yīng)期蛋白(acute phase protein,APP)是在壓力、外傷、感染或炎癥等刺激激發(fā)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生的早期蛋白[7-8]。血清淀粉樣蛋白A(SAA)是一種具有多種蛋白質(zhì)種類的APP，主要在肝臟遭受急性刺激時(shí)產(chǎn)生，它的主要同種型為SAA1、SAA2和SAA3，其中SAA1和SAA2主要在肝臟中產(chǎn)生，而SAA3在肝外部位產(chǎn)生，且主要在牛奶中發(fā)現(xiàn)，被稱為乳腺相關(guān)淀粉樣蛋白A(M-SAA3)[9]。SAA和M-SAA3一起被稱為牛奶淀粉樣蛋白A(MAA)，可在牛奶樣品中進(jìn)行測(cè)量。目前研究發(fā)現(xiàn)，在奶牛發(fā)生隱性乳腺炎期間，奶牛乳中MAA含量顯著升高，牛奶中這種蛋白質(zhì)的水平可作為奶牛乳腺炎感染的敏感指標(biāo)[10-13]。目前對(duì)于奶牛中MAA的相關(guān)研究與檢測(cè)較少，現(xiàn)有的成熟的檢測(cè)方法只有ELISA法[14-15]。……