部分地區豬細環病毒1型感染的流行情況調查

王 園 ，師 錦 ，謝曉妍 ，陳丙生 ，周雙海 ＊

（1.北京農學院動物科技學院，北京 102206；2.大興區畜牧技術推廣站，北京 102602）

豬細環病毒（Torque teno sus virus，TTSuV）是近年來發現的又一種很小的單股環狀DNA病毒，屬于指環病毒科，最早于1999年報道在豬體內檢出。目前TTSuV有TTSuV1和TTSuV2兩種血清型，已有研究報道顯示，TTSuV1單獨感染可引起仔豬出現一定的病理變化[1]，TTSuV1與豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）或豬圓環病毒2型（PCV2）共同感染可促進豬皮炎與腎病綜合征或斷奶后多系統衰竭綜合征的發生[2-3]，提示TTSuV1具有潛在致病性，同時也提示TTSuV1與PRRS或豬圓環病毒病發生之間可能存在一定關聯性。有報道顯示TTSuV1在臨床上的檢出率比較高[4]；同時，在當前的國內規模化豬場，PRRSV感染與PCV2感染都非常普遍，PRRS與豬圓環病毒病也都時有發生，是當前危害養豬生產的2種主要傳染病。因此，為了更加有效地防控PRRS與豬圓環病毒病，有必要了解當前規模化豬場中TTSuV1感染的流行情況。

1 材料與方法

1.1 臨床樣品來源

京津冀地區、華東地區、華南地區15個規模化豬場578頭斷奶仔豬血清均采集分離于2020年。

1.2 主要實驗材料

檢測TTSuV1抗體的ELISA試劑由北京農學院動物疫病研究室提供[5]，病毒DNA提取試劑盒與PCR試劑分別為天根生化科技（北京）有限公司與北京康為世紀生物科技有限公司產品，檢測TTSuV1核酸的引物（上游引物序列為5′-CGGGTTCAGGA GGCTCAATT-3′、下游引物序列為5′-GCCATTCGGAACTG CACTTACT-3′）[5]由生工生物工程（上海）有限公司合成。

1.3 實驗方法

病毒抗體檢測與病毒DNA提取按照其試劑盒說明書操作。病毒核酸檢測采用PCR方法。病毒DNA提取按照其試劑盒說明書操作；PCR擴增采用20 μL反應體系，其中含有10 pmol上游引物、10 pmol下 游 引 物、5 μL病 毒DNA；PCR增程序為：95 ℃ 3 min，95 ℃ 25 s、55 ℃ 25 s、72 ℃ 25 s、共40次循環，72 ℃ 9 min；PCR產物分析是在PCR擴增結束后，取10 μL擴增產物置于1.8%瓊脂糖凝膠上電泳，之后在凝膠成像儀上觀察是否有特異性目的條帶。

2 結果與分析

檢測了國內部分地區15個豬場的578頭保育豬，病毒核酸與抗體檢測結果（表1）顯示，豬細環病毒1型的核酸與抗體的豬場陽性率均為100%；核酸陽性率介于14.29%～100%之間，總體陽性率為73.88%；抗體陽性率介于14.29%～100%之間，總體陽性率為78.55%；雖然抗體總體陽性率高于核酸總體陽性率，但二者之間并無顯著差異（P＞0.05）。

表1 病毒核酸與抗體檢測結果

比較分析同一個豬場的病毒核酸陽性率和病毒抗體陽性率后發現，僅有1個豬場的兩種陽性率正好相等，而絕大多數豬場的兩種陽性率并不完全一致，其占比達到93.33%（14/15）；其中，病毒抗體陽性率高于病毒核酸陽性率的有60%（9/15），而病毒核酸陽性率高于病毒抗體陽性率的只有33.33%（5/15）。進一步分析發現，大多數豬場的病毒核酸陽性率和病毒抗體陽性率都超過50%，占比達到86.67%（13/15），其中超過80%的占53.33%（8/15）；都低于50%的僅占13.33%（2/15），其中1個豬場都低于20%。

3 討論

目前國內檢測豬細環病毒1型（TTSuV1）感染絕大多數采用PCR方法，但此方法是通過檢測病毒核酸來直接檢測病毒，這對正處于病毒感染階段且體內具有一定病毒含量的個體是易于檢出的，但對感染過程已經結束或者感染雖然持續存在但體內病毒含量很低的個體則難以檢出，而抗體檢測則可以解決這個難題，故兩種方法聯合使用無疑會使檢測結果更加全面和準確。聯合應用PCR方法和ELISA方法對來源于京津冀、華東六省、華南兩省共11個省市15個規模化豬場的578份血清的檢測結果顯示，核酸與抗體的豬場陽性率都是100%，充分顯示所有檢測豬場均存在TTSuV1感染。檢測個體核酸的總體陽性率為73.88%，檢測個體抗體的總體陽性率為78.72%，雖然兩種方法的檢測結果之間存在一定差別，但沒有顯著性統計學差異，說明兩種方法的檢測結果基本一致。

進一步分析發現，TTSuV1感染率超過50%以上的豬場達到85%以上，超過80%的豬場占50%以上，而低于20%的豬場不足10%。王礞礞等[6]對2008—2009年7個省份的258份樣品進行PCR檢測后發現TTSuV1感染率為37.6%，李俊等[7]對2009—2010年山東省10個豬場的230份樣品進行PCR檢測后發現TTSuV1感染率為45.2%，王俊等[4]對2014年京津地區的60份斷奶仔豬樣品進行熒光定量PCR檢測后發現TTSuV1感染率為36.7%，這些資料顯示前些年TTSuV1在我國不少地區豬群中已有不低的感染率，此次調查顯示出更高的TTSuV1感染率，進一步說明TTSuV1在我國不少地區豬群中廣泛流行。一些文獻報道TTSuV1與PRRSV或 PCV2共同感染可促進相關疾病發生[2-3]，豬圓環病毒病豬體內TTSuV1載量明顯高于健康豬[8]，臨床感染了TTSuV1的仔豬對PRRS疫苗的免疫反應明顯降低[9]，這些文獻綜合提示TTSuV1感染具有潛在協同致病性。因此，在當前PRRSV感染與PCV2感染都普遍流行的背景下，臨床上TTSuV1的高感染率值得適當關注。