永生化犬骨髓間充質干細胞株的建立

陳奕靜，戴鵬秀，張露文，李佳鍇，張翊華

(西北農林科技大學 動物醫(yī)學院，陜西 楊陵 712100)

近年來，越來越多的家庭開始重視寵物的健康，雖然現代寵物醫(yī)療有了很大的提高，但仍有許多嚴重的疾病不能通過臨床治療手段解決。干細胞療法是臨床實踐中的創(chuàng)新,間充質干細胞(MSCs)位于受損部位，分化為組織特有的細胞，并有助于組織修復[1]。利用骨髓間充質干細胞(BMSCs)進行臨床疾病治療是具有廣闊前景的研究領域[2]。與其他干細胞的不同之處在于，它們不僅可分化為相同的中胚層譜系，如骨骼、軟骨和脂肪細胞，而且還可分化為其他外胚層和內胚層譜系[3]，因此，BMSCs是成體干細胞的獨特類型。

BMSCs具有多向分化潛能、免疫原性及歸巢能力，并且取材較為方便，動物骨髓可再生，因此是組織工程種子細胞的首要選擇[4]。但BMSCs在骨髓中含量非常有限，體外培養(yǎng)周期短，如果不能盡快使用成功分離的BMSCs，待其傳過多代后，各項性能將會明顯下降，無法進行下一步研究和應用[5]。建立永生化細胞株可以使體外培養(yǎng)的細胞無限繁殖并且細胞間不存在差異。自發(fā)性永生化幾率十分小，可利用基因轉染等技術提高永生化的發(fā)生率，以此來建立永生化細胞株。因此，本試驗將構建好的pLOX-Ttag-iresTK慢病毒載體包裝后感染犬cBMSCs，連續(xù)培養(yǎng)傳至50代，并通過細胞形態(tài)觀察、細胞計數、RT-qPCR基因表達分析、Western blot以及流式和三系分化鑒定，建立永生化犬骨髓間充質干細胞(cBMSCs)，為臨床疾病治療研究提供材料。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和試驗材料質粒pLOX-Ttag-iresTK、pLP/PsPAX、pLP/VSVG(Addgene公司)；……