肝細胞癌患者血清外泌體LncRNA ZFAS1表達的臨床意義*

徐 鵬 李 偉 梁興東

柳州市人民醫院，廣西 柳州 545000

肝癌細胞(HCC)是我國常見惡性腫瘤疾病，近些年來，該病發病率呈逐年上升趨勢，每年約有360,000例新發病例和350,000例死亡病例[1-2]。有關研究表明，LncRNA SNHG15于甲狀腺癌組織呈上調，主要通過對細胞增殖分化促進其在癌變組織中發揮作用[3]。另有研究表明，LncRNA鋅指蛋白反義鏈1(ZFAS1)于結腸癌血清中高表達，其通過促進內皮細胞生長和結腸癌發病過程[4]。本研究現于本院住院治療HCC患者作為本次研究對象，并與健康人員進行對照研究，同時予以檢測HCC患者血清外泌體中LncRNA ZFAS1表達水平，報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 研究對象由2019年3月至2020年4月于本院住院治療60例HCC患者(實驗組)及另同時期60例健康體檢患者(對照組)，對照組35～71歲，平均(53.69±1.04)歲，男25例，女35例，實驗組34～72歲，平均(54.01±1.74)歲，男29例，女31例，兩組HCC一般資料呈正比，P>0.05。

1.2方法

1.2.1血清外泌體提取與鑒定 對兩組患者均采取10ml靜脈血，4℃3000r/min離心10min(r=10cm)，用于提取外泌體。外泌體依據美國Exo QuickTM試劑，獲取血清外泌體蛋白，進而獲取外泌體樣本，將其經磷鎢酸染色后于透射電鏡下觀察其顆粒形態。

1.2.2熒光定量聚合酶鏈式反應檢測HCC患者血清外泌體LncRNA ZFAS1表達 主要采用總RNA提取試劑盒提取血清外泌體LncRNA ZFAS1，以瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA完整性與純度。依據Real-time反轉試劑盒說明，將LncRNA ZFAS1反轉錄為cDNA，操作時依據qRT-PCR試劑說明加配合反應體系。待體系加配完成后放置Bio-Rad熒光定量PCR儀器進行放音，其程序設為95℃30s，95℃15s，60℃15s，72℃15s，一共40個循環，72℃延伸為9分鐘，待結束后將數據進行收集，且對其Ct值進行分析。隨后應用2-ΔΔCt算法對LncRNA ZFAS1表達量進行計算。

1.3觀察指標 血清外泌體中LncRNA ZFAS1在HCC患者中的表達水平。

2 結 果

實驗組患者血清外泌體中LncRNA ZFAS1表達水平明顯高于對照組，差異顯赫，P<0.05，見下表1：

表1 相較2組血清外泌體中LncRNA ZFAS1表達水平

3 討 論

HCC臨床常見惡性腫瘤，具有生長快速、浸潤性強以及早期即發生轉移特點。目前，有關研究表明，丙型、乙型肝炎病毒感染、飲酒以及遺傳性人體代謝物均可導致其誘發HCC[5]。AFP為早期診斷HCC血清標志物，但因特異性較低，易出現誤診與漏診現象，對此，臨床需尋找更為有效的新分子標志物，將HCC診斷與預后改善情況提高，具有重要意義。

外泌體由細胞內多泡體與質膜融合而成，大小約100～200um雙膜微泡[6]。由腫瘤細胞分泌的外泌體其攜帶腫瘤細胞特異性標志物，其與內容物和腫瘤微環境有關，通過其對外泌體物組成部分進行分析，能夠直接貨物癌細胞相關信息，是腫瘤診斷新方式[7]。由最新研究報道，LncRNA ZFAS1在肝癌患者血清外泌體中升高，可表示為血清外泌體內容物較血清因子更具有臨床價值意義。對此，本研究現探討血清外泌體中LncRNA ZFAS1水平在肝癌細胞中的意義。LncRNA為一類非編碼RNA，普遍存在于細胞質內和細胞核中。隨著功能基因學的發展，研究發現多種LncRNA主要通過對基因表達進行調控，將使翻譯、基因轉錄和蛋白質修飾具有影響，并能夠參與正常生理過程與疾病發展。以往研究表明，LncRNA SNHG15于甲狀腺癌細胞中高表達能夠阻滯癌細胞增長，表明LncRNA SNHG15在甲狀腺癌中占據重要作用。由本研究結果可知實驗組患者LncRNA ZFAS1水平明顯高于對照組，且與吳鋒[8]等學者研究結果相一致，進一步提示LncRNA ZFAS1參與HCC發病過程。

綜上所述，血清外泌體LncRNA ZFAS1在HCC患者中表達上調，與其發展進程與預后有關，且為尋找新的診斷標志物提供依據。