安神補腦膠囊中制何首烏和淫羊藿的薄層色譜鑒別*

周 峰，江 勛，彭婷婷

（湖南省衡陽市市場監督檢驗檢測中心，湖南 衡陽 421001）

安神補腦膠囊由安神補腦片劑型改良而來，由鹿茸、制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草、大棗經提取后加入維生素B1精制而成，臨床用于治療神經衰弱、失眠、健忘、頭暈等癥［1－2］。安神補腦片執行標準為《國家藥品監督管理局標準（試行）》WS－11154（ZD －1154）－2002。安神補腦膠囊可促進大鼠腦組織核酸合成［3］，對樟柳堿模型小鼠的學習記憶障礙也有明顯改善作用［4］。目前，全國共有4 家藥品生產企業擁有安神補腦膠囊的批準文號，其質量標準均為企業參照國家食品藥品監督管理局標準（YBZ15322009，YBZ02542009，YBZ06762009，YBZ08452009）制訂。但上述標準中的薄層色譜鑒別均缺乏對處方中主藥制何首烏及淫羊藿的有效控制，不能全面體現安神補腦膠囊中復雜成分的可控性。為此，本研究中建立了以何首烏、淫羊藿為對照藥材，以及二者中特征性成分 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯 －2－ O－β－ D 葡萄糖苷、淫羊藿苷為對照品的薄層色譜法，旨在完善安神補腦膠囊的質量標準。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240S 型電子分析天平（瑞士梅特勒－托利多有限公司，精度為 0.1 mg）；DK － 615HT 型超聲清洗儀（深圳市得康洗凈電器有限公司，功率為360 W，頻率為40 kHz）；XMTD－4000 型八孔電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫療器械廠）；ZF－20C 型暗箱式自動紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）。

1.2 試藥

何首烏對照藥材（批號為120934－201410），淫羊藿對照藥材（批號為 121632 －201502），2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷對照品（批號為110844 －201814，純度為 91.0%），淫羊藿苷對照品（批號為 110737－201516，純度 94.2%），均購自中國食品藥品檢定研究院；薄層色譜預制硅膠G 板（德國Merck公司，批號為HX69481826）；實驗用水為屈臣氏蒸餾水（批號為20190910C），其余試劑均為分析純。安神補腦膠囊樣品來源見表1。

表1 安神補腦膠囊樣品信息Tab.1 Information of Anshen Bunao Capsules

2 方法與結果

2.1 制何首烏

取樣品內容物10 粒，研細，取1 g，精密稱定，加70%甲醇30 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液回收溶劑至干；殘渣加水20 mL 使溶解，用乙醚振搖提取2 次，每次25 mL，合并乙醚提取液，回收溶劑至干；殘渣加甲醇1 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材1 g，精密稱定，加甲醇10 mL，超聲處理15 min，靜置，取上清液作為對照藥材溶液。取 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg 的溶液，作為對照品溶液。另取不含制何首烏的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。照2015 年版《中國藥典（四部）》通則0502 項下薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯 － 甲醇 － 甲酸（25 ∶1 ∶1，V ／ V ／ V）為展開劑，展開，取出，晾干，于紫外光燈（365 nm）下檢視。結果供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1 A。

2.2 淫羊藿

取樣品內容物10 粒，研細，取1 g，精密稱定，加熱水20 mL，超聲處理20 min，放冷，離心，取上清液，加乙酸乙酯提取 2 次，每次 20 mL，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿對照藥材0.5 g，精密稱定，溫浸30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇使溶解，作為對照藥材溶液。取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。另取不含淫羊藿的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制陰性對照品溶液。照2015 年版《中國藥典（四部）》通則0502 項下薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯－丁酮 － 甲酸 － 水（10 ∶1 ∶1 ∶1，V ／ V ／ V ／ V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。結果供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1 B。

圖1 薄層色譜圖S.Reference solution S1. Reference material solution S2.Negative reference solution 1 － 11. Test solutionA. Polygoni Multiflori Radix Praeparata（UV lamps，365 nm） B. Epimedium brevicornuFig.1 TLC chromatograms

3 討論

參考《中國藥典（一部）》安神補腦液及文獻［5－10］，確定 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯 －2 － O － β－ D 葡萄糖苷和淫羊藿苷分別為制劑中制何首烏和淫羊藿2 味主藥的指標性功效成分。選擇何首烏及 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷、淫羊藿及淫羊藿苷作為薄層色譜鑒別的指標性成分，特征性強，有利于制劑的質量控制。

制何首烏薄層色譜鑒別中，曾參考2015 年版《中國藥典（一部）》制何首烏藥材［11］176鑒別項下的方法，于紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品溶液與對照藥材溶液均顯淡黃色熒光斑點，但 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯 －2－ O－ β－ D 葡萄糖苷對照品溶液無斑點出現；參考成方制劑安神補腦液項下［11］884制何首烏的薄層色譜鑒別及文獻［12］，調整提取方法與展開劑，經優化，制訂了制何首烏的定性鑒別方法。該方法操作簡單，且可同時監測制何首烏藥材中多種標志性成分，專屬性強，斑點清晰，分離效果好，紫外光燈（365 nm）下檢視操作簡單，穩定性及重復性均好，陰性對照無干擾，可用于安神補腦膠囊中制何首烏的定性鑒別。

現行4 個企業標準中淫羊藿的薄層色譜鑒別方法差異大，且部分標準缺乏淫羊藿對照藥材的參考。本研究結果表明，各廠家的供試品色譜圖中淫羊藿苷斑點清晰度差距明顯，可反映不同企業樣品中淫羊藿苷的含量差異［13］，利于對不同廠家的產品進行質量控制與橫向對比。本研究中最終確定的方法能同時檢測不同廠家生產的安神補腦膠囊，且斑點清晰，分離效果好，陰性對照無干擾，適用于不同廠家生產的安神補腦膠囊的質量控制。